细胞凋亡在组织稳态中发挥重要作用，在血管系统生长发育和病理条件下可出现［１，２］。血管活 性物质如一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）和血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉ ｏｎⅡ，ＡｎｇⅡ）对血管平滑肌细胞的凋亡有调节作用。有人推测，在肺动脉高压的形成过程中 ，这些调节血管紧张度、细胞增殖和细胞死亡的血管活性物质之间量的失衡可造成稳态平衡被破坏 ［３］。为探讨细胞凋亡和缺氧性肺动脉高压之间可能存在的关系，以及一些扩血管药物对细胞凋 亡的影响，我们就西拉普利和牛磺酸对慢性缺氧肺组织细胞凋亡的影响进行了初步研究。材料与方 法１动物选择与分组：Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，体重２００ｇ左右，随机等分为５组，每组６只 ：Ａ组为正常对照组；Ｂ组为常压间隙缺氧并饮牛磺酸；Ｃ组为缺氧并胃饲西拉普利；Ｄ组为缺氧 后自然恢复；Ｅ组为缺氧模型，复制后未做任何处理立即处死。２动物处理：参照薛全福等［４ ］方法，将Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ组置于氧浓度为（１０±０５）％的常压缺氧仓内，每天持续缺氧８ ｈ，共４１ｄ。Ｅ组大鼠于第４１ｄ缺氧模型建成后立即处死，而Ｂ组大鼠每天饮含２％牛磺酸的 自来水，Ｃ组则每天胃饲西拉普利１２５ｍｇ／只，Ｄ组只饮自来水。此３组置于同样的饲养环 境中，继续喂养４周后处死，开胸取肺组织做冰冻切片。３原位末端标记检测［５］：冰冻切片 用双蒸水洗３次，每次３ｍｉｎ。加标记反应液，５０μＬ反应液中含末端转移酶（ＴｄＴ，Ｐｒ ｏｍｅｇａ公司）１０μＬ×ＴｄＴＢｕｆｅｒ，ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ（宝灵曼公司）０５ ｎｍｏｌｓ，３７℃１ｈ，然后于４℃过夜。次日用双蒸水洗３次，加羊血清封闭，３７℃３０ｍ ｉｎ。加入碱性磷酸酶连接的抗地高辛抗体（ａｎｔｉ－ｄｉｇ－Ａｐ，宝灵曼公司）０．６７Ｕ ／１００μＬ３７℃４０ｍｉｎ，双蒸水洗３次后用ＮＢＴ／ＢＣＩＰ显色，以细胞核染成紫色为 阳性判断标准。以不加ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ、不加ａｎｔｉ－ｄｉｇ－Ａｐ为阴性对照。每组 切片随机观察２０个高倍视野的凋亡细胞数，取其平均值。４统计处理：用ＳＡＳ统计学软件进 行单因素５水平方差分析。所有数据以均数±标准差表示。结果１各组大鼠光镜下肺组织改变： Ｅ组大鼠光镜下主要改变为肺小动脉中膜肥厚、结缔组织增多，血管腔严重狭窄或闭塞，有的血管 腔还可见均质无细胞结构的物质栓塞。细支气管扩张、管壁水肿、炎细胞浸润、局限性肺气肿、肺 不张、肺间质增宽、炎症。Ｃ组和Ｂ组炎性细胞明显少于Ｅ组，肺泡扩张较轻，肺小动脉管壁较薄 ，管腔狭窄不及Ｅ组明显，管腔中未见均质无细胞结构物质栓塞，其中尤以Ｃ组更明显。Ｄ组上述 改变虽较Ｅ组轻，但仍比Ｃ组和Ｂ组严重，管腔中仍可见均质无细胞结构的物质栓塞。２各组大 鼠肺组织细胞凋亡变化：如图１所示，Ｅ组和Ｃ组凋亡细胞数明显高于其他各组（Ｐ＜０．０１） ，以Ｅ组值为最高，与Ｃ组相比亦有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。图２～４分别为原位末端标记 法对正常、Ｅ组及Ｃ组肺组织的检测照片，可见凋亡细胞核质固缩呈圆形或马蹄形、环形、附着于 核内膜处，核周有环形透亮区。正常肺组织凋亡细胞少见。讨论生物体内各种组织细胞的数量经常 保持在一种相对平衡的状态。这种稳态的维持有赖于各类细胞有规律地分裂、分化和死亡。细胞凋 亡是细胞的一种基本生命现象，是一个清除器官或组织中多余细胞（包括损伤细胞和癌变前细胞） 的过程。普遍认为，缺氧可造成细胞死亡，其死亡的表现形式为坏死。但近年来对细胞一些生化特 征变化的观察发现，缺氧可能诱导细胞凋亡，凋亡和死亡路径可同时被低氧条件激活［６］。肺血 管结构改建在肺动脉高压中的作用已愈来愈受到重视，甚至有人认为肺动脉高压不是功能性疾病， 而是结构性疾病。在慢性缺氧引起的血管损伤、愈合和适应过程中，肺动肺壁的所有细胞均发生增 殖。而血管平滑肌细胞凋亡被认为有助于组织稳态和内膜损伤的减轻［７］。缩血管物质ＡｎｇⅡ 可抑制细胞凋亡，而扩血管物质ＮＯ则可诱导细胞凋亡［３］。