放射免疫治疗是肿瘤治疗的一种方法。多项研究表明鼠源性单克隆抗体可产生人抗鼠抗体(HAMA )反应,改变生物学分布影响诊断和治疗效果。人鼠嵌合抗体可减少鼠源性单克隆抗体的免疫源性。131 碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗( 1 31 I chT NT)的特异性抗原是单链DNA<1 > ,具有广谱的抗肿瘤功效<1 3> 。谷晓云等<3> 采用肝动脉插管局部给药治疗肝细胞癌,1年生存率为62 5 % ,AFP下降率68 75 %。1 31 I chTNT现已成为国家一类新药,并获准进行Ⅱ期临床试验。1 材料和方法1 1 研究对象9例病理确诊的肿瘤患者,男6例,女3例,平均年龄5 0岁( 1 8～74岁) ,体重49 6±6 5kg ,其中原发性肺癌(Ⅲ～Ⅳ期) 4例,乳腺癌肺转移2例,直肠癌肺转移1例,骨肉瘤伴肺转移1例,滑膜肉瘤伴肺转移1例。所有患者在4周内未行化疗、放疗、放射性核素治疗,没有使用GM CSF药物维持血象;KarnofskyPS计分≥60分,ECOG2级;没有明显的其它疾患,ALT <35U/L ,BUN <7 1mmol/L ;血WBC总数≥4×1 0 9/L ,粒细胞计数≥2×1 0 9/L ,血红蛋白>80g/L ,红细胞计数>3 5×1 0 1 2 /L ,血小板>1 0 0×1 0 9/L ;没有鼠源性抗体接触史或HAMA试验阴性:碘过敏试验阴性。1 2 药 物1 31 I chTNT由上海美恩生物技术有限公司提供,放射性比活度370MBq/ml,放射化学纯度>95 % ,免疫活性>5 0 % ,热源细菌内毒素一次注射量<1 5 0EU ,pH值6 5～7 5。1 3 主要仪器CRC 1 5R活度计,FMJ 1 82放射免疫γ计数器,高效液相色谱仪(Waters 5 1 0 ) ,离心机(DL 45RC L) ,三探头SPECT仪(MarconiIRIXⅢ)。1 4 研究方法1 4 1 色谱条件 γ放射性探测量程30k ,甑别域0 5 ,时间常数3 3,Bio SilTMSEC 2 5 0凝胶过滤柱,流动相为0 1mol/L磷酸钠盐缓冲液(pH 7 0 ) ,流量0 8ml/min ,柱温2 5℃,紫外探测波长2 80nm。进样量40 0 μl。1 4 2 血清样品的分离和预处理 静脉血1ml在0 5h内经40 0 0r/min离心1 5min ,取上清液5 0 0μl,其中取2 0 μl测量放射性,取40 0 μl经0 2 2 μm滤膜过滤后- 2 0℃保存,以备体内稳定性检测4 3 1 31 I chTNT标准曲线制备及最低检测活度测定 经活度计测得1 31 I chTNT溶液1ml(已稀释)的放射性活度7 0 9MBq。溶液倍比稀释1∶2 ,1∶4,1∶8,1∶1 6,1∶32 ,1∶64,分别量取各浓度溶液2 0 μl,用γ计数器测量计数cps ,再求出溶液放射性比活度kBq与cps的直线回归方程,绘制标准曲线。设最低检测活度即为样品计数率为本底计数率3倍时样品的放射性活度。1 4 4 给药方法 患者在治疗前3天起口服复方碘溶液1 0滴,每天3次,连续服用至治疗后1 0d。静脉推注1 31 I chTNT ,2 9 6±3 7MBq/kg,体积3～5ml。用活度计测量已抽1 31 I chTNT注射器和注射后注射器的放射性活度,两者相减得总给药剂量。留取少量药液作标准源。1 4 5 药代动力学研究 6例患者在给药后5min ,1 ,2 ,4,6,2 4 ,48,72 ,1 68h各时间点自给药对侧肘静脉采血1ml,处理如前述,取2 0 μl测量放射性计数率,从标准曲线中查出相应的放射性活度,并换算成注入剂量的百分率(ID ,% ) ,描绘血清放射性ID h曲线。在给药后1周内每日收集所有患者2 4h尿液,记录总量,测量放射性,从标准曲线中查出相应的放射性活度,并换算成ID( % ) ,描绘尿放射性ID h曲线。1 4 6 体内稳定性检测 2 4 ,48,72 ,1 68h血清采用高压液相凝胶过滤液相色谱法分析。实验条件如前述。1 4 7 1 31 I chTNT代谢产物分析 2 4 ,48,72 ,1 68h尿液样本各40 0 μl采用高压液相凝胶过滤液相色谱法分析其中放射性物质的化学成分。实验条件如前述。1 4 8 SPECT仪探头测量效率 将放射性均匀分布的滤纸(活度8 44MBq ,4cm×3cm)置于配有高能准直器的探头上,能峰364keV ,窗宽2 5 % ,矩阵1 2 8×1 2 8,采集总计数1 0 0 0K ,记录下采集时间。重复等时采集3次,求平均计数率,经换算即得该探头的测量效率。