抗胆碱药物如东莨菪碱(乙酰胆碱M受体阻断剂)等非阿片受体激动剂类戒毒药物在阿片类戒毒中有一定效果<1,2 > 。本研究在以往研究<3 > 的基础上,用中枢多巴胺转运蛋白(DAT)和D2 受体显像剂研究东莨菪碱介入后对吗啡(Mor)依赖大鼠DAT、D2受体的影响,现报道如下。材料与方法1 试剂及仪器。标记前体左旋2 羟基6 甲氧基N<(1 乙基2 吡咯烷)甲基>苯酰胺
及甲基3β(4 碘苯基)托烷 2 β羧酸酯(βCIT)均由核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所提供;Na12 5I(无载体、无还原剂)由中国原子能科学研究院同位素研究所提供;盐酸吗啡(沈阳市第一制药厂) ;氢溴酸东莨菪碱(上海禾丰制药有限公司)。HPLC(5 0 0 0LiquidChromatography ,Varian公司) ;γ计数器(C5 0 0 2Auto GammaCountingSystems ,Packard公司) ;电子天平(AnalyticAC 2 10S ,Sartorius公司)。2 Mor依赖模型及其地点偏爱测试。采用两隔室(C1及C2 )模型训练大鼠对Mor产生条件性位置(地点)偏爱,制成大鼠地点偏爱模型<4> ,具体步骤参照文献<3>。3 实验动物分组。4～5月龄SD大鼠36只,购自复旦大学医学院实验动物中心,雌雄均有,随机分为Mor (按体重2 0mg kg)组、Mor (按体重2 0mg kg) +Sco组及生理盐水对照组,每组12只。Mor +Sco组在腹腔注射Mor前15～30min先腹腔注射Sco (按体重1mg kg) ,共给药8d ;对照组只给予0 3ml生理盐水。3组大鼠再各随机平均分为2组,分别进行12 5I βCIT、12 5I IBZM脑内分布研究。Mor注射均于上午9～12时进行,腹腔注射Mor后30min内经尾静脉注射放射性示踪剂。4 12 5I βCIT的标记参照文献<3>,12 5I IBZM的标记参照Kung等<5> 的方法,2种标记物放化纯均在92 %以上。5 脑内放射性分布研究。大鼠固定后经尾静脉按体重注入12 5I IBZM、12 5I βCIT 2 7 7MBq kg (0 3ml生理盐水溶液) ,2h后快速断头取脑,取出纹状体(ST)、伏隔核(NAC)、海马(HIP)、额叶(FC)、小脑(CB)等,称湿重后,用γ计数器测定12 5I βCIT、12 5I IBZM的脑区内放射性,计算与标准源1%计数的比值,得到每克组织百分注射剂量率(%ID g ,简称摄取率) ,并计算相应脑组织与小脑的摄取率比值- 1,即特异性摄取率。6 统计学处理。数据均以 x±s表示,多组比较行ANOVA统计分析,2组间比较行t检验。结 果1 行为改变。注射Mor 2～5min后Mor组大鼠均表现运动活动增加;Mor +Sco组则无明显运动活跃表现。地点偏爱测试示,Mor组自C1进入C2室的时间随注射Mor天数增加逐渐缩短;Mor +Sco组虽亦呈逐渐缩短的趋势,但其缩短程度不及Mor组明显(图1)。Mor组大鼠第2～4天起进入C2室的时间逐渐缩短,由第1天的(1 6 8±0 5 7)min降至第8天的(0 38±0 16 )min ;Mor +Sco组大鼠自C1进入C2室的时间第1天至第8天略有降低趋势,由第1天的(1 72±0 6 9)min降至第8天的(1 12±0 33)min ,第1天3组间差异无显著性(P >0 0 5 ) ,第8天Mor组及Mor +Sco组均低于对照组<第1天:(1 6 0±0 5 5 )min ,第8天:(1 88±0 5 4)min ;t=5 6 82、6 372 ,P均<0 0 5 >,但Mor +Sco组仍高于Mor组(t =5 171,P <0 0 5 )。表明Mor组经训练及Mor地点配对刺激,对C2室产生明显的地点偏爱倾向,而Mor +Sco组大鼠虽也出现对C2室的地点偏爱倾向,但其对Mor的渴求程度不及Mor组明显。2 12 5I βCIT在Mor及Mor +Sco组大鼠的脑内分布。Mor组大鼠ST、NAC的%ID g分别为4 2 0 5±0 4 10、1 770±0 14 1,明显高于对照组(2 4 31±0 10 4、1 4 41±0 0 4 3,t=5 911、6 130 ,P均<0 0 5 ) ;Mor+Sco组ST、NAC的%ID g分别为3 30 7±0 189、1 5 77±0 4 0 1,明显高于对照组(t=4 15 1、5 4 16 ,P均<0 0 5 ) ,但低于Mor组(t=4 871、6 92 2 ,P均<0 0 5 ) ;Mor组、Mor +Sco组及对照组CB的%ID g分别为0 2 5 0±0 0 81、0 2 19±0 0 6 3、0 2 2 4±0 0 0 9。