自然流产在妇产科临床颇为常见，并有反复发作的倾向。中医理论认为，肾为先天之本，脾为后天之 本，肾虚和脾虚是胎元不固的主要病机。“助孕３号丸”是在全国著名妇科专家罗元恺教授指导下 ，妇科的防治流产课题组拟定的。此方补肾与健脾并重，目前在临床上主要用于防治反复自然流产 。黄体功能不全是导致自然流产的常见因素，其证候表现主要是“肾虚或脾肾两虚”。本实验以抗 孕激素制剂ＲＵ４８６建立黄体功能不全的流产模型，观察助孕３号丸对妊娠期激素水平和子宫蜕 膜孕激素受体的影响，以及对胚胎的保护作用。１ 材料与方法１－１ 分组及建立ＲＵ４８６流 产模型 选用健康、未产、８周龄、体重２００～２５０ｇ的ＳＤ雄性大鼠，按２∶１雌雄合笼 ，置于１８～２４℃动物房中喂养。人工控制光照、饮食，每日晨阴道涂片，以发现大量精子者作 为妊娠第１ｄ（ｄ１）。盲法随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组，每组均为１０只雌鼠。在妊娠第１ｄ 至１１ｄ（ｄ１～ｄ１１），Ａ组灌服助孕３号水提浓缩液，Ｂ组隔天肌注黄体酮（每ｋｇ体重４ ｍｇ），Ｃ、Ｄ组灌服等量生理盐水。在妊娠第１０ｄ（ｄ１０），Ａ、Ｂ、Ｃ组均灌服ＲＵ４８ ６（每ｋｇ体重５ｍｇ）［１，２］，Ｄ组灌服等量生理盐水。至妊娠１２ｄ（ｄ１２），各组动 物均处死解剖，剪取子宫，称重，记录胚胎数和流产率。１－２ 激素测定在用ＲＵ４８６前后， 即ｄ１０（Ｐ１）、ｄ１１（Ｐ２）和ｄ１２（Ｐ３）分别采血，分离血清，－２０℃保存，酶联 免疫法检测血清孕酮水平（采用珠海爱康生物医学工程有限公司ＰｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅＳｅｒ ｏｚｙｍｅ试剂盒）。１－３ 子宫蜕膜孕激素受体检测子宫标本置液氮罐保存，冰冻切片，Ｓ－ Ｐ免疫组化染色（采用美国Ｓｕｋｅ公司ＭｏｕｓｅＡｎｔｉ－ＨｕｍａｎＰｒｏｇｅｓｔｅｒｏ ｎｅＲｅｃｅｐｔｏｒ（ＰｇＲ）试剂盒），光镜检测孕激素受体（ＰＲ）阳性数，计算ＰＲ阳性 率。２ 结果 试验结果见表１、表２。表１ 各组流产率及使用ＲＵ４８６前后孕酮变化组 别动物数流产率／％孕酮（Ｐ）珋ｘ±ｓ，ｎｍｏｌ／ＬＰ１Ｐ２Ｐ３Ａ组（中药＋ＲＵ４８６ ）８ ６６．９７２） ４８．８８±２１．６３９ ４８．８１±１９．８０９１） ５ ９．２８±２６．９５６１）Ｂ组（黄体酮＋ＲＵ４８６）８７１．３３２）５０．９５±２７． １７３４２．２１±２３．６９７１）４７．０６±２６．３２２１）Ｃ组（ＲＵ４８６对照组） ８８６．３６５５．０９±１８．６９９２５．４０±１６．０９３１０．３７±１１．３５７Ｄ 组（正常妊娠组）８０４２．４５±２２．８８９５９．５４±１７．２８２７６．７８５±１４ ．２３２ １）用ｔ检验统计：与Ｃ组比较Ｐ＜０－０５；２）用卡方四围表格统计：与Ｃ组比较 Ｐ＞０－０５表２ 助孕３号对妊娠大鼠子宫蜕膜孕激素受体（ＰＲ）的影响组 别动物数ＰＲ 阳性数ＰＲ阳性率％Ａ组：中药＋ＲＵ４８６８８ １００１）Ｂ组：黄体酮＋ＲＵ４８６８ ５６２．５１）Ｃ组：ＲＵ４８６对照组８３３７．５Ｄ组：正常妊娠组８８１００ １）用卡 方四围表格统计：与Ｃ组比较Ｐ＜０－０１ 从表１、２结果可以看出，各组流产率差异无显著 性；孕激素水平在使用ＲＵ４８６前后各组有显著性差异。用药２４ｈ后（Ｐ２），Ａ、Ｂ组下降 幅度明显比Ｃ组下降幅度小；用药４８ｈ后（Ｐ３），Ａ、Ｂ组激素水平呈回升态势，Ｃ组呈下降 态势（Ｐ＜０－０５）。说明助孕３号能提高孕体的结合率降低，增加了靶细胞ＰＲ含量。Ａ组的 受体水平与正常组相同，阳性率达１００％，与ＲＵ４８６对照组比较，差异有显著性（Ｐ＜０－ ０１）。提示该药可能在受体水平促进黄体功能，从而起到保胎作用。３ 讨论 ＳＡ原因复杂 ，遗传、内分泌、免疫、生殖道感染或子宫形态异常等因素均可致之。