湿疹皮炎和皮肤癣菌病为皮肤科常见病。部队基层官兵由于特殊的作训环境,这两类疾病发病率高达 60%左右。目前用于防治这两类疾病的药物剂型主要有软膏剂、洗剂、溶液剂等,各剂型作用相 对单一。本研究采用壳聚糖盐酸盐为成膜辅料,研制一种集抗真菌、抗炎、抗过敏一体的长效缓释
喷膜,对其质量控制进行了研究,并观察其对豚鼠湿疹和体癣模型的疗效。1材料1.1仪器和试剂Waters高效液相色谱仪:Wa-ters600色谱泵,Waters 996PDA紫外检测器,Mil-lennium 32色谱工作站(梅特勒-托利多公司);超声振荡机(上海科学仪器厂);超滤仪(上海科学仪器厂);电子分析天平(梅特勒-托利多公司);梅特勒320 pH计(梅特勒-托利多公司)。
酮康唑(地奥集团成都药业股份有限公司,批号:030902) ;醋酸地塞米松(天津天药药业股份有限公司,批号:DAG030801);壳聚糖盐酸盐(上海其胜生物材料技术研究所,平均相对分子质量100000,批号:030308);吐温-80、水溶性硅油、乙醇等均符合药用标准。酮康唑对照品 、醋酸地塞米松对照品(中国药品生物制品检定所);自制酮康唑喷膜(批号:030818,0 30822,030824)。磷酸二氢钾和氢氧化钠(上海试剂四厂,分析纯)、甲醇(上海复 旦化学品厂永华试剂分厂,色谱纯)。1.2动物4~5周龄健康豚鼠55只,由第二军医大学实 验动物中心提供,合格证号:SYXK-(军)2002-044。其中用于湿疹模型25只,均 为雌性,体质量(232.4±33.0)g;用于体癣模型20只,雌雄各半,体质量(212 .4±18.7)g;用于皮肤刺激性实验10只,雌雄各半,体质量(218.6±16.2)g。2方法和结果2.1新型酮康唑喷膜的制备2.1.1处方酮康唑10g,醋酸地塞米松0.5 g,壳聚糖盐酸盐10 g,吐-温80 10 g,水溶性硅油10 g,60%乙醇加至1 000 ml。2.1.2制备工艺<1,2>取处方量的壳聚糖盐酸盐加适量纯化水胀溶,取处方量酮康唑 、醋酸地塞米松加乙醇溶解,再加入吐温-80,将上述醇溶液缓慢加入水溶液中。最后加水溶性硅油,搅匀,分装于60ml喷瓶,密闭,即得。2.2新型酮康唑喷膜质量标准2.2.1性状本品为无色黏稠液体,有乙醇味。2.2.2鉴别酮康唑鉴别:取样品1 ml,加0.1mol/L盐酸溶液10 ml,在水浴上加热溶解,放冷,滤过,滤液加碘化铋钾试液数滴,即生成橙红色沉淀。醋酸地塞米松鉴别:取样品10 ml,置烧杯中,加无水乙醇50 ml,在水浴上加热溶解,放冷,滤过,滤液加碱性酒石酸铜试液1 ml,即生成红色沉淀。3批样品鉴别均呈阳性反应。2.2.3检查应符合《中国药典(2000年版)》二部<3>有关膜剂的一般规定,将本品涂于干净玻璃板上,应在10 min内干燥成膜,膜应有一定抗撕裂强度,微生物限度检查应符合规定。3批样品均符合相关要求 。2.3新型酮康唑喷膜含量测定及方法学考察<3,4>2.3.1溶液配制精密称取酮康唑和醋酸地塞米松对照品适量,加乙醇分别配制酮康唑对照品溶液(1mg/ml)和醋酸地塞米松对照品溶液(1 mg/ml)。另按2.1.1项下配制新型酮康唑喷膜样品和空白喷膜基质,分别精密量取上述喷膜4.0 ml,置50 ml容量瓶中,加乙醇适量,超声振荡10 min,加乙醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜滤过,配制酮康唑喷膜测定液和空白喷膜测定液。2.3.2色谱条件色谱柱Waters Symttry C18(250mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸二氢钾缓冲液(4∶1),pH 7.4;检测波长:239 nm;流速:0.6ml/min;柱温:(22±2)℃;进样量:20μl。色谱图见图1。辅料不干扰样品中主药酮康唑和醋酸地塞米松的含量的测定。图1色谱图Fig 1 Chromatogram pictureA:Sample matrix;B:Ketoconazole control;C:Desamethasone con-trol;D:Sample;1:Desamethasone;2:Ketocona zole2.3.3标准曲线绘制精密称取酮康唑和醋酸地塞米松对照品溶液适量,加乙醇稀释成酮康唑浓度为0.2、0.4、0.8、1.6和2.0mg/ml和醋酸地塞米松浓度为0.02、0.04、0.08、0.16和0.20 mg/ml的标准溶液,进样按2.3.2项下条件。以峰面积(A)对浓度(c)求回归方程,酮康唑:A1=(5.984×105)+(3.063×107)c1,r1=0.999 7;醋酸地塞米松:A2=(1.947×104)+(4.123×107)c2,r2=0.999 8。酮康唑和醋酸地塞米松的线性范围分别为0.2~2.0 mg/ml和0.02~0.20 mg/ml。