我们的研究发现，Ｅ组及Ｃ组肺组 织细胞凋亡数明显高于正常对照、自然恢复及牛磺酸组，提示缺氧可诱发细胞凋亡，血管紧张素转 换酶抑制剂西拉普利可能有诱发细胞凋亡的作用。光镜下见西拉普利治疗组肺组织损害最轻，可能 与此有关。而同样具有扩血管效应的牛磺酸却未见诱发细胞Ｆｉｇ１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃ ｅｌｎｕｍｂｅｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓａｍｏｎｇａｌｇｒｏｕｐｓ（ｘ±ｓ，ｎ＝６）０． ０１，ｖｓＡ，Ｂ，Ｄｇｒｏｕｐｓ）；Ｐ＜０．０１，ｖｓｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐｓ图１各 组凋亡细胞数的比较Ｆｉｇ２Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｏｒｍａｌｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｗｉ ｔｈｉｎｓｉｔｕｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ（×１５０）图２原位末端标记法对正常肺组织的检 测Ｆｉｇ３Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈｙｐｏｘｉｃｌｕｎｇｔｉｓｕｅｓｗｉｔｈｉｎｓｉｔｕ ｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ，ａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃ ａｎｔｌｙ（×１５０）图３原位末端标记法对缺氧肺组织的检测Ｆｉｇ４Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏ ｆｌｕｎｇｔｉｓｕｅｓｏｆＣｉｌａｚａｐｒｉｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈｉｎｓｉｔｕｅｎｄ－ｌ ａｂｅｌｉｎｇ，ａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌ ｙ（×１５０）图４原位末端标记法对西拉普利治疗组肺组织的检测凋亡，此氨基酸具有细胞保护 、调节钙稳态、直接稳定细胞膜结构的作用，究竟是哪一种作用抑制细胞凋亡尚不清楚，值得进一 步探讨。亦有可能它与细胞凋亡的发生与否毫不关连，因自然恢复组凋亡细胞数亦少。实验结果还 提示在缺氧后期肺动脉高压形成后，低氧已不能诱发凋亡，细胞以增殖为主。Ｊｏｎｅｓ等在用野 百合碱诱发的进行性肺动脉高压的研究中发现，细胞凋亡也只在病程的早期发生［７］。综上所述 ，细胞凋亡可能与缺氧性肺动脉高压的形成和发展有关，寻找有效的诱导细胞凋亡的药物可能会有 助于预防及治疗。但由于目前这方面的报道不多，其与肺动脉高压的确切关系及作用机理尚不清楚 ，还有待于进一步研究。西拉普利和牛磺酸对慢性缺氧肺组织细胞凋亡的影响$广州军区广州总医 院呼吸内科@黄文杰@邹霞英@姜辉牛磺酸；细胞低氧；肺目的：初步观察西拉普利和牛磺酸对慢 性缺氧肺组织细胞凋亡的影响。方法：采用原位末端标记法。结果：缺氧模型及西拉普利组细胞凋 亡明显高于其他各组（Ｐ＜０．０１），而牛磺酸组、自然恢复组则与正常对照无差异。结论：西 拉普利可能诱发细胞凋亡的作用，细胞凋亡的发生与否可能与肺动脉高压的形成与发展有关。１Ｃ ｈｏＡ，ＣｏｕｒｔｍａｎＤＷ，ＬａｎｇｉｌｅＢＬ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ（ｐｒｏｇｒａｍｍ ｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ）ｉｎａｒｔｅｒｉｅｓｏｆｔｈｅｎｅｏｎａｔａｌｌａｍｂ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ，１９９５，７６：１６８．２ＨａｎＤＭＫ，ＨａｕｄｅｎｓｃｈｉｌｄＣＣ，Ｈｏｎｇ ＭＫ，ｅｔａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎａｔｈｅｒｏｇ ｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｎａｒａｔｖａｓｃｕｌａｒｉｎｊｕｒｅｍｏｄｅｌ．