溃疡性结肠炎 (ulcerativecolitis ,UC)是一种原因不明的慢性非特异性炎症性肠病。笔者在临床上使用以调理气机为主的加味四逆散治疗肝郁UC已取得了良好疗效 ,且前期已对促炎性因子进行研究 ,故选择本方对溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型血清中抑炎性细胞因子的影响进行探讨。1 材料与方法动物及药物 健康雄性Wistar大鼠 ,体重 2 40 g～3 0 0 g ,由辽宁中医学院实验动物中心提供。加味四逆散由柴胡、白芍、枳壳、炙甘草、薤白、酒大黄、败酱等组成 ,由辽宁中医学院附属医院提供 ,加水煎煮后浓缩为含生药 1g/ml溶液。柳氮磺吡啶 (SASP) :0 .2 5g/片 ,上海三维制药有限公司生产。批号 :沪卫药准字 (1995 )第0 0 2 0 83号。主要试剂及仪器 2、4、6三硝基苯磺酸 (TNBS) :Sigma公司提供。IL -4、IL -10试剂盒 :北京邦定泰克生物技术有限公司提供。Milli -Q型超纯水机 ,美国MILLIPORE制造 ;BENCHMAR型酶标仪 ,BIO -RAD制造 ;15 75型洗板机 ,BIO -RAD制造 ;BIOFUGE2 8RS型低温高速离心机 ,德国HERAEUS制造。造模方法 采用三硝基苯磺酸 /乙醇法外加束缚的复合因素造模 :每天将大鼠四肢不定时捆绑 8h左右 ,限制其自由活动 (自由饮食、饮水 )。第 2周开始 ,大鼠禁食 2 4h(不禁水 ) ,10 %水合氯醛腹腔麻醉后 ,将TNBS/乙醇液(TNBS10 0mg/kg + 5 0 %乙醇 0 .2 5ml)由大鼠肛门轻缓注入深约 8cm肠腔内。UC造模成功后每日仍持续束缚。分组、给药及取材 将 48只大鼠随机分为 6组 :正常组、模型组、SASP组、加味四逆散大、中、小剂量组 ,每组 8只。SASP组 :灌胃给予SASP混悬液 0 .3 g/kg体重加味四逆散大、中、小剂量组 :分别灌胃给药 2 .2 g/kg、6.5g/kg、19.5 g/kg体重正常组及模型组 :均灌胃生理盐水 1ml/10 0 g体重UC造模后第 2天各组开始灌胃 ,每日 1次。第 2 1天动物处死 ,腹主动脉无菌取血 ,经 3 5 0 0r/min ,15min低温离心 ,分离血清 5 0 0 μl。血清IL -4、IL -10含量测定方法 采用双抗体夹心ABC -ELISA法 ,严格按试剂盒说明书操作。统计学处理 实验数据用SPSS11.5软件处理 ,进行OneWay方差分析。2 结 果一般情况 造模后逐渐出现叫声尖细 ,贴边 ,扎堆 ,反应迟缓 ,活动及饮食减少 ,稀便、粘液便、脓血便 ,消瘦、拱背、毛不光洁等现象。治疗组用药 1周后大便开始好转 ,脓血便逐渐减少 ,最后上述症状基本消失。其中加味四逆散中剂量组疗效最佳 ,且优于SASP组。加味四逆散对UC肝郁大鼠模型血清IL -4、IL -10含量的影响 (见下表 )。 表 1大鼠血清IL -4、IL -10检测结果组 别IL - 4 (ng/ml)IL - 1 0 (ng/ml)正常组 1 4 0 .50± 1 8.65 58.0 0± 4 .47模型组 50 .88± 9.36□ 2 9.63±7.0 3□SASP组 78.75± 1 3 .1 6△ 87.38± 2 0 .36△小剂量组 54 .50± 1 0 .90 4 4 .2 5±6 .0 9△中剂量组 1 2 5.2 5± 1 0 .39△※ 1 2 2 .38± 1 2 .66△※大剂量组 95.0 0± 1 7.94△ 1 1 6 .1 3±1 3.36△注 :△与模型组比较P <0 .0 5 ;□与正常组比较P <0 .0 5(仅限于模型组 ) ;※与SASP组比较P <0 .0 53 讨 论IL -4主要由激活的淋巴细胞合成 ,对淋巴细胞和巨噬细胞发挥免疫调节作用。IL -4抑制人巨噬细胞克隆形成及炎症介子TNF或IL -1的释放 ,诱导IL -1ra的产生。正常十二指肠粘膜的淋巴细胞比外周血淋巴细胞能自发地分泌更多的IL -4 ,表明IL -4对维持肠道免疫起重要作用〔1〕。亦有研究〔2〕显示 ,用表达IL -4的重组人 5型腺病毒载体治疗三硝基苯磺酸 (TNBS)诱发的结肠炎 ,能明显减轻组织损伤。IL -10又名细胞因子合成抑制因子 ,由Th2细胞、单核细胞和巨噬细胞产生。它的主要免疫调节作用是抑制激活的单核细胞、巨噬细胞、T细胞发挥有效功能 ,如人IL -10能下调活化的单核细胞和巨噬细胞转录分泌IL -1β、IL -6、IL -8、TNF -a和GCSF。IL -10基因剔除小鼠可自发结肠炎 ,说明IL -10在维持正常肠道粘膜免疫调节中发挥重要作用。