丙氨瑞林（ＬＨＲＨＡ）系促性腺素释放激素激动剂（ＬＨＲＨａｇｏｎｉｓｔ，ＬＨＲＨＡ ｇ），是我国合成的Ｉ类新药，临床上主要用于治疗子宫内膜异位症及其他激素依赖性疾病，一般 采用注射剂，每日１次，周期３～６个月，病人不易坚持，而且还会产生每次注射后体内促性腺素 和性激素水平急剧波动［１］；鼻内给药虽然方便但生物利用度低，仅为注射给药的３％～６％［ ２］。因此，寻找一种长效制剂是非常必要的。国外有人［３］将ＬＨＲＨ的另一类似物亮丙瑞林 制成缓释微球注射剂取得了很好的效果。本研究用聚乳酸／羟乙酸（ＰＬＧＡ）作为载体制备成长 效生物可降解性注射微球，用子宫内膜异位症的大鼠动物模型，观察丙氨瑞林缓释微球注射剂（Ｌ ＨＲＨＡｍｓ）对大鼠子宫异位内膜的抑制作用，为ＬＨＲＨＡｍｓ的临床应用提供实验资料 。方法与结果药物丙氨瑞林缓释微球注射剂（批号９７０４１９，含量８１６％，＜１２５μ ｍ）：上海医药工业研究院制剂室提供。１药物对大鼠异位内膜的抑制作用参照Ｊｏｎｅｓ［４］ 方法，取体重２００～２５０ｇＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＳＤ）♀大鼠，用外科自体移植 术建立子宫内收稿日期：１９９８１０２６Ｔｅｌ：（０２１）６４０４１９００２６９ ０，Ｆａｘ：（０２１）６４０３７２２２，Ｅｍａｉｌ：ｒｑｚｈａｏ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ 赵瑞钦女，３５岁，博士研究生周美华女，５６岁，教授，博士生导师膜异位症的大鼠动物模型， ４周后，打开腹腔，腹壁种植处异位内膜生长且有黄色液体内容物者为模型建立成功，测量异位内 膜体积（Ｖ１），然后将动物随机分为４组：（１）对照组，仅给以赋形剂；（２）ＬＨＲＨＡ 冻干粉剂（ＬＨＲＨＡｌｐ）组，生理盐水溶解，每天给药，剂量为１００μｇ·ｋｇ－１；（ ３）ＬＨＲＨＡｍｓ组；（４）去势组，切除双侧卵巢。其中ＬＨＲＨＡｍｓ组设１，２，３ 个剂量组，分别为６７５，２７及５４ｍｇ·ｋｇ－１，相当于丙氨瑞林冻干粉剂２０，１００ 及２００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１。所有药物采用ｓｃ。４周后，处死动物，再次测量异位内膜体 积（Ｖ２），并计算药物对异位内膜抑制率（抑制率＝１－Ｖ２／Ｖ１）×１００％，各实验组对 异位内膜的抑制率用ｘ±ｓ表示，采用ＭａｎｎＷｈｉｔｎｅｙ检验。结果可见对照组异位内膜 呈增长趋势，ＬＨＲＨＡｍｓ组大鼠异位内膜受到明显抑制，其作用在一定剂量范围内随剂量的 增大而增强。２０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１（１组）有一定效果，但与对照组相比无明显统计学意 义（Ｐ＞００５），当剂量增至１００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１（２组）时，显示有明显的抑制 作用，可达去势水平（与去势组比较Ｐ＞００５），继续增大剂量至２００μｇ·ｋｇ－１·ｄ －１（３组）时，其抑制作用未见相应增大，其中２，３组与ＬＨＲＨＡｌｐ组的抑制率相比无 明显统计学差异（表１）。２ＬＨＲＨＡｍｓ对血清雌二醇（Ｅ２）的影响观察ＬＨＲＨＡｍ ｓ对正常♀大鼠及动物模型各组血清Ｅ２的影响。参考文献［５］及本实验室研究［６］，对正常 雌鼠（ｎ＝５）设定一个剂量组（１００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），分别于给药后０，２，４， ８ｈ，１，２，３ｄ，１，２，３，４，６，８周采血，动物模型各组于处死前４ｄ每天上午８～ ９时采血，分离血清，－２０℃保存待测。同时另外取２０只间情期正常雌鼠采血作为血清Ｅ２水 平的对照。Ｅ２的测定方法采用Ｓｅｒｏｎｏ公司的Ｅ２酶免疫测定盒按说明书进行标准操作。各 组Ｅ２值用ｘ±ｓ表示，采用ｔ检验及ＮｅｗｍａｎＫｅｕｌｓｊ检验。