病毒性心肌炎目前尚无有效的防治手段，在其发病机理中免疫反应起着重要作用。１９９２年国外首 次在动物实验中证实了人静脉血丙种球蛋白（ＩＶＩＧ）对病毒性心肌炎小鼠的保护及治疗作用［ １］，随后试用于临床，取得了较为满意的结果［２］。目前国内无类似的研究，我们用小鼠柯萨 奇Ｂ３（ＣＶＢ３）病毒性心肌炎模型对国产ＩＶＩＧ在该疾病的预防及治疗中的作用进行了研究 ，现报道如下。１材料和方法１．１实验动物及分组雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠１５６只（本校实验动 物中心提供），４～５周龄、体重１３～１５ｇ，随机分为保护组８０只、治疗组７６只。１．２ 病毒ＣＶＢ３病毒（Ｎａｎｃｙ株），５０％组织感染率（ＴＣＩＤ－５０）为１０８。１．３实 验方法１．３．１ＩＶＩＧ保护组取８０只小鼠，随机分为Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐｃ各２０只。动 物腹腔注射５×１０５ＴＣＩＤ５０含ＣＶＢ３的ＭＥＭＥａｇｌｅ液０．１ｍｌ后半小时，分别 按Ｐ１组２００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１、Ｐ２组５００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１、Ｐ３组１ｇ· ｋｇ－１·ｄ－１给予经５％葡萄糖稀释的ＩＶＩＧ腹腔注射，连用７天，对照组Ｐｃ组接种病毒 后仅注射５％葡萄糖液７天。１４天后处死动物，记录体重（ＢＷ）、心脏重量（ＨＷ），用计算 机图象分析系统测定心肌病灶数及病变面积。实验中途死亡的动物，记录死亡时间，固定心脏待检 。１．３．２ＩＶＩＧ治疗组取７６只小鼠，腹腔注射与保护组同等浓度的病毒７天后，将存活动 物（６０只）中发病和正常者分别随机分为４组，再重新组合成Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔｃ，每组１ ５只动物。其中实验组（Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３）按与Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３组相同剂量每日腹腔注射ＩＶ ＩＧ共７天，对照组Ｔｃ注射５％葡萄糖液７天。记录死亡情况，中途死亡者立即取心脏固定待检 ，１４天后处死存活动物，同上法称重并固定心脏送检。１．３．３正常小鼠对人血ＩＶＩＧ的耐 受性为排除人血ＩＶＩＧ作为异种抗原对小鼠所致的血清学反应而引起动物死亡，取同种龄正常小 鼠５只，按ＩＶＩＧ用量１ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×７天，腹腔注射，观察１４天。１．４药品及 仪器冻干低ｐＨ人血ＩＶＩＧ（卫生部成都生物制品研究所），Ｍｉａｓ－２０００图象分析系统 ，ＴＧ３２８Ｂ型分析天平。１．５统计学处理生存分析用Ｌｏｇ－ｒａｎｋ检验；小鼠ＢＷ、Ｈ Ｗ及ＨＷ／ＢＷ用单因素方差分析，两两比较用ｑ检验；图象分析结果用ｔ检验；组织病变发生率 比较用确切概率计算法。α＝０．０５，双侧。２结果２．１发病情况及生存率２．１．１ＩＶＩ Ｇ保护组Ｐ１组３只出现少动、拱背、拒食、被毛凌乱等发病症状，死亡１只；Ｐ２、Ｐ３两组均 无发病，无死亡；Ｐｃ组共有１４只动物发病，死亡７只。其生存率分别为Ｐ１组９５％、Ｐ２组 １００％、Ｐ３组１００％、Ｐｃ组６５％。Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３三个组生存率均显著高于Ｐｃ组（ Ｐ＜０．０５），但Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３三个治疗组之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。２．１． ２ＩＶＩＧ治疗组７６只小鼠接种ＣＶＢ３第７天时存活６０只，其中５１只有发病症状，治疗开 始时发病的动物的比率分别为：Ｔ１组１３／１５、Ｔ２组１２／１５、Ｔ３组１３／１５、Ｔｃ 组１３／１５。