肿瘤放疗增敏剂是能够增加有机体辐射敏感性的一类物质 ,它使射线对肿瘤组织的杀伤率大大加强 ,从而提高放疗效果 ,在临床治疗上具有很大的应用价值<1 > 。目前 ,国内外对肿瘤放疗增敏剂的研究很多 ,沙纳唑是效果较好的一个。由日本首先研制 ,化学名为N (2 甲氧基乙基 ) 2 (3 硝基 1 ,2 ,4, 三氮唑 1 )乙酰胺 ,其增敏效率较高 ,而神经毒性很低 ,进而对沙纳唑展开了一系列的研究。1 材料1 .1 化学试剂 3 硝基 1 ,2 ,4三氮唑 (前期制备 ) ;溴乙酸乙酯 (化学纯 ) ;聚乙二醇 (实验试剂 ) ;甲醇 (色谱纯 ) ;沙纳唑对照品 (日本京都大学kagiya教授赠送 ,批号 0 1 31 84,纯度99% ) ;其他试剂均为分析纯。1 .2 仪器 Waters 60 0E高效液相色谱仪 <色谱柱 :HP μ BondapakC1 8(1 0 0mm× 4 .6mm ,5μm) ,泵 :Waters 61 0进样阀 :WatersU6K ,紫外检测器 :Waters 486 ,美国 > ;气相色谱 质谱联用仪 <气相色谱仪 :HP - 5890A ,质量检测器 :HP -5970B ,工作站 :HP - 59970C ,色谱柱 :HPOV - 1弹性石英毛细管柱 (2 5mm× 0 .2mm ,0 .33μm)美国 > ;FTS - 65A红外分光光度计 (BID RAD ,美国 ) ;JNMRGX40 0核磁共振仪(日本 ) ;PE50 0型原子吸收分光光度计 (PE ,美国 ) ;RE47旋转蒸发仪 (Yamato ,日本 ) ;UV -VIS 850 0紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司 ) ;WRR熔点仪 (上海物理光学仪器厂 )。1 .3 动物 Balb/c小鼠 (1 8～ 2 2 g,♂ ,军事医学科学院动物实验中心 )。2 方法2 .1 化学合成条件2 .1 .1 合成反应及条件 (1 )于 30 0 0mL三口瓶中加入约50 0mL乙酸乙酯 (作溶剂 ) ,搅拌状态下加入聚乙二醇 7mL和溴乙酸乙酯 45mL ,并用 50 0mL左右乙酸乙酯多次冲洗瓶口。 (2 )向三口瓶中加入碳酸钾 1 2 0 g和硝基三氮唑 45 .6g,用约 50 0mL乙酸乙酯冲洗瓶口。 (3)水浴加热 ,高于 90℃条件下 ,回流反应 4h。反应完毕后 ,静置冷却。将上层清液取出 ,采用异丙醇混匀后静置分层的方法洗涤 3～ 4次 ,然后 ,在旋转蒸发器上将其浓缩 ,最后用异丙醇进行重结晶 ,得到产物硝基三氮唑乙酸乙酯 684g ,产率为 46 %。 (4)称取硝基三氮唑乙酸乙酯 30 0 g,加入 1 0 0 0mL无水乙醇 ,再加入2 60mL甲氧基乙胺 ,用 50 0mL无水乙醇冲洗瓶口 ,水浴加热 ,高于 90℃条件下回流反应。将产物浓缩后用 95 %乙醇重结晶 ,得到产物沙纳唑。2 .1 .2 合成化学方程式2 .2 熔点的测定 将一根毛细管口插入样品及对照品中 ,取出后用管底在桌面上轻敲几下 ,使物样落到管底。将毛细管放入测定仪的加热槽中加热 ,通过放大镜观察物样的状态 ,记录物样开始熔化和全部熔化时的温度。2 .3 动物分组及实验条件 二级Balb/c小鼠 ,体重 (2 0±2 ) g ,分为模型对照组 (给药剂量0mg·kg- 1 )、低剂量组 (给药剂量 1 0 0mg·kg- 1 )和高剂量组 (给药剂量 2 0 0mg·kg- 1 )。接种S1 80肿瘤细胞 ,待瘤体短径达 0 .5mm以上给予照射。照射前 2 0min按剂量腹腔注射沙纳唑 ,观测沙纳唑对Balb/c荷瘤小鼠瘤体的影响。2 .4 高效液相条件2 .4.1 样品及对照品溶液的配制 先将内标物 (甲硝唑 )用丙酮配成 1 0mL ,然后 ,称取样品及对照品 1 0mg,分别加入1mL内标物 ,再用丙酮加至 1 0mL ,浓度为 1g·L- 1 。2 .4.2 工作条件 λ =2 4 6nm ;泵压 1 30 0PSI;流动相2 0 %甲醇 ;流速 0 .6mL·min- 1 ;进样量 2 0 μL。2 .5 红外光谱条件 在 40 0 0～ 50 0cm- 1 区间内对样品和对照品进行红外光谱扫描。2 .6 紫外光谱条件 在 1 90～ 40 0nm区间内对样品和对照品进行紫外光谱扫描。2 .7 气相色谱条件 氮气 (载气 ) 30mL·min- 1 ;气化室温度为 2 60℃ ;进样量 1 μL。3 结果3 .1 合成结果 合成实验经两步反应 ,得到沙纳唑 580g ,总产率为 39%。物理性状 :白色 ,有光泽 ,长针状晶体 ,略有刺激性气味。