结果由表２显示，正常 大鼠血清Ｅ２水平于用药后１～３ｄ开始下降，１周左右可降至间情期水平，２周后达最大抑制持 续约２周左右，至６～８周抑制作用渐消失（图１）。动物模型各组显示对照组大鼠血清Ｅ２水平 仍有正常动情周期的波动，ＬＨＲＨＡｍｓ１组血清Ｅ２水平也有正常波动，而２，３组及ＬＨ ＲＨＡｌｐ组血清Ｅ２水平低于对照（Ｐ＜００５）则相当于间情期（间情期血清Ｅ２水平为 ２７４７±７５２ｐｇ·ｍＬ－１，表中未显示）。Ｆｉｇ１Ｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｓｅｒ ｕｍＥ２ｌｅｖｅｌｉｎｎｏｒｍａｌｆｅｍａｌｅｒａｔｓ，ｔｈｅｂｌｏｏｄｗａｓｃｏｌｅ ｃｔｅｄａｔ０，２，４ａｎｄ８ｈ，１，２ａｎｄ３ｄａｙｓ，ａｎｄ１，２，３，４，６ａｎ ｄ８ｗｅｋｓａｆｔｅｒａｌａｒｅｌｉｎｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓｇｉｖｅｎ（ｄｏｓｅ＝１ ００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｓｃ，ｎ＝５，ｘ±ｓ）．Ｔａｂ１ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆＬＨＲ ＨＡｍｓｏｎｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｅｘｐｌａｎｔｉｎｒａｔｓＧ ｒｏｕｐＤｏｓｅ／μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１Ｖ１Ｖ２Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｒａｔｅｏｆｅｎｄ ｏｍｅｔｒｉａｌｅｘｐｌａｎｔ／％Ｃｏｎｔｒｏｌ８７．８２±４０．９５１１８．０３±５ ０．７１－３８．０４±２３．１０ＬＨＲＨＡｌｐ１００９０．４０±４１．３４９．８９± ７．７１８３．２４±１５．４０ＬＨＲＨＡｍｓ１２０８９．２７±５１．７１１２８．０ ０±４０．２０－３２．７５±２８．２１ＬＨＲＨＡｍｓ２１００１１０．１６±３５．５０ ９．００±１０．１０８７．５２±９．８５ＬＨＲＨＡｍｓ３２００１１９．８４±８．７ ０１０．８０±９．１８８４．７１±１７．７０Ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ１１０．７４±５．１ ８８．００±３．１０８９．２１±１２．７０ｘ±ｓ，ｎ＝５．Ｐ＜００１ｖｓｃｏｎｔｒ ｏｌ；Ｐ＜００１ｖｓｃａｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｖ１：ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｂｅｆｏｒｅｄｒｕ ｇｓｇｉｖｅｎ；Ｖ２：ｔｈｅｖｏｌｕｍｅａｆｔｅｒｄｒｕｇｓｇｉｖｅｎ，ｔｈｅｉｎｈｉ ｂｉｔｏｒｙｒａｔｅ＝（１－Ｖ２／Ｖ１）×１００％；ＬＨＲＨ：Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈ ｏｒｍｏｎｅｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ；Ａｍｓ：Ａｌａｒｅｌｉｎｍｉｃｒｏｓｐ ｈｅｒｅｓ（ｓｃ）；Ａｌｐ：Ａｌａｒｅｌｉｎｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄｐｏｗｅｒ（ｓｃ）． Ｔａｂ２ＴｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｓｅｒｕｍＥ２ｌｅｖｅｌｓａｆｔｅｒｄｒｕｇｓｇｉｖｅｎ ｉｎｒａｔｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｓＧｒｏｕｐＤｏｓｅ／μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１ＳｅｒｕｍＥ ２ｌｅｖｅｌｓａｔｄｉｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓ１７ｄ１８ｄ１９ｄ２０ｄＣｏｎｔｒｏｌ２７ ．