6- 4- (取代苯基 )哒嗪酮类化合物在心脑血管系统有广泛药理作用。有些化合物不但有较强的抑制血小板聚集和降血压作用 ,还有强心作用 <1>。其作用机制是通过抑制细胞 c AMP磷酸二酯酶 (PDE ) ,从而提高 c AMP的水平 ,发挥抑制血小板聚集和正性肌力作用。研究的日益深入 ,发现了一些活性很高的化合物 ,如 6- <4- (4-苯乙酰基哌嗪基 )苯基 >-5-甲基 - 4,5-二氢 - 3(2 H)哒嗪酮 <2 > ,CI91 4<3 > ,CI930 <3 > ,Y590 <4 > ,MCI- 1 54<4 > ,匹莫苯 (pimoben-dan) <4 > 等。MCI- 1 54和匹莫苯还可通过提高钙离子对心肌收缩蛋白的敏感性而发挥强心作用 ,这是既不同于强心甙类 ,也不同于儿茶酚胺类的强心作用。寻找既能抑制磷酸二酯酶 ,提高心肌细胞 c AMP水平 ,又能增强钙离子对收缩蛋白敏感性的新型强心药 ,受到日本、欧洲和北美等发达国家的重视 ,是开发新型心脑血管系统药物的重要研究方向之一。1 材料和方法1 .1 仪器和材料 熔点由毛细管熔点仪测定 ,温度计未经校正。Carlo Erbal1 0 6型自动元素分析仪 ;Hitachi2 70 - 50型红外光谱仪 ;Bruker AC- 30 0 D型磁共振仪 ,DMSO- d6为溶剂 ,TMS为内标 ;薄层层析 (TLC)用硅胶 GF2 54 ,柱层析用硅胶 H(1 0～ 40μm) (青岛海洋化工厂 ) ;PAM2 - PPP型自动平衡血小板聚集仪。实验动物为新西兰雄性大白兔 ,由第二军医大学实验动物中心提供 ;ADP为美国 Sigma公司产品 ,CCI1 781 0为本教研室合成。1 .2 化合物的设计和合成 蒋勤<3 > 、张广明等<5> 报道一系列哌嗪基 4-位酰化的哒嗪酮类化合物有较强的体外抑制 ADP诱导的血小板聚集作用 ,我们也曾报道哌嗪基烷基化衍生物也有较强的抗血小板聚集活性<4 ,6> 。为了寻找更好的抗血小板聚集药物 ,我们设计合成了具有如下结构的化合物 : 以乙酰苯胺为原料 ,经傅 -克反应、水解反应及水合肼环合反应得 6- (4-哌嗪基苯基 ) - 4,5-二氢 - 3(2 H) -哒嗪酮 ,将其与各种溴代苯乙酮反应得目标化合物 (见表 1 )。合成路线见图 1。图 1 目标化合物的合成路线Fig1 Synthetic route of title com poundsR:See table 11 .2 .1 中间体的合成 按文献 <7>方法由乙酰苯胺为原料合成得中间体 6- (4-哌嗪基苯基 ) - 4,5-二氢 - 3(2 H-哒嗪酮。1 .2 .2 6- <对 - <(4-氯苯乙酮基 )哌嗪基 >苯基 >- 4,5-二氢 - 3(2 H)哒嗪酮的合成 取 6- (对 -哌嗪基苯基 ) -4,5-二氢 - 3(2 H)哒嗪酮 0 .8g(1 .5mmol)和三乙胺0 .6g,溶于 1 0 ml DMF中 ,冰浴条件下滴加ω-溴代对氯苯乙酮 0 .59g(2 .5mmol)的 DMF溶液 ,反应4h。TLC跟踪反应 ,反应毕加适量水 ,有沉淀析出 ,过滤 ,水洗数次 ,丙酮洗 1次 ,烘干得 0 .73g,产率56.8% ,mp. 1 94～ 1 95℃。元素分析 C2 2 H2 3N4 O2 Cl,计算值 (% ) :C64.31 ,H5.60 ,N1 3.64;实测值(% ) :C64.54,H5.42 ,N1 4.0 3。 1HNMR(CDCl3)δ:1 0 .61 (1 H,s,NH) ,8.0 2 (2 H,d,ph- H) ,7.61(2 H,d,ph- H) ,7.48(2 H,d,ph- H) ,6.90 (2 H,d,ph- H) ,3.87(2 H,s,CO- CH2 - N) ,3.31 (4H,t,哌嗪环上 CH2 ) ,2 .93(2 H,t,CH2 C=O) ,2 .73(4H,t,哌嗪环上 CH2 ) ,2 .46(2 H,t,CH2 C=N)。其他目标化合物均按照 1 .2 .2的方法合成。1 .3 药理实验 参考 Born比浊法 <8> ,测定了先导化合物 CCI- 1 781 0和 1 1个目标化合物对 ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集的 IC50 。具体方法为新西兰大白兔心脏取血 ,离心制备富含血小板血浆(PRP)和贫含血小板血浆 (PPP) ;用 PRP和 PPP调整血小板聚集仪。取 2 0 0μl PRP于比色管中 ,加入 1μl DMSO,37℃孵温 1 0 min,搅拌 40 s后 ,分别加入不同剂量的 ADP,搅拌下观察 5min内血小板的最大聚集程度 ,从而摸出诱导剂的阈剂量 ;再将供试样品配成不同浓度的 DMSO溶液 ,加入到含 2 0 0 μlPRP的比色管中 ,37℃孵温 1 0 min ,搅拌 40 s后 ,加入阈剂量的 ADP,搅拌下观察 5min内血小板的最大聚集程度 ,计算血小板聚集的抑制百分率 ,并用回归法求得 IC50 。