ＡｍＪＰａｔｈｏ ｌ，１９９５，１４７：２６７．３ＰｏｌｍａｎＭＪ，ＹａｍａｄａＴ，ＨｏｒｉｕｃｈｉＭ， ｅｔａｌ．Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｖａｓｃｕｌａｒｓ ｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ｃｏｕｎｔｅｒｖａｉｌｉｎｇｉｎｆｌｕ ｅｎｃｅｓｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅａｎｄａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎⅡ．ＣｉｒｃＲｅｓ， １９９６，７９：７４８．４薜全福，谢剑鸣，胡长贵，等常压缺氧大鼠肺动脉高压模型的建立 中华结核和呼吸杂志，１９８９，１２：３５０５ＧｏｒｃｚｙｃａＷ，ＧｏｎｇＪ，Ｄａｒ ｚｙｎｋｉｅｗｉｅｚＺ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓｉｎｉｎｄ ｉｖｉｄｕａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｅｌｓｂｙｔｈｅｉｎｓｉｔｕｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘ ｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙ１ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｎｄｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａ ｓａｙｓ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９３，５３：１９４５．６ＳｈｉｍｉｚｕＳ，Ｅｇｕｃｈ ｉＹ，ＫａｍｉｋｅＷ，ｅｔａｌ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓａｓｗｅｌａｓ ｎｅｃｒｏｓｓｉｓｂｙｈｙｐｏｘｉａａｎｄｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏ ｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙＢｃｌ－２ａｎｄＢｃｌ－Ｘｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９６， ５６：２１６１．７ＪｏｎｅｓＰＬ，ＲａｂｉｎｏｖｉｔｃｈＭ．Ｔｅｎａｓｃｉｎ－Ｃｉｓｉ ｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅ ａｓｅｉｎｒａｔｓａｎｄｉｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．ＣｉｒｃＲｅｓ，１９９６，７ ９：１１３１．ｃｃｅｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（×１５０）图３原 位末端标记法对缺氧肺组织的检测Ｆｉｇ４ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｌｕｎｇｔｉｓｕｅｓｏｆＣ ｉｌａｚａｐｒｉｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈｉｎｓｉｔｕｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ，ａｐｏｐｔ ｏｔｉｃｃｅｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（×１５０）图４原位末端标 记法对西拉普利治疗组肺组织的检测凋亡，此氨基酸具有细胞保护、调节钙稳态、直接稳定细胞膜 结构的作用，究竟是哪一种作用抑制细胞凋亡尚不清楚，值得进一步探讨。亦有可能它与细胞凋亡的发生与否毫不关连，因自然恢复组凋亡细胞数亦少。实验结果还提示在缺氧后期肺动脉高压形成后，低氧已不能诱发凋亡，细胞以增殖为主。Ｊｏｎｅｓ等在用野百合碱诱发的进行性肺动脉高压的研究中发现，细胞凋亡也只在病程的早期发生［７］。综上所述，细胞凋亡可能与缺氧性肺动脉
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