而且用IL -10灌肠治疗UC病人 ,能明显改善肠道炎症 ,但联合应用抗炎症因子如IL -10加IL -4或IL -10加IL -13比任何单一因子下调激活的单核细胞释放前炎性因子更有效〔3〕。四逆散方出《伤寒论》3 18条 :“少阴病 ,四逆 ,其人或咳、或悸、或小便不利、或腹中痛、或泄利下重者 ,四逆散主之。”临床应用极其广泛 ,但以调理气机和善治消化系疾病为特点。UC的主要临床见症为腹泻伴脓血便、腹痛和里急后重 ,腹泻与后重应属清气不升 ,虽频频临厕而里急后重不除又当属浊阴不降 ,腹痛总离不开“不通” ,或为气滞 ,或为痰阻 ,或为湿聚 ,或为热结 ,或为血瘀 ,诸“郁”日久 ,邪热内生 ,湿热郁蒸 ,血败肉腐 ,则见脓血便。然气郁可以化热化火 ,气化失常又可致痰阻湿停 ,气滞不行每日血行不畅 ,故上述诸般“郁结”又恒以气郁为发端。综上 ,UC主要症状之产生不外清气不升、浊阴不降、气滞不行等 ,即气机不调。而加味四逆散由柴胡、白芍、甘草、枳实、薤白、大黄、败酱等味组成。柴胡疏肝以升清阳 ;枳实行滞以降浊阴 ;薤白散结而通阳气 ;芍药柔肝以养营血 ;甘草健脾以固中土 ;芍甘相得 ,更能缓急而止痛 ;大黄、败酱解毒通腑以除湿热瘀脓 ,诸药合用 ,共奏调理气机、柔肝健脾、兼导下湿热瘀脓之功 ,此方之义与UC病机丝丝入扣 ,此呼彼应 ,故取得了满意的实验结果。不论是大鼠的一般状态还是血清中IL -4、IL -10的含量都有明显反映 ,这一方面 ,证明了加味四逆散对UC的肯定疗效 ,同时 ,也说明这一疗效的免疫机制与上调IL -4和IL -10有关 ,尤其是四逆散能同时上调IL -4和IL -10与联合应用抗炎性因子治疗UC比单独应用任何一种抗炎因子效果更佳的报道相吻合 ,由于造模中采用了束缚的情志因素 ,使四逆散的应用显得更加对证。另外 ,从实验中可以看到 ,四逆散的用量太小则效果不显 ,但也并非越大越好 ,而是中剂量最佳 ,即《伤寒论》原方剂量最为合理。加味四逆散药味简单但作用宽泛 ,上述实验中对细胞因子的影响 ,只是其治疗UC的部分机制 ,其更全面和深入的机理有待进一步探讨。加味四逆散对溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型血清IL-4 IL-10的影响研究@郭晓东$北京中医药大学!100029,北京
@关庆增$辽宁中医学院!110032,辽宁沈阳加味四逆散;;溃疡性结肠炎(UC);;IL-4;;IL-10〔1〕CarolM ,LambrechtsA ,VanGossumA ,etal〔J〕.Gut,1998,42:214～219
〔2〕HogaboamCM ,VallanceBA ,KumaraA ,etal〔J〕.JClinIn vest,1997,100:2766～2776
〔3〕LugeringN ,KucharzikT ,StainH ,etal〔J〕.DigDisSci,1998,43:706～714芙唇舛就ǜ猿瑞雠?,诸药合用 ,共奏调理气机、柔肝健脾、兼导下湿热瘀脓之功 ,此方之义与UC病机丝丝入扣 ,此呼彼应 ,故取得了满意的实验结果。不论是大鼠的一般状态还是血清中IL -4、IL -10的含量都有明显反映 ,这一方面 ,证明了加味四逆散对UC的肯定疗效 ,同时 ,也说明这一疗效的免疫机制与上调IL -4和IL -10有关 ,尤其是四逆散能同时上调IL -4和IL -10与联合应用抗炎性因子治疗UC比单独应用任何一种抗炎因子效果更佳的报道相吻合 ,由于造模中采用了束缚的情志因素 ,使四逆散的应用显得更加对证。另外 ,从实验中可以看到 ,四逆散的用量太小则效果不显 ,但也并非越大越好 ,而是中剂量最佳 ,即《伤寒论》原方剂量最为合理。加味四逆散药味简单但作用宽泛 ,上述实验中对细胞因子的影响 ,只是其治疗UC的部分机制 ,其更全面和深入的机理有待进一步探讨。加味四逆散对溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型血清IL-4 IL-10的影响研究@郭晓东$北京中医药大学!100029,北京
@关庆增$辽宁中医学院!110032,辽宁沈阳加味四逆散;;溃疡性结肠炎(UC);;IL-4;;IL-10〔1〕CarolM ,LambrechtsA ,VanGossumA ,etal〔J〕.Gut,1998,42:214～219
〔2〕HogaboamCM ,VallanceBA ,KumaraA ,etal〔J〕.JClinIn vest,1997,100:2766～2776
〔3〕LugeringN ,KucharzikT ,StainH ,etal〔J〕.DigDisSci,1998,43:706～714
More summaries about the 加味四逆散对溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型血清IL-4 IL-10的影响研究