表明长期Mor暴露使12 5I βCIT与脑内DAT的结合出现变化,提示ST、NAC的DAT呈上调性变化,Sco的介入不同程度地抑制了这种上调趋势。3 12 5I IBZM在Mor及Mor+Sco组大鼠的脑内分布。Mor +Sco组12 5I IBZM在ST、NAC、HIP及FC的%ID g分别为0 5 89±0 0 81、0 6 83±0 0 4 6、0 175±0 0 39和0 2 5 7±0 0 34,低于对照组(0 735±0 0 96、0 70 9±0 0 98、0 2 81±0 0 38、0 2 89±0 0 2 0 ,t =7 84 1、6 170、5 4 46、4 337,P均<0 0 5 ) ,高于Mor组(0 5 40±0 0 98、0 6 40±0 0 6 1、0 14 0±0 0 17、0 2 32±0 0 15 ,t =6 0 2 1、3 2 2 7、5 113、6 174 ,P均<0 0 5 )。CB的%ID gMor组为0 10 8±0 0 38,Mor +Sco组0 0 97±0 0 19,对照组0 110±0 0 4 4,3组间无明显差异(P >0 0 5 )。提示长期Mor暴露时,ST、NAC、HIP、FC区域的D2 受体出现了下调,Sco的介入可阻止上述区域D2 受体的下调反应。讨 论DA受体与M受体有密切的相互调节关系<6> 。Gronier等<7,8> 研究发现在黑质(A9)和腹侧背盖区(VTA) (A10 )的DA能神经元上存在具有功能活性的M受体,激活M受体可增强DA神经元放电。刺激VTA的M受体可激活中脑 皮层 边缘DA系统<9> ;激动M受体可以抑制大鼠中脑γ氨基丁酸(GABA)神经元的突触传递活动<10 > ,而中脑的GABA神经元对DA的释放具有抑制性调节作用,因此激动M受体可能会间接促进DA 释放。Imperato等<1>研究显示,长期给予Mor导致HIP等脑区乙酰胆碱(Ach)释放增加,在连续给予Mor第5天和第7天,Mor导致Ach释放分别增加50 %和10 0 % ,伴随这种释放增加,大鼠的行为状态也由起初的木僵、镇静状态转为行为活动增加。笔者前一阶段 的研究显示,Ach系统在Mor长期暴露时与DA系统一起参与了行为功能的调节,并推测Mo r组HIP、FC等区域M受体的轻度增高可能与Mor依赖中觅药行为的学习记忆强化过程有关<3> 。由于阿片类依赖引起胆碱能系统功能亢进,使抗胆碱药物如Sco等非阿片受体激动剂类戒毒药物 在阿片类戒毒中得到应用,并取得了一定的临床效果,它可避免以阿片受体激动剂如美沙酮等为戒 毒剂即“以瘾代瘾”形成新的依赖负性效应,为阿片类的临床脱毒开辟了新的治疗途径。本研究发现,Mor组经训练及Mor地点配对刺激,对C2室产生明显的地点偏爱倾向,而Mor+Sco组大鼠虽然也出现对C2室地点偏爱倾向,但其对Mor的渴求程度不及Mor组明显,这提示Sco可能对Mor所产生的精神依赖有一定阻止作用。脑内分布研究表明,Mor +Sco组ST、NAC对12 5I βCIT的摄取高于对照组,但低于Mor组,表明Sco的介入影响到Mor依赖大鼠脑内DA能 活动,Mor使ST、NAC的DAT呈上调性变化;而Sco的介入不同程度地抑制了这种上调趋势。长期Mor暴露使ST、NAC、HIP、FC区域的D2受体出现了下调反应,Sco介入可阻止Mor依赖时上述脑区D2 受体的下调,提示Sco的作用可能与其影响到DA能系统的功能活动有关。东莨菪碱对吗啡依赖大 鼠脑多巴胺转运蛋白及D_2受体的影响@林岩松!100730$中国医学科学院、中国协和医科大学北京协和医院核医学科
@丁时禹$核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所
@陈正平$核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所
@周翔$核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所
@方平$核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所
@王博诚$核医学国家重点实验室、江苏省原子医学研究所
@王世真!100730$中国医学科学院、中国协和医科大学北京协和医院核医学科吗啡;;依赖(心理学);;东莨菪碱;;多巴胺转运蛋白;;受体,多巴胺D2;;大鼠目的 探讨东莨菪碱(Sco)对吗啡 (Mor)依赖大鼠多巴胺 (DA)系统多巴胺转运蛋白(DAT)及D2 受体的影响。方法 4～ 5月龄SD大鼠 36只 ,随机分为Mor(按体重 2 0mg kg)组、Mor(按体重 2 0m
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