2 结果和讨论所合成的 1 1个化合物均未见文献报道 ,其结构经元素分析和 1HNMR等波谱测试所证实。化合物的理化数据、波谱数据见表 1。 在分子中引入哌嗪环时 ,选用 Tominaga等的实验方法 ,试剂易得 ,操作简便 ,步骤较少。但也发现表 1 目标化合物的结构、产率和物理数据Tab 1 Structure,yield rate and physical data of the title com pounds反应不完全的问题 ,这里有两方面的原因 ,一是反应过程中一直是非均相体系 ,二是所用的溴化二乙基胺氢溴酸盐的纯度不够。在后处理时 ,根据反应物与产物的碱性的不同纯化得纯品。初步的体外药理实验结果表明 ,目标化合物1～ 1 1的 IC50 分别为 46.4,1 8.2 ,1 6.2 ,1 0 .0 ,2 5.1 ,68.3,49.8,66.8,1 3.4,46.5,1 4.8μmol/L。CCI1 781 0的 IC50 为 1 2 .5μmol/L。结果表明大部分目标化合物都有不同程度的体外抑制 ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集活性 ,化合物 (4)的活性最强 ,强于先导化合物 CCI 1 781 0。化合物 (3) ,(9) ,(1 1 )也有较强的活性。对目标化合物的构效关系分析表明 ,当分子中哌嗪环 4-位引入取代苯乙酮基时 ,有一定的抑制血小板聚集作用 ;芳环上取代基的电性效应对化合物的活性无明显的影响 ;哌嗪环 4-位上引入取代苯乙酮基不如引入烷基或芳环对活性有益。总的说来 ,对哌嗪环 4-位上引入亲脂性较大的基团对活性有利 <6>。当分子中引入苯乙酮基时 ,可能由于羰基极性较大 ,影响分子的亲脂性 ,使得目标化合物的活性不强。6-<4-<4-(取代苯乙酮基)哌嗪基>苯基>哒嗪酮类化合物的合成及抑制血小板聚集作用@吴秋业$第二军医大学药学院有机化学教研室!上海200433
@倪瑾$海医系放射医学教研室
@吴波$军事医学科学院毒物药物研究所七室
@刘超美$第二军医大学药学院有机化学教研室!上海200433
@张广明$第二军医大学药学院有机化学教研室!上海200433
@廖洪利$第二军医大学药学院有机化学教研室!上海200433哒嗪酮类;;血小板聚集;;血小板聚集抑制剂;;化学合成目的 :设计合成一类 6 - (取代苯基 ) - 4,5 -二氢 - 3( 2 H)哒嗪酮类化合物 ,以期发现作用更强的血小板聚集抑制剂。 方法 :以乙酰苯胺为原料 ,经酰化反应、傅 -克反应、水解反应及水合肼环合反应、溴化反应、烷基化反应等一系列反应合成目标化合物 ,并参考 Born方法进行体外药理实验。 结果 :共合成 6 - <4- (取代哌嗪基 )苯基 >- 4,5 -二氢 - 3( 2 H)哒嗪酮类化合物 11个 ,均属首次报道 ,并通过元素分析、1 HNMR确证结构。初步的体外药理实验表明 :大部分目标化合物都有不同程度的抑制ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集的作用。 结论 :首次合成了 11个 6 - <4- <4- (取代苯乙酮基 )哌嗪基 >苯基 >- 4,5 -二氢 - 3( 2 H)哒嗪酮类化合物 ,其中化合物 ( 4)抑制血小板聚集作用的活性最强 ,与先导化合物 CCI17810相当 ,化合物 ( 3) ,( 9) ,( 11)等也有较强的活性。<1> Bristol JA,Sircar L ,Moos WH,et al.4,5 -Dihydro-6 -
<4-(1H-imidazol-1-yl) phenyl> -3(2 H) -pyridazinones:novel posi-tive inotropic agents for the treatment of congestive heart fail-ure
.JMed Chem,1984,2 7(9) :10 99-110 3.
<2 > 王恩思 ,沈家聪 .新型强心药物匹莫苯的合成 .中国药物化学杂志 ,1997,7(3) :185 -190 .
<3> 蒋 勤 ,孙常晟 .6 -(4 -取代苯基 ) -4 ,5 -二氢 -3(2 H) -哒嗪酮类化合物的合成及其抑制血小板的作用 .药学学报 ,1990 ,2 5(8) :5 98-6 0 3.
<4> 吴秋业 ,张广明 ,廖洪利 ,等
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