肺表面活性物质(PS)替代疗法已成功应用于新生儿呼吸窘迫综合征等许多呼吸系统疾病的治疗。 目前常用的玲制剂(主要成分是脂质和PS相关蛋白)是从动物肺脏中提取的。因其含有异种蛋白 ,会产生免疫反应
。实验液体的脂质浓度为10州时。将实验液体加人张力计的测 定室(容量为乃川),加温至37℃后,在实验液中作一个半径为0.40一0.55~的气泡, 然后让气泡作扩大和缩小的运动,运动5而n时测出半径最小时的表面张力(最小表面张力,下而n)和半径最大时的表面张力(最大表面张力,下~)。每一被检液体测定5次。动物实验将交配26d的妊娠兔(日本白兔,足天妊娠为3ld)用戊巴比妥钠麻醉后,行剖宫产术 娩出胎兔。测定胎兔的体重,腹腔内注人0.smg戊巴比妥钠麻醉,经气管切开插人18号金属 导管。将同腹的其它胎兔(2一10只)依次娩出,进行上述操作。经金属导管向胎兔肺内注人0 .1耐的实验液体,实验液体的脂质浓度配制为50m创时。将动物随机分为4组(每组9只): PS组、SL组、RS一3组和对照组,分别向玲组、SL组、RS一3组动物气道内注人PS、 sL、RS一3液,对照组未注人任何物质。操作完毕后,将胎兔放人气密的体积描记器内(温度 维持在37℃){z了。向胎兔腹腔内注人潘库澳馁o.02mg后进行间歇正压通气。经改造的人工呼吸机(servo900B,siemens·Elelna,阮Ina,瑞典)为定压式,最大吸气压设定在25c m残0,呼吸次数为40次/面n,吸呼比为l:1,吸人氧浓度为1(X)%。通气后5、10、15、20而n测定潮气量。统计学分析计量资料以均数士标准差(万土,)表示,用statvlew 5 .0软件包进行单因素方差分析,组间和组内比较使用Sche倪多重比较。尸<。.05为差异有显著性。结果 PS的了而n为(0.9士0.3)nlNlm,不含SP-C的合成脂质SL的了而n为(22. 6土1.3)InNlm,明显高于PS(尸<0.01)。随SP一C浓度的增加,下而n的值逐渐减小,含3%SP-C的RS一3的y而n为(0.7士0 .1) mN/m,与邢组相比差异无显著性(见图1)。PS组SL组RS.l组RS一2组RS一3组 圈l各组实验液体的最小表面张力 与飞组相比,口,p<0.01 PS的7~为(29.9土1.0)mNlm,SL的下叮切区为(63 .1土4 .5)mNlm,明显高于PS(P<0 .01)。随SP一C浓度的增加,下~的值逐渐减小,RS一3组的下~为(37.2土8.7)mNlm,与玲相比差异无显著性(见图2)。 各组实验动物之间体重差异无显著性。各组动物的潮气量见图3。PS组、RS一3组的潮气量都随 时间逐渐增加。通气20而n时,PS组、RS一3组的潮气量分别达到(25土7)耐kg、( 25士4)耐kg。在5、10、15面n时玲组、RS一3组与对照组、sL组相比差异均有显 著性(尸<0.05),在20而n时差异有显著性(p<0.01)。sL组潮气量在通气20 而n时仍不足5.0耐kg,对照组潮气量在通气的全过程中不足2.0心kg,sL组与对照组之间差异无显著性。言泛.︶只嵌恤娜杖暇SL组RS一1组RS一组HS一3组各组实验液体的最大表面张力实验液体组与玲组相比,口.p<0013O25加1510 匀砚蔺︶喇犷班10时间(面n)1520 圈3各组实脸动物的潮气量变化与对照组和SL组相比,.P<0.05.’尸<0.01讨论 PS存在于肺泡被授层的气液界面中,是由肺泡n型细胞合成的脂质蛋白质复合物,其中脂质包括磷脂、脂肪酸和中性脂质,蛋白质为PS相关蛋白。 脂质中以DPPC的含量为最多,DPPC是减小表面张力的主要成分。但因其相转变温度是41℃ ,即在41℃时才能由固态转变为液态凝胶状从而发挥其表面活性作用,所以在正常体温(37℃ )时必须加人某些磷脂质使其相转变温度低于37℃,这样在正常体温时DPpC也能吸附到气液界面上发挥其表面吸附作用闭。故本实验将DppC和DOPc、印PG按比例混合,构成合成脂质。PS相关蛋白在PS中所占的比例不大,但能显著促进磷脂质膜的表面吸附和表面扩散,特别是疏水 性蛋白SP-B与SRC可选择性地促进DPPC的吸附,并在表面膜上选择性地将DPPC以外 的脂质成分挤出表面膜,从而增强表面膜的形成闭,对于磷脂质表面活性的发挥是不可缺少的。