我国地跨寒、温、热三带，气候条件多种多样，中药材在制备、储藏、运输的过程中，很容易发生霉 变，污染黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等所产生的。黄曲霉在自然界广泛存在，易 污染许多食物、饲料和中药材，在适宜的条件下可产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素有好几种，其中以 黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）的毒性最大，是一种毒性很强的肝毒素（小白鼠ＬＤ５０为９．２ｍ ｇ／ｋｇ，可引起人类急性致死性中毒症并对许多实验动物（包括灵长类）具有致癌性，因此黄曲 霉毒系不仅是有毒物质，也是致癌物质。对人畜的健康有极大的危害［１，２］。为保证人民用药 安全，应加强黄曲霉毒素的检测。１实验材料酶标仪（ＤｅｎｌｅｙＤｒａｇｏｎＷｅｌｌｓｃ ａｎＭＫ２型），微量加样器（ＮＩＣＨＩＲＹＯ）。样品共１４个中成药品种，１８批，见２． ２项。试剂：ＡＦＢ１标准品系列（北京赛蒂克生物技术有限公司），浓度为５０，２０，１０， １，０．１，０ｎｇ／ｍｌ，ＡＦＢ１Ⅰ抗体，酶标二抗，显色液，终止液，已包被固相抗原的 酶标板（４８孔／块）标记Ａ１Ａ１２处为空白对照孔未包被抗原，ＰＢＳＴ缓冲液，洗涤液 （１％吐温２０液）。２方法与结果２．１方法２．１．１样品提取液的制备将上述样品各称取 １０ｇ与含７０％甲醇ＰＢＳＴ缓冲液３０ｍｌ混合，充分振摇均匀后，过滤，置４℃过夜，取 上清液０．１ｍｌ加入０．９ｍｌ的ＰＢＳＴ缓冲液中，混匀。２．１．２抗原与抗体的结合将 酶标板洗涤３次后，用滤纸吸干，每孔加入样品提取液及阴性对照，空白对照加入７％甲醇ＰＢＳ Ｔ液，阳性对照加入ＡＦＢ１标准品，其浓度为５０，２０，５ｎｇ／ｍｌ（２５μｌ／孔）。 随即加入ＡＦＢ１Ⅰ抗体（２５μｌ／孔），混匀后置３７℃，避光温育１．５ｈ。２．１．３ 第二抗体结合将温育后的酶标板取出洗涤３次后，加入酶标二抗（５０μｌ／孔），置３７℃温育 １ｈ。２．１．４显色将温育后的酶标板取出洗涤３次，加入显色液（５０μｌ／孔），３７℃温 育５ｍｉｎ后取出加入终止液（５０μｌ／孔）。２．１．５测定终止反应后，立即用酶标仪测定 各孔的ＯＤ值。２．１．６绘制标准曲线以ＡＦＢ１标准溶液浓度（ｎｇ／ｍｌ）为横坐标，对应 的ＯＤ值为纵坐标，在半对数坐标纸上作标准曲线。２．２结果根据ＯＤ值在标准曲线上查出相应 的ＡＦＢ１含量，并进一步依样品的稀释倍数计算出样品中的ＡＦＢ１含量（μｇ／ｋｇ），结果 见表１。３讨论３．１在检测的１８批中成药样品中有１５批不同程度污染有ＡＦＢ１，占样品总 数的８３％。虽然检测样品的种类、批次不多，但也能反映出中药易污染黄曲霉毒素的问题。３． ２在检测ＡＦＢ１试验中，其结果会受试剂、温度和仪器的灵敏度等条件的影响。因此，①试剂从 ４℃取出后，应在室温放置３０～６０ｍｉｎ后，方可进行试验。用完后立即置４℃保存，以表１ １５批中成药中ＡＦＢ１的含量样品批号含量μｇ／ｋｇ古汉养生精片９６０１２８０．２４９７ ０３０１０．１２一清胶囊９６１２５３０．８０桂龙咳喘宁胶囊９６１１２３０．１５９７０４ １７０．１８常春茶９７０６０１０．１２西瓜霜润喉片９７０３１０３０．１１蝮龙抗栓丸９７ ０５０８０．１２天使护心丹９７０６０８０．１６９７０６０１０．１４双黄连片９７０２１８ ０．１９肝复乐片９６１１１２０．１８健脾降糖精胶囊１号无批号０．１２镇咳宁胶囊９７０１ ０５０．１２三金片９７０６０８０．１２注：松龄血脂康９６１１３１，五加参片９７０２１８ ，蝮龙抗栓丸９７０２０８均未检出黄曲霉毒素保持其原有活性。②由于不同厂家的试剂盒及酶标 仪产品灵敏度不同，因而检测ＡＦＢ１的结果，其误差为１～９倍。③必须保持酶标板底部的洁净 ，以免影响透光率。④样品提取液的制备中，甲醇含量过高会使蛋白质发生变性，有可能影响ＡＦ Ｂ１的检出率。３．３在检测ＡＦＢ１试验中，用过两种试剂盒，其结果的计算方法不同，导致最 终的ＡＦＢ１含量存在差异。３．４我国尚未规定药品中污染黄曲霉毒素的含量标准，现在只能参 照我国食品卫生标准考察。１８批中成药污染ＡＦＢ１的量均小于１μｇ／ｋｇ，是安全的。但为 了加强中药品种的质量管理，保证人民用药安全，有必要推广检测中药中污染黄曲霉毒素的间接竞 争酶联免疫吸附分析法，组织考察，为尽早制订中药ＡＦＢ１质控标准提供科学依据。18批中成 药黄曲霉毒素的检测@刘鹏@杜平华@苏德模$中国药品生物制品检定所$青岛市药品检验所间接 竞争酶联免疫吸附法,中成药,黄曲霉毒素目的：考察中成药中污染ＡＦＢ１的情况，为制订标准 和科学管理提供依据。方法：应用间接竞争酶联免疫吸附分析法。结果：１８批中成药中有不同程 度的ＡＦＢ１污染，污染率８３％，ＡＦＢ１的含量均小于１μｇ／ｋｇ。结论：应用本法检测中 成药中污染ＡＦＢ１的方法准确、快捷。１郁庆福．现代卫生微生物学．北京：人民卫生出版社，１９９５．２３１２路戈．抗黄曲霉毒素Ｂ１单克隆抗体的制备及特性．生物工程学报．１９９５，１１（４）：３３闹票讣疤匦裕锕こ萄Пǎ保梗梗担保保ǎ矗海常
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