而黄体功能不全是临床上较 为常见的因素，各种原因引起黄体功能衰退，影响蜕膜、胎盘功能，使妊娠难以继续而致流产［３ ］。 中医学对ＳＡ的认知与治疗由来已久，妊娠３个月内，胚胎自然殒堕者，称为“堕胎”。 堕胎连续发生３次以上者，称为“滑胎”、“数堕胎”。历代医学对其论述颇多，认为主要是肾气 不足以至冲任不固，或脾气虚弱不能营养胎元，使胎元不固而堕胎。屡孕屡堕则肾气更伤。治疗大 法以补肾健脾为主。清代医家张锡纯的“寿胎丸”是补肾安胎的代表方。临床研究表明，寿胎丸加 味有较好的保胎效果，实验研究提示可增强垂体－卵巢促黄体功能［４］。当代名医罗元恺教授根 据其临床经验创制了补肾为主，佐以健脾的“滋肾育胎丸”，对防治自然流产有良好疗效，实验研 究表明，该方能促进非妊娠雌兔的卵巢与子宫内膜分泌功能［５］。其后，进一步研究拟定了补肾 与健脾并重的“助孕３号丸”，进行一了些临床与实验研究［６］。前一阶段的研究提示该药对免 疫保护不足的反复自然流产有显著疗效，治疗后再次妊娠成功率达９５％，并有提高封闭效应的作 用。笔者认为补肾健脾中药复方除了免疫调节作用外，还应有内分泌调节效应。因而设计了本实验 。 “助孕３号丸”以寿胎丸和滋肾育胎丸为基础，由菟丝子、桑寄生、川断、黄芪、党参等８ 味中药组成。菟丝子性味辛甘平，入肝肾经，平补肾之阴阳，固精益气以培本；桑寄生苦平补肝肾 养血安胎；续断苦辛补肝益肾安胎；黄芪味甘补中益气健脾；党参具有强壮补益的作用，能健脾补 气，对阴道流血，下腹坠有补气摄血之效。诸药合用具有补肾健脾，固气养血，止血安胎之效，又 有补肾培脾，先后天同治，以达到填精补脾益血助孕之功，本方药性平和，补而不腻不燥。 目 前，ＲＵ４８６已被证实是一种孕酮受体阻断剂。在大鼠实验中，ＲＵ４８６对下丘脑、垂体、卵 巢和子宫内膜（蜕膜）的孕激素受体有很强的亲和力，在受体水平特异性阻断孕酮作用，引起蜕膜 退变，对妊娠大鼠有良好的抗生育效果［７］。ＲＵ４８６终止妊娠是模仿了自然流产过程［８］ 。因其具有高效拮抗孕酮作用而被应用于抗早孕，这是本实验动物流产模型的造模依据。以往对中 药保胎作用所做的动物模型，主要是以缩宫素或针刺建立流产模型［９］，或采用假孕模型［４］ ，以观察中药对舒缓子宫收缩的作用，未能反映中药对黄体功能不全的调节机理。 在生殖活动 中，雌、孕激素，尤其是孕激素对胚胎的种植、妊娠的维持起着重要的作用。激素作用的强弱取决 于激素水平和靶细胞激素受体的含量、特异性及亲和力［１０］。在正常的妊娠过程中，受精卵的 种植和妊娠的维持有赖于发育完好的子宫内膜、正常孕激素水平以及子宫内膜激素受体的合成。分 泌期孕酮水平及子宫内膜孕激素受体含量，可能为习惯性流产的原因之一［１０］。从本实验结果 来看，补肾健脾的中药复方“助孕３号丸”具有内分泌调节作用。一方面促使孕激素分泌，另一方 面又使子宫蜕膜的孕激素受体含量增加，从而促进黄体功能，发挥保胎效应。这为补肾健脾法防治 自然流产提供了理论依据，为中药保胎的应用开阔了更广泛的前景。“助孕3号丸”对妊娠大鼠孕 激素及受体的影响@李小球$暨南大学医学院第二附属医院,深圳市人民医院中医科!广东深圳5 18020@罗颂平$广州中医药大学第一附属医院中医科!广东广州510407助孕3号丸; ;流产;;孕酮;;受体目的：探讨补肾健脾中药对妊娠大鼠子宫蜕膜孕激素受体的影响。方法： 实验设计了“助孕３号”（菟丝子、续断、桑寄生、党参、黄芪等组成）并通过建立米非司酮（Ｒ Ｕ４８６）流产模型，设立阳性药和空白对照与之对照观察。结果：表明“助孕３号丸”能促使孕激素分泌，并使ＲＵ４８６与孕激素受体的结合率降低。结论：提示该药可能在受体水平促进黄体功能，从而起到保胎作用。为补肾健脾法防治自然流产提供了理论依据。<1> 苏 萍, 蒋长松, 吴熙瑞. 利洛司酮终止早孕作用的实验药效学研究
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