本次实验中仅选用SP-C与合成脂质进行重组,并探讨其活性。SRC含有35个氨基酸,其中由26个氨基酸形成疏水性a螺旋结构;另外9个氨基酸形成亲水性 部分,其中第5、6位上的半胧氨酸分别以硫醋的形式与棕桐酞基结合,形成棕搁酞侧链。棕搁酞 基与a螺旋结构在SP-C的生理作用中起重要作用。通过使用气泡型表面张力计和Wi场el卿 balance测定,wang等<6l发现棕桐酞侧链的存在使玲的表面活性明显增强。太田等 t7>报道,a螺旋结构与玲增加潮气量的作用有很大关系。表面活性物质通过磷脂质形成界面膜 来防止肺泡萎陷,但是如果只有磷脂质,就会形成微团(而celle),难以形成界面膜。肺泡 扩张时(吸气时)形成界面膜的磷脂质,在肺泡收缩时(呼气时),随面积的减小形成双重膜。此 时,SP-C的a螺旋结构部分和棕搁酞基可能插人双重膜中形成“桥”样结构,阻止微团的形成 ,从而发挥PS的表面活性作用。本次实验表明,SP-C明显增强重组PS的生理活性,且含3%SP-C的重组PS的活性最好,并在未成熟胎兔的实验中得到验证。综上所述,不含SP-C的合成脂质表面活性低,不能降低表面张力、不能增加未成熟动物的潮气量 ;加人SRC后构成的重组玲,其表面活性增强;加人3%SP一C时活性明显增强,接近天然P S的表面活性,能明显增加未成熟动物的潮气量。SP-C对重组肺表面活性物质活性的影响@薄玉龙!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科
@李文志!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科
@徐咏梅!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科
@林长赋!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科
@马玉娟!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科
@张瑞芹!150086$哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科肺表面活性剂;;蛋白质C;;表面 张力;;潮气量目的探讨不同浓度的肺表面活性物质(PS)相关蛋白C(SP-C)与合成脂质 构成的重组PS活性的变化。方法从新鲜猪肺的灌洗液中提取PS,从PS中分离出SP-C。将 二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱和棕榈酰油酰磷脂酰甘油按60:20:20的重量比混 合,即为合成脂质(SL),将SP-C按1%、2%、3%(与脂质的重量比)加入SL中,制 成三种重组PS:RS-1、RS-2和RS-3。将上述物质溶于生理盐水中即为实验液体。用 气泡型表面张力计测定各实验液体的表面张力。将PS缺如的未成熟胎兔随机分为4组:PS、S L、RS-3和对照组。分别向PS、SL和RS-3组气道内注入PS、SL、RS-3液;对 照组未注入任何物质。然后进行人工通气,通气后5、10、15、20min测定各组潮气量。 结果PS的最小表面张力(γmin)为(0.9±0.3)mN/m,SL的γmin为(22 .6±1.3)mN/m,明显高于PS(P<0.01);随SP-C浓度的增加γmin逐渐 降低,RS-3的γmin降至(0.7±0.1)mN/m(与PS相比,P>0.05)。通 气20min时,PS组、RS-3动物的潮气量分别达到(25±7)ml/kg、(25±4 )ml/kg,明显高于对照组和SL组(P<0.01)。结论不含SP-C的合成脂质表面活性低,加入SP-C后构成的重组PS表面活性明显增强。1Strayer DS, Merritt TA, Hallman M. Surfactant replacement: immuno-logical considerations. Eur Respir J, 1989,2(Suppl) :91a-96s.
2 Kobayashi T, Li WZ, Tashiro K, et
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