1 4 9 1 31 I chTNT体内分布 用配有高能准直器的SPECT仪在给药后0 5 ,2 4 ,48,72 ,1 2 0 ,1 68h采集全身前位、后位图像,能峰置于364keV ,窗宽2 5 % ,矩阵1 0 2 4×2 5 6,速度0 2m/s。根据Ham mond描述的配对显像法<4> 估算各器官的放射性活度。为了减少周围器官散射的影响,在各器官显像最清晰的时候勾画出它们的 感兴趣区(ROI)记录下其总像素,然后在上述各时间点图像上选用相同的比较小的ROI(不小于整个器官的50 % )记录其像素平均计数率,两者乘积即为器官某时刻的放射性计数率。肝脏放射性本底对结果的影响小于5 % ,可以忽略<4,5> 。肾、脾、肿瘤则需考虑本底影响。多数情况下甲状腺仅在前位有影像。甲状腺的放射性活度可按下式计算:A =(Ia Ib)e(μcT) /c ,其中Ia:前位甲状腺ROI计数率(cpm) ,Ib:甲状腺本底计数率(在甲状腺近下方选取和甲状腺等大的ROI作为本底) ,μc:ROI介质的线性衰减系数,单位(cm- 1 ) ,T :甲状腺中心位置离体表的平均距离(5) ,c :仪器的测量效率,单位cpm/MBq。数据处理时将给药后0 5h全身前位、后位总计数率的几何平均值设为百分摄入量(ID % ) <6> 。1 4 1 0 统计分析 数据用SPSS1 0 0软件分析,结果用x±s表示。2 结 果1 )以样品放射性活度kBq与样品cps作直线回归,放射性活度2 2～70 9kBq和cps呈良好的线性关系,回归方程kBq =0 0 5 38cps - 0 348,r =0 9999;放射性最低检测活度为0 72kBq。2 )经高压液相凝胶过滤液相色谱法分析血清中1 31 I chTNT占放射性成分的百分率,其中2 4 ,48,72h血清中的1 31 I chTNT均超过95 % ,1 68h1 31 I chT NT仍达到( 86±6) %。尿中放射性物质的化学成分,2 4 ,48,72h尿液样本放射性1 0 0 %源于游离的1 31 I;1 68h除1例混有2 2 %的放射性源于1 31 I chTNT外,全部尿样放射性1 0 0 %源于游离的1 31 I。3)静脉推注1 31 I chTNT后血清放射性活度-时间曲线结果(见图1 ) ,经SPSS1 0 0软件拟合符合单次静脉给药二室模型,计算药代动力学参数,再取均值(x±s) ,结果见表1。静脉推注1 31 I chTNT后尿液放射性排泄百分率结果(见图2 ) ,经SPSS1 0 0软件拟合尿药量排泄时间曲线符合单次静脉给药一室模型。尿液放射性半排时间90±1 0h。1周累计有占注入剂量( 33±9) %的放射性经尿液排泄ig 1 Plasmaconcentration timecurveof1 31 I chTNTafterasingleintra venousdoseof2 9 6±3 7MBq/kginlungcancerpatients(n =6)Fig 2 ID timecurveofactivityinurineafterasingleintravenousdoseof2 9 6±3 7MBq/kginlungcancerpatients(n =6)4) 1 31 I chTNT静脉推注后,放射性主要浓聚在肺和肝,脑最少;甲状腺放射性逐渐浓聚。肿瘤组织0 5h显影欠清晰,边界多在3～7d渐显清晰。肿瘤组织放射性2 4h达到最大值,T/L(瘤/非瘤)值多在3～7d达到最大值( 1 2 5～3 73)。患者5为左上肺低分化癌累及左侧第3前肋,直径约7cm ,伴有大的厚壁空洞,2 4hT/L高达3 2 ,72 ,1 68h分别是3 73和3 40。各患者肿瘤特点和给药后各时间点的T/L值(见表2 )。SPECT仪器测量效率41 4±1 7cps/MBq。经扣除本底的连续配对显像法或连续平面显像法估算肿瘤、全身及主要器官放射性时间分布情况(见表3)。Tab 1 Phamacokineticparametersof1 31 I chTNTafterasingleintravenousdoseof 2 9 6±3 7MBq/kginlungcancerpatients(n =6)Parameters x±sa(MBq/ml) 0 166±0 0 94α(h- 1 ) 1 81±2 3 6b(MBq/ml) 0 3 11±0 0 88β(h- 1 ) 0 0 12±0 0 0 3k2 1(h- 1 ) 1 3 0±1 72k10 (h- 1 ) 0 0 17±0 0 0 3k12 (h- 1 ) 0 499±0 64 5AUC(MBq·h·ml- 1 ) 2 9 1±11 6CL
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