蜂胶(Propolis)是蜜蜂从植物芽苞或树干上采集的树胶混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡后加 工制成的树脂状固态物质,含有大量的生物活性物质和微量元素,具有广泛的药理作用。河南蜂胶 的生物学活性目前尚无相关报道,课题组近来首次就产自河南的蜂胶在不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌作用进行了观察探讨,现将结果报告如下。1 材料与方法11 蜂胶溶液配制 将产自河南新乡的蜂胶溶于95 %乙醇,两周后过滤,得蜂胶乙醇溶液,根据公式:(蜂胶质量-滤渣质量) /溶液体积=蜂胶浓度,计算得蜂胶浓度为3 1% ( g/ml)。1 2 应试菌种 溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus) ,由本实验室提供,使用前将冻存的菌种复苏,接种到pH 6 5固体培养基上,3 7℃恒温培养16～18h备用。1 3 抑菌活力测定 抑菌活力测定采用平板滤纸片法,滤纸片直径6 0mm ,灭菌干燥后备用。固体培养基采用肉汤培养基,配比如下:牛肉5 0 0 g (浸液)、蛋白胨10 g、NaCI 5g、K2 HPO4·12H2 O 1g、琼脂2 0g ,加双蒸水至10 0 0ml ,分别调pH至6 0、6 5、7 0、7 5、8 0 ,每个直径7 5cm培养皿加入12ml培养基,分别制成不同pH平板备用。细菌复苏培养后,取培养至对数期细菌配成6×10 8cells/ml菌液,分别涂于不同的pH平板上,将滤纸片加7μl蜂胶溶液样品,置于不同的pH平板上,3 7℃培养2 4h后测量记录不同pH平板上的抑菌环直径。1 4 实验分组及数据处理 设置6 0、6 5、7 0、7 5、8 0共5个不同的pH平板实验组,每组3次重复,记录河南蜂胶在不同pH平板上对溶壁微球菌的抑 菌效果,所得数据采用t检验进行统计学分析。2 结果河南蜂胶在不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌效果不尽相同,不同pH环境下24h的抑菌环直径见表1。
pH 6 0时,溶壁微球菌生长不良,pH 6 5、pH 7 0、pH 7 5、pH 8 0共4组溶壁微球菌均生长良好,并观察到了抑菌环,pH 6 5时抑菌环直径最大,随pH增加,抑菌环直径变小,不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌效果见图 1。表1 河南蜂胶在不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌环直径(mm)pH实验序号 1 2 3x±s6 52 0 0 2 6 0 2 0 0 2 2 0 0±3 4 67 0 15 0 12 0 11 0 12 6 7±2 0 87 510 511 0 15 512 33±2 758 0 11 0 10 514 512 0 0±2 18图1 河南蜂胶在不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌效果3 讨论蜂胶是蜜蜂从植物芽苞或树 干上采集的树胶混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡后加工制成的树脂状固态物质,含有大量的生物活性 物质和微量元素,具有广泛的药理作用。早在1967年,Lindefelser等就发现蜂胶对多种细菌具有抗菌作用。Kujumgiev等<1>研究报道,不同产地的蜂胶虽然在化学组成上有所不同,温带地区所产蜂胶主要活性成分为黄酮类和 芳香酸,而热带地区所产蜂胶不含此类物质,但抗菌作用基本相同,显示蜂胶抗菌活性为混合物整体效果。Hegazi等<2> 对产自奥地利、德国和法国三地的蜂胶对比研究发现,三地蜂胶化学组成中各成分比例不同,抗菌活 性也不尽相同,德国蜂胶对大肠杆菌和金黄葡萄球菌的活性最强,奥地利蜂胶次之,法国蜂胶抗菌活性最弱。近几年,蜂胶文献日渐增多。我国对蜂胶抗菌作用的公开报道十分零碎<3～6>,河南蜂胶的抗菌活性尚无公开报道,课题组首次对产自河南的蜂胶对溶壁微球菌的抗菌作用进行研究。河南蜂胶在不同pH环境下对溶壁微球菌的抑菌效果不尽相同,pH 6 0时,溶壁微球菌生长不良,即未观察到蜂胶对其抑菌效果,pH 6 5、pH 7 0、pH 7 5、pH 8 0共4组的溶壁微球菌均生长良好,并观察到了抑菌环,pH 6 5时抑菌环直径最大,结果经t检验,pH 6 5组的抑菌环直径显著性大于其他各组(P <0 0 1) ,随pH增加,抑菌环直径变小,但pH 7 0、pH 7 5、pH 8 0各组间抑菌环直径的差异无统计学意义。据此推断,河南蜂胶对溶壁微球菌的抑菌活力在pH为6 5时最强,随pH升高,对溶壁微球菌的抑菌活力下降。河南蜂胶对溶壁微球菌不同pH抑菌作用研究@许兵红$河南省新乡医学院寄生虫学教研室!中国河南新乡453003