观察结束时Ｔ１组死亡３只，存活的１２只中仍有４只有轻微异常表现；Ｔ２组和 Ｔ３组各死亡１只，存活动物表现正常；Ｔｃ组死亡７只，存活的８只动物有５只异常。其生存率 分别为Ｔ１组８０．０％、Ｔ２组９３．３％、Ｔ３组９３．３％、Ｔｃ组５３．３％。Ｔ１组与 Ｔｃ组相比差异无显著性（Ｐ＞０．０５），Ｔ２、Ｔ３两组生存率均显著高于Ｔｃ组（Ｐ＜０． ０５）。Ｔ２、Ｔ３组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。２．２各组存活小鼠的ＨＷ、ＢＷ、Ｈ Ｗ／ＢＷ结果见表１。保护组中３个用药组动物ＢＷ增加，而ＨＷ无明显增加，ＨＷ／ＢＷ较小。 Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、与Ｐｃ相比ＢＷ、ＨＷ和ＨＷ／ＢＷ差异显著，但Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３三者间差 异不显著（Ｐ＞０．０５）。而在已发生心肌炎的动物中使用ＩＶＩＧ后，动物ＢＷ增加，ＨＷ减 轻，而对照组ＢＷ未增加，ＨＷ较大。Ｔ１与Ｔｃ相比ＢＷ、ＨＷ、ＨＷ／ＢＷ差异无显著性，Ｔ ２、Ｔ３与Ｔｃ相比差异显著，但Ｔ２和Ｔ３间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。表１ＩＶＩＧ保 护组及治疗组小鼠的ＨＷ、ＢＷ及ＨＷ／ＢＷＴａｂｌｅ１ＴｈｅＢＷ、ＨＷａｎｄＨＷ／ＢＷｏ ｆｍｉｃｅｓｉｎｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｇｒｏｕｐＧ ｒｏｕｐｓＢＷ（ｇ）ＨＷ（ｇ）ＨＷ／ＢＷ（１０－３）Ｐ１１７．４５±１．４４＊０．０６ ２±０．０１４＊３．５１±０．６９＊＊Ｐ２１７．１７±２．６５＊０．０６０±０．０１６ ＊３．４６±０．５１＊＊Ｐ３１７．９７±１．６５＊０．０６１±０．０１６＊３．３３±０ ．６７＊＊Ｐｃ１４．１３±０．８９０．０８７±０．０２２６．１８±１．４６Ｔ１１７．３ ６±４．６９０．０７５±０．０４４４．１３±１．５５Ｔ２１８．８４±２．８４＊０．０６ ３±０．０１３＊３．３５±０．４５＊＊Ｔ３１９．５０±１．２７＊０．０５２±０．０１４ ＊２．６４±０．６１＊＊Ｔｃ１５．３０±３．２８０．０８９±０．０１７５．８８±０．８ １Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１２．３病理组 织学检查２．３．１ＩＶＩＧ保护组Ｐ１组２例发现心肌炎，病变率为１０％，病变极其轻微，仅 见１～２个炎性病灶，且炎症仅累及心肌层（图１）。Ｐ２、Ｐ３组无病变。而Ｐｃ组病变明显， 病变率为７０％，炎症累及心肌各层，病灶分布广泛，心肌坏死崩解，大量炎性细胞浸润并有中度 钙化。Ｐ１组与Ｐｃ组病变率相比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。心肌病变图像分析见表２。Ｐ １与Ｐｃ组相比病变平均面积、病变总面积／所测心肌总面积差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。 ２．３．２ＩＶＩＧ治疗组Ｔｃ组心肌病变较重，病变率为７３．３％，炎症广泛，钙化明显。Ｔ １组病变率为４６．７％，病灶数、病变面积、炎性浸润及钙化程度有所减轻，但与Ｔｃ组相比， 病变率差异尚无显著性。Ｔ２、Ｔ３组病变较上述两组均明显轻微（图２），病变率分别为３３． ３％和２０％，与Ｔｃ组相比差异有显著性；心肌坏死灶少，淋巴细胞浸润减少，部分病灶有纤维 组织修复征象，钙化不明显。各组图像分析见表２。其Ｔ１与Ｔｃ相比病变平均面积、病变总面积 ／所测心肌总面积差异无显著性，Ｔ２、Ｔ３与Ｔｃ相比病变平均面积、病变总面积／所测心肌总 面积相比差异有显著性，但Ｔ２、Ｔ３间差异无显著性。图１Ｐ１组心肌病变。ＨＥ×２００Ｆｉ ｇ１ＭｙｏｃａｒｄｉａｌｌｅｓｉｏｎｏｆｇｒｏｕｐＰ１．ＨＥ×２００Ｏｎｌｙｏｎｅｓｍ ａｌｉｎｆｌａｍｍｔａｒｙｌｅｓｉｏｎｉｎｔｈｅｈｅａｒｔ图２Ｔ２组心肌病变。