3 .2 鉴定结果3 .2 .1 显色反应 取沙纳唑 5mg ,加入 1mL重蒸水 ,再加入几粒氢氧化钠固体 ,水浴加热 3～ 5min ,溶液变为深棕黄色 ,加入稀盐酸 ,使溶液呈酸性 (pH 2左右 )。溶液变无色 ,再加入几粒氢氧化钠 ,使之呈碱性 ,溶液变棕黄色。3 .2 .2 熔点 样品 :1 2 3℃～ 1 2 4℃ ;对照品 :1 2 2℃～1 2 3℃3 .2 .3 元素分析 结果见表 1。表 1 元素分析结果Tab 1 Resultsofelementanalysis元素样品 /%对照品 /%C 36 .8136 .85H 0 4 .70 0 4 .6 8N 30 .8130 .923 .2 .4 光谱分析 结果见表 2。3 .2 .5 色谱分析 结果见表 3。3 .3 药效学 结果见表 4。表 2 光谱分析结果Tab 2 Resultsofspectralanalysis光谱样品对照品UVλ/nm 2 0 3 .2 ,2 44.82 0 4.8,2 44.8IRνmax/cm-1 3 4 0 4,3 10 9,16693 3 99,3 10 9,1668MSm/z 2 3 0 .1(M+ + 1) 2 3 0 .1(M+ + 1)1 H NMR 5.2 4(S ,2H ,-CH2 -CO -) 5.2 4(S ,2H ,-CH2 -CO -)δ/pm 8.71(S ,1H ,-C -NH -) 8.71(S ,1H ,-C -NH -)4.81(S ,HDO) 4.81(S ,HDO)3 .60 (t,2H ,-N -CH2 -) 3 .60 (t,2H ,-N -CH2 -)3 .48(t,2H ,-CH2 -O -) 3 .49(t ,2H ,-CH2 -O -)3 .3 9(S ,3H ,-O -CH3 ) 3 .3 9(S ,3H ,-O -CH3 )表 3 色谱分析结果Tab 3 Resultsofchromatographicanalysis色谱样品 /%对照品 /%GC -MSRT :13.30 1,10 0RT :13.531,97.15RT :1.76 3,0 .0 81RT :1.758,0 .115HPLC 6 .2 80 ,99.9196 .2 4 2 ,99.2 0 8表 4 Balb/c鼠瘤体生长延缓结果 (d)Tab 4 ResultsoftumorgrowthretardanceofBalb/cmice分 组 瘤体积 /cm30 .51.0 2 .0低剂量组 ( 10 0mg·kg-1 ) 1.0 1.0 2 .4高剂量组 ( 2 0 0mg·kg-1 ) 2 .6 3.6 >4 .7由表 4可知 ,随着沙纳唑剂量的增大 ,对小鼠瘤体生长延缓作用明显 ,说明沙纳唑具有较好的增强放射治疗作用<2 > 。4 讨论经过化学合成 ,仪器分析及光谱鉴定 ,药效学实验 ,表明设计的合成路线可行。原料立足于国内 ,反应不需要特殊的条件 ,成本不高 ,为以后新药的开发打下基础。经过多种方法鉴定 ,其中首先通过元素分析 ,可确认合成药物与样品的化学成分一样 ,再由紫外光谱 ,可推测合成两者可能为同种物质 ,然后 ,通过质谱鉴定分子量 ,通过气相色谱和液相色谱分析定量主要的组分 ,最后通过红外吸收光谱和核磁共振氢谱确定化合物所带特定基团 ,最终通过上述鉴定确认合成药物的纯度、含量均能符合要求。同时药效学试验结果表明 ,沙纳唑在放疗过程中具有明显的增敏作用。放疗增敏剂沙纳唑的合成与鉴定@邱炜$广州军区武汉总医院!湖北武汉430070
@唐瑛$广州军区武汉总医院!湖北武汉430070
@骆传环$军事医学科学院放射医学研究所!北京100850沙纳唑;;增敏剂;;合成;;鉴定 目的:对放疗增敏剂沙纳唑进行合成研制与鉴定研究。方法:化学合成沙纳唑,应用高效液相色谱 法、气相色谱法和质谱法对其进行质量鉴定,并对其进行药效学研究。结果:合成得到的沙纳唑与 日本对照品在理化性质及光谱特征上完全一致,对肿瘤细胞的增敏作用显著。结论:该化合物极有 可能成为一个好的增敏剂。<1> 骆传环,鲍云华.放疗增敏剂AK和MISO涂抹给药的临床应用
.中华放射医学与防护杂志,1997,17(4):229.
<2> 马宏伟,刘理南.羟基尿作为放疗增敏剂的临床研究进展.中国肿瘤,2000,9(8):368.∩追治鼋峁鸗ab 3 Resultsofchromatographicanalysis色谱样品 /%对照品 /%GC -MSRT :13.30 1,10 0RT :13.531,97.15RT :1.76 3,0 .0 81RT :1.758,0 .115HPLC 6 .2 80 ,99.9196 .2 4 2 ,99.2 0 8表 4 Balb/c鼠
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