２２±４．３２３１．４１±８．０１４６．３２±８．９８２５．４１±７．９８ＬＨＲＨ Ａｌｐ１００２６．５６±７．８０２５．７９±４．２４２６．７９±８．７８２６．３０± ６．８７ＬＨＲＨＡｍｓ１２０２４．７２±５．６３２９．８７±６．３４３９．３８±１０ ．４１２９．７９±８．２４ＬＨＲＨＡｍｓ２１００２６．１２±７．４７２７．２８±４． ７８２６．７４±６．２５２７．９８±８．５２ＬＨＲＨＡｍｓ３２００２８．４７±８． ２１２４．７３±７．８２２７．２２±６．８９２５．７３±６．９２ｘ±ｓ，ｎ＝５．Ｐ ＜００５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ，ＬＨＲＨ：ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｒｅｌｅ ａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ；Ａｍｓ：Ａｌａｒｅｌｉｎｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ（ｓｃ）；Ａ ｌｐ：Ａｌａｒｅｌｉｎｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄｐｏｗｅｒ（ｓｃ）．３ＬＨＲＨＡｍｓ对大 鼠动情周期的影响对所有的实验动物，每天定时（８～９时ＡＭ）观察阴道细胞涂片，以细胞形态 区别动情周期，每个动情周期为动情期、动情后期、间情期、动情前期，其细胞相为角化细胞、白 细胞、白细胞、圆细胞。大鼠子宫内膜异位症动物模型对照组动情周期正常，２，３组及去势组于 给药后１～３ｄ动情周期停滞于动情间期直至处死，小剂量给药组后２周有３只动情周期紊乱，表 现为不典型周期，以后恢复正常，正常雌鼠用药组于用药后１～３ｄ停滞于动情间期，持续６～７ 周，７～８周开始恢复。讨论Ｊｏｎｅｓ［４］及Ｖｅｒｎｏｎ［７］都采用自体移植术建立了子 宫内膜异位症的动物模型，前者异位内膜组织学检查表明，移植至腹壁腹膜的片状子宫内膜具有完 整的内膜组织结构包括间质、腺体和上皮，存活生长良好，且对内源性甾体激素也反映良好，能很 好地用于子宫内膜异位症的药物作用研究，后者主要用于研究子宫内膜异位症的病理生理特征。本 研究采用Ｊｏｎｅｓ的动物模型，定量地观察ＬＨＲＨＡｍｓ对子宫内膜异位症的治疗作用，不 仅直观方便而且结果可靠。临床治疗子宫内膜异位症，药物治疗无效时，常采用卵巢切除术以达到 根治目的。本研究用去势组作为对照，可以对ＬＨＲＨＡｍｓ的药效作客观评价。结果显示，与 对照组比较，１组对药物内膜有一定的抑制作用，但无统计学意义。当剂量增加到１００μｇ·ｋ ｇ－１·ｄ－１时，出现对异位内膜的明显抑制，可达到“药物去卵巢”作用，表明在一定剂量范 围内存在一定的量效关系。若再增加剂量，治疗作用并未相应增加，可能是药物对下丘脑垂体卵巢 轴达最大抑制作用后，使其对药物反应性下降或消失所致。ＬＨＲＨＡｍｓ２，３组与ＬＨＲＨ Ａｌｐ组相比，其抑制率无明显差异。提示ＬＨＲＨＡｍｓ可以替代需每日给药的ＬＨＲＨ Ａｌｐ。异位子宫内膜的移植，开始时并不需要甾体激素的支持，可一旦移植成功，雌激素对支持 是必需的［８］。因此，我们在观察ＬＨＲＨＡｍｓ对异位内膜抑制作用的同时，也观察了药物 对正常雌鼠及动物模型各组血清Ｅ２的影响。结果显示，ＬＨＲＨＡｍｓ可使正常雌鼠血清Ｅ２ 水平明显降低，于给药后１周可达间情期水平，持续６周后，Ｅ２水平开始恢复，这与国外报道［５］一致。动物模型中，ＬＨＲＨＡｍｓ２，３组与ＬＨＲＨＡｌｐ组血清Ｅ２水平也明显降低至间情期水平，与ＬＨＲＨＡｍｓ对正常雌鼠血清Ｅ２水平的抑制作用一致。这种低雌激素水平，Ｋｏｏｓ［９］认为系ＬＨＲＨＡｇ直接作用于卵巢所致，而Ｂｉｄｅｒ［１０］认为是药
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