ＨＥ×２ ００Ｆｉｇ２ＭｙｏｃａｒｄｉａｌｌｅｓｉｏｎｏｆｇｒｏｕｐＴ２．ＨＥ×２００Ｓｍａｌｅ ｒｓｌｉｇｈｔｉｎｆｌａｍｍｔａｒｙｌｅｓｉｏｎｓｉｎｔｈｅｈｅａｒｔ表２ＩＶＩＧ保护 组及治疗组心肌病变计算机图像分析结果Ｔａｂｌｅ２Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｍｐｕｔｅ ｒｉｍａｇｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｌｅｓｉｏｎｉｎＩＶＩＧｐｒｏｔｅ ｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｇｒｏｕｐＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｇｒｏｕ ｐＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｇｒｏｕｐＰ１Ｐ２Ｐ３ＰｃＴ１Ｔ２Ｔ３ＴｃＦＡ１１００１４７９ ８３４１９１５４ＴＡＡｍｍ２９４００１５．６３８．７８１．４８０．４８２０．２３ＡＡＡ ｍｍ２０．１７＊＊０００．１１０．０８９０．０４４＊０．０２６＊０．１３ＴＡＡＭｍｍ２ １３７．２１－－１３２．６１１３１．５５１４９．３４１２９．７５１４２．８７ＴＡＡ／Ｔ ＡＡＭ１０－２０．１４＊＊－－１１．７９６．６８１．００＊＊０．３７＊＊１４．１６Ｃｏ ｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ＊＊Ｐ＜０．０１，＊Ｐ＜０．０５ＦＡ：ｆｏｃｕｓａｍ ｏｕｔＴＡＡ：ｔｈｅｔｏｔａｌａｒｅａｅｏｆａｆｅｃｔｉｏｎ；Ｃｏｍｙｚａｒｅｄｗｉｔ ｈｃｏｎｔｒｏｌ；ＡＡＡ：ｔｈｅａｖｅｒａｇｅａｒｅａｅｏｆａｆｅｃｔｉｏｎ；ＴＡＡＭ ：ｔｈｅｔｏｔａｌａｒｅａｅｏｆｍｅｔｅｒｅｄｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ２．３．３正常小鼠注 射ＩＶＩＧ后未见动物有任何异常表现，全部存活。观察结束时分别取心、肺、脑、肝、肾、脾及 骨骼肌进行病理组织学检查，亦未见异常。３讨论３．１小鼠感染ＣＶＢ３后ＩＶＩＧ对心肌的保 护作用ＩＶＩＧ对病毒的直接作用归因于其中存在的特异性抗体，ＩＶＩＧ是从大量混合血浆中纯 化出来的，含有针对大多数病毒的中和抗体，如腺病毒、柯萨奇病毒、巨细胞病毒、流感、麻疹及 呼吸道合胞病毒的抗体等［３］。ＩＶＩＧ对感染ＣＶＢ３小鼠的保护作用，也主要是因为其中高 浓度的中和抗体直接与感染的病毒相结合，并将其从体内清除出去，防止了病毒的复制及心肌炎的 发生。关于预防性使用ＩＶＩＧ的剂量大小，Ｈｉｔｏｓｈｉ等［１］对接种ＣＶＢ３的小鼠立即 使用剂量为１ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１的ＩＶＩＧ注射１４天，动物完全保护，无心肌炎发生。Ｗｅ ｌｅｒ等［４］分别在病毒接种前，接种同时及接种后３天使用丙种球蛋白，结果显示接种前及接 种时用药可完全抑制心肌炎发生；感染后３天用药，心肌病变及心肌中病毒滴度均低于对照组（Ｐ ＜０．０５），而丙种球蛋白的用量仅为临床推荐剂量（４００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）的１／ １６。提示ＩＶＩＧ对小鼠心肌炎的预防尚有可能在更小的剂量得以实现。本文实验结果证实低于１ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１剂量的ＩＶＩＧ仍可取得满意的预防心肌炎效果。ＣＶＢ感染流行期间临床应用较低剂量的ＩＶＩＧ保护高危易感儿童是一个值得进一步探讨的课题，２００～５００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１可以作为今后临床试用的参考剂量。３．２ＩＶＩＧ对病毒血症后继发的心肌
More abstracts about the 静脉丙种球蛋白对病毒性心肌炎作用的研究