胞必佳(红色诺卡氏菌细胞壁骨架,N-CWS)系新一代免疫佐剂<1,2,3>,其免疫活性强 ,是很有价值的抗肿瘤新药<4>,其主要成分为诺卡氏菌酸、阿拉伯半乳聚糖和粘肽<5>,在 制备胞必佳的工艺流程中即有高温和热处理步骤,但至今尚未见文献报道胞必佳的热稳定性。为此 ,我们开展了热对胞必佳性质影响的研究。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品 胞必 佳(N-CWS冻干剂,本所提供),批号:990507,990508,990709。1. 1.2 标准品 阿拉伯糖:ArabinoseSigmaCO.NOA3256Mol.Wt .150,半乳糖为生化试剂,上海试剂厂出品。1.1.3 动物 普通级昆明种小白鼠(福建 省卫生防疫站动物场提供,雌性,体重18g～22g。1.1.4 瘤株 S180A购自中国 科学院上海药物所,福建省医学科学研究所传代保种。1.2 方法胞必佳加热:将冻干剂置10 1-1型干燥箱(上海市实验仪器厂),分别加热至121℃15min～150min,130 ℃、140℃、150℃、160℃、170℃各15min。置冷后取出观察并检测其理化性质 和生物活性。1.2.1 性状:冻干剂应为白色疏松状体。1.2.2 溶解性:加入注射用水 1ml后3min内完全溶化呈白色混匀的混悬液判定为溶解,否则为不溶。1.2.3 pH值 :加注射用水制成每ml含N-CWS200μg的混悬液,采用PHS-25酸度计(上海雷磁 仪器厂)测定<6>,pH值应为5～7。1.2.4 N-CWS含量:A精密称取在60℃减 压干燥1h的阿拉伯糖与半乳糖对照品适量,按阿拉伯糖:半乳糖=2.5∶1(摩尔比)配制成 每1ml含阿拉伯糖50μg、60μg、70μg、80μg、90μg的溶液,精密量取上述 溶液各2ml置具塞试管中,在冰浴冷却条件下,分别加入2%蒽酮乙酸乙酯液0.5ml浓硫酸 4.0ml,摇匀,于80℃水浴保温30min,立即用流水冲冷至室温以721型分光光度计 (上海第三分析仪器厂)照分光光度法<8>测定吸收度(以水代替标准溶液作空白对照),绘制 标准曲线。B以样品液代替标准溶液,同法测定吸收度,从标准曲线上找出阿拉伯糖量,即可算出 N-CWS含量。1.2.5 抑瘤试验:抽取生长7d的S180A小鼠腹水,计数后稀释成每 毫升含2×107个细胞,将样品溶于生理盐水中配成2000μg·ml-1,取1.0ml瘤 细胞液与1.0ml样品液混合均匀,同法以生理盐水作对照,即分别以每只200μg/0.2 ml接种至小鼠右腋皮下(试验组及对照组各10只小鼠),第14天解剖,计算瘤重抑制率。抑 瘤率应为50%以上。2 结果2.1 热对胞必佳的理化性质的影响胞必佳在121℃加热15 0min以内或不高于150℃加热15min,其色泽性状、溶解性及pH值均无明显影响(见 表1)。表1 热对胞必佳的理化性质的影响温度℃与时间min颜色形状溶解性pH值加热前白 色疏松状溶解6.25121、15白色疏松状溶解6.23121、30白色疏松状溶解6.2 1121、45白色疏松状溶解6.15121、60白色疏松状溶解6.18121、75白色 疏松状溶解5.85121、90白色疏松状溶解5.98121、105白色疏松状溶解6.1 3121、120白色疏松状溶解6.10121、135白色疏松状溶解6.02121、15 0白色疏松状溶解5.78130、15白色疏松状溶解6.30140、15白色疏松状溶解6 .28150、15白色疏松状溶解6.31160、15黄色缩成一小块不溶/170、15黄 色缩成一小块不溶/2.2 热对胞必佳的N-CWS含量的影响如表2所示,胞必佳在121℃ 加热150min以内或不高于150℃加热15min,N-CWS含量无明显变化。表2 热 对胞必佳的N-CWS含量*的影响加热温度(℃)加热前121℃121℃121℃121℃1 21℃时间min15306090120N-CWS含量%10010210091.498. 1100加热温度(℃)121℃130℃140℃150℃160℃170℃时间min150 1515151515N-CWS含量%99.497.595.398.1// * 含量为 标示量的百分率2.3 热对胞必佳的抑瘤活性的影响如表3所示,胞必佳在121℃加热150 min以内或不高于150℃加热15min与加热前的抑瘤率均在50%以上,符合胞必佳质检 规程<8>的要求。