@曾莉萍$新乡医学院形态学实验室
@李进芬$新乡医学院形态学实验室
@杨晓$新乡医学院形态学实验室
@艾予川$河南省新乡医学院寄生虫学教研室!中国河南新乡453003
蜂胶;;溶壁微球菌;;pH目的 探讨河南蜂胶在不同 pH条件下对溶壁微球菌的抑菌效果。 方法 采用琼脂平板扩散法 ,以溶壁微球菌为实验菌种 ,将实验分为 5个不同 pH环境组 ,即设置pH 6 0、6 5、7 0、7 5、8 0不同的 pH实验组 ,每组 3次重复 ,每张滤纸片 (直径 6mm)滴加 3 1%河南蜂胶溶液 7μl,记录蜂胶在不同pH条件下对溶壁微球菌 2 4h的抑菌效果。 结果 蜂胶在 pH 6 5、7 0、7 5、8 0不同条件下对溶壁微球菌 2 4h的抑菌环直径 (mm )分别为 :2 2 0 0± 3 46、12 67± 2 0 8、12 3 3± 2 75、12 0 0± 2 18。 结论 河南蜂胶在不同条件下对溶壁微球菌的抑菌效果不尽相同 ,随 pH增加 ,抑菌环直径逐渐变小 ,pH6 5时抑菌环直径最大 ,pH6 5组的抑菌环直径显著性大于其他各组 ,pH7 0、7 5、8 0各组间抑菌环直径无统计学差异 ,提示河南蜂胶在 pH6 5时对溶壁微球菌的抑菌活性最强 ,随pH增加 ,抑菌活性减弱。<1>KujumgievA ,TsvetkovaI,SerkedjievaV ,etal.Antibacterial,antifun galandantiviralactivityofpropolisofdifferent geographicorigin
.JEthmopharmacol,1999,64(3):235-240.
<2>HegaziAG ,AbdeihadyFK ,AbdallahFA .Chemicalcompositionandantimicrobialactivity ofEuropeanpropolis.ZNaturforsch,2000,55(1-2):70-75.
<3>王银龙,张敏丽,程文显,等蜂胶对牙周致病菌的抑制作用安徽中医学院学报,1996,15(4):58-59
<4>张伟,崔同,檀建新,等蜂胶对食品致病菌抑菌作用研究食品科学,1998,19(3):40-42
<5>王晶,李玉晶,张春梅,等蜂胶抑制变形链球菌生长和粘附的体外研究北京口腔医学,2002,10(2):79-81
<6>钟立人,韩文辉,陈荷凤蜂胶对幽门螺杆菌的抑制作用天然产物研究与开发,2002,14(6):38-40河南省教育厅自然科学基金资助项目 (No 2 0 0 3);;
新乡医学院高学历人才基金资助项目约跞酢1>KujumgievA ,TsvetkovaI,SerkedjievaV ,etal.Antibacterial,antifun galandantiviralactivityofpropolisofdifferent geographicorigin.JEthmopharmacol,1999,64(3):235-240.
<2>HegaziAG ,AbdeihadyFK ,AbdallahFA .Chemicalcompositionandantimicrobialactivity ofEuropeanpropolis.ZNaturforsch,2000,55(1-2):70-75.
<3>王银龙,张敏丽,程文显,等蜂胶对牙周致病菌的抑制作用安徽中医学院学报,1996,15(4):58-59
<4>张伟,崔同,檀建新,等蜂胶对食品致病菌抑菌作用研究食品科学,1998,19(3):40-42
<5>王晶,李玉晶,张春梅,等蜂胶抑制变形链球菌生长和粘附的体外研究北京口腔医学,2002,10(2):79-81
<6>钟立人,韩文辉,陈荷凤蜂胶对幽门螺杆菌的抑制作用天然产物研究与开发,2002,14(6):38-40河南省教育厅自然科学基金资助项目 (No 2 0 0 3);;
新乡医学院高学历人才基金资助项目