2.3.4加样回收率实验精密量取样品4.0 ml,置50 ml容量瓶中,精密加入酮康唑和醋酸地塞米松对照品溶液适量,加乙醇超声处理10 min,照2.3.6项下操作,每个浓度重复测定3次。计算酮康唑和醋酸地塞米松的回收率。酮 康唑的平均回收率为98.41%,RSD=2.29%(n=6);醋酸地塞米松的平均回收率为97.84%,RSD=2.60%(n=6)。2.3.5重复性实验精密量取样品4.0ml,按2.3.6项下处理,每日测定3次,连续测定3 d。计算酮康唑和醋酸地塞米松的日内RSD、日间RSD。两者日内RSD及日间RSD分别为1 .17%和1.26%、1.57%和1.40%(n=9)。2.3.6样品测定按2.3.1 项下方法制备样品测定液,按2.3.2项下测定3批样品,按外标法计算样品中酮康唑和醋酸地 塞米松的含量,分别为标示量的96.52%~97.26%和95.90%~97.26%。2 .3.7皮肤刺激性实验豚鼠10只,分为完整皮肤组(n=5)和破损皮肤组(n=5),豚鼠双侧背部剃毛4cm×6 cm,破损组用砂纸摩擦皮肤至不渗血为度,将新型酮康唑喷膜涂抹于2组豚鼠左侧背部,喷膜基质涂抹于右侧。用纱布胶布固定,24 h揭膜并用温水洗净残留喷膜,分别于1、24、48、72 h观察豚鼠背部有无红斑、水疱。结果显示,揭膜1 h豚鼠背部红斑,24 h完全消退,无水疱糜烂等表现,新型酮康唑喷膜和喷膜基质对豚鼠皮肤均无刺激性。2.4动物疗 效观察2.4.1动物模型制备参照Fukuda等<5>方法,以OVA为抗原激发豚鼠皮肤变 态反应制备湿疹模型。采用穿刺法<6>,豚鼠背部接种须癣毛癣菌(2×105CFU/ml)制备体癣模型。2.4.2分组与给药湿疹模型100个,分为A、B、C、D4组(n=25)。A组给新型酮康唑喷膜,1次/2d;B组给喷膜基质,1次/2 d;C组给地塞米松止痒霜(0.05%),2次/d;D组不给药。体癣模型20个,分为A、B、C、D 4组(n=5)。A组给新型酮康唑喷膜,1次/2 d;B组给喷膜基质,1次/2 d;C组给复方酮康唑霜,2次/d;D组不给药。2.4.3观察指标湿疹模型激发48 h、治疗1周分别对红斑(0~4分)、水肿(0~2分)、抓痕(0~1分)进行评分。体癣症状 评分:接种第11天和治疗2周分别对丘疹(0~4分)、水疱(0~2分)、鳞屑(0~1分) 进行评分;治疗前涂片培养测阳性率;停药2周涂片培养测阴性率。2.4.4治疗结果根据用药 前后皮损评分比较,进行疗效判断。治愈:用药后皮损消退≥90%;显效:皮损消退≥70%; 有效:皮损消退≥30%;无效:皮损消退<30%。结果显示,对于湿疹和体癣模型,新型酮康 唑喷膜治疗组效果分别与地塞米松止痒霜和复方酮康唑霜组一致,明显优于基质治疗组和空白对照 组(P<0.01,多样本率的χ2检验,表1)。治疗前A~D各组真菌培养阳性率分别80% 、80%、100%和80%,停药2周时,A组与C组真菌培养阴性率均为100%,而B组与D组阴性率分别为45%和50%,真菌涂片也得到类似的结果。表1湿疹模型1周及体癣模型2周疗效Tab1 Therapeutic outcomes in eczema models after 1 week and in tinea corporis models after 2 weeks in all guinea pigsGroupEczema(N=25,n)CuredObviouslyeffectiveEffective IneffectiveEffectiverate(%)Tinea corporis(N=5,n)CuredObviouslyeffectiveEffective IneffectiveEffectiverate(%)A 9 8 2 6 76**4 0 1 0 100**B 0 2 6 17 32 0 0 2 3 40C 10 7 1 7 72**3 1 1 0 100**D 0 1 5 19 24 0 0 1 4 20**P<0.01vsgroup B and D;A:Treated with ketoconazole spraying membrane;B:Treated with spraying membrane matrix;C:Treatedwith desamethasone antipritic cream in eczema models and compound ketoconazole cream;D:Without drug treatment3讨论壳聚糖是无脊椎甲壳类动物贝壳提取物,是一种高聚合作用的物质。壳聚 糖盐酸盐为生物高分子材料,具有良好的成膜性,能促进体细胞对营养成分和药物的吸收。本方选用
More abstracts about the 新型酮康唑喷膜的制备及其对湿疹和体癣豚鼠模型的疗效