表3 热对胞必佳抑小鼠S180A活性的影响温度与时间(℃)阴性对照加 热前121℃、15min121℃、150min150℃、15min抑瘤率(%)/70. 9675.0756.7161.92P值/<0.001<0.001<0.001<0.00 13 讨论本研究证明胞必佳在121℃加热150min以内或不高于150℃加热15min 时,其色泽、溶解性、pH值及N-CWS含量均无明显变化,对小鼠S180抑瘤率均在50% 以下。当加热到160℃以上,性质非常明显的改变。这可能是因为121℃加热不超过150m in或150℃以下加热15min,物料空间仍保留松懈状态,因而理化性质及生物学性质未明 显改变,而加热到160℃以上15min,空间结构破坏而变性失活。热对胞必佳的理化性质和 生物活性的影响@张祝兰$国家医药管理局!福建省微生物研究所福州350007@林善$国家 医药管理局!福建省微生物研究所福州350007@唐文力$国家医药管理局!福建省微生物研 究所福州350007@洪金基$国家医药管理局!福建省微生物研究所福州350007胞必佳 ;;热稳定性;;活性;;理化性质探讨热对胞必佳的理化性质和生物活性的影响,将胞必佳分别 加热至121℃15min～150min,130℃、140℃、150℃、160℃、170 ℃各15min。结果,加热121℃150min以内或不高于150℃15min的各试验组与未加热样品比较,其外观性状、溶解性、pH值、N—CWS含量均无明显变化,对小鼠S180抑瘤率均在50%以上。结果表明胞必佳能耐受121℃150min或150℃15min。<1>Azum a I,Taniyama T,Hirao F,et al.Antitumor activity of cell-wall skeletons and peptidoglycolipids of mycobacteria and relatedmicroorganisms in mice and rabbits,Gann 1974;6 5 :493～ 5 0 5 .
<2 > Azuma I,Taniyam a T,Yamawaki M et al.Adjuvant andantitumor activities of Nocardia cell-wall skeletons,Gann1976 ,6 7:733～ 736
<3>洪金其 ,陈必兴 ,王清波 ,等 .N-CWS药效学和毒理学的研究 ,福建医学院学报 (增刊 ) ,1992 ,2 6 :80 83.
<4>俞受程 .红色诺卡氏菌细胞壁骨架 (N-CWS) 期临床试验 ,中国肿瘤临床 (增刊 ) ,1995 ,2 2 :2 5 42 5 7.
<5 >王清波 ,张祝兰 ,陈君玉 ,等 .Po-8菌株的 N-CWS理化性质及化学成分分析 ,福建药学杂志 ,1991,3(1) :2 5～ 2 6 .
<6 >卫生部药曲委员会 .中国药典 (二部 ) ,1995 ,附录 38.
<7>卫生部药典委员会 .中国药典 (二部 ) ,1995 ,附录 17.
<8>卫生部药品生物制品检定所 .冻干 N-CWS检定暂行规程 ,1989, al.Antitumor activity of cell-wall skeletons and peptidoglycolipids of mycobacteria and relatedmicroorganisms in mice and rabbits,Gann 1974;6 5 :493～ 5 0 5 .
<2 > Azuma I,Taniyam a T,Yamawaki M et al.Adjuvant andantitumor activities of Nocardia cell-wall skeletons,Gann1976 ,6 7:733～ 736
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<7>卫生部药典委员会 .中国药典 (二部 ) ,1995 ,附录 17.
<8>卫生部药品生物制品检定所 .冻干 N-CWS检定暂行规程 ,1989,
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