金荞麦对金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶活性的影响
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出版日期： 十一月 15, 1999
金荞麦
为蓼科植物,药用其根。对 肺脓疡、细菌性痢疾、麻疹等有很好的临床疗效<1,2>,但药理试验尚未见其有明显的动物体 内外抑菌作用。以往研究表明,小鼠腹腔注射金荞麦后可对腹腔感染金黄色葡萄球菌的小鼠有保护 作用<3>。为探讨其作用机理,我们采用甲苯胺蓝法观察金荞麦对金黄色葡萄球菌(金葡菌)胞 外耐热核酸酶活性的影响,现报告如下。1 材料和方法1.1 实验材料 金葡菌标准株由中国生物制品检定所提供。0.5%葡萄糖聚蛋白胨水,灭菌,pH7 .8备用。甲苯胺蓝(生物染色剂),德国PDH公司出品,上海医药采购供应站分装(批号66 -02-02),配制成0.1mol/L水溶液备用。按甲苯胶蓝法<4>制成甲苯胺蓝核酸琼 脂玻片,用直径2mm的打孔器在每张玻片上将琼脂层打2只孔,孔距约2.5～3.0cm。1 .2 药物制备 取金荞麦干燥根茎100g,加50%乙醇300ml70±2℃回流1h。倾 出提取液浓缩至无醇味后加蒸馏水适量使成100ml,每1ml相当于原药材1g。将上述金荞 麦水剂用蒸馏水作连续等倍稀释,使每1ml含药量分别相当于原药材的250.00mg、12 5.00mg、62.50mg、31.25mg、15.60mg、7.80mg等备用。1. 3 酶液制备 取0.5%葡萄糖聚蛋白胨水管1支,接种1白金耳金葡菌。种毕置2000ml 干燥器内,采用烛缸法使容量内CO2浓度水平维持在5%～10%<5>。36±1℃培养3天 取出,隔水煮沸15min,离心。取上清液于另一无菌试管内(下称酶液),置2～10℃冰箱 内保存备用。1.4 混合液制备 将已稀释成上述不同浓度的药液按每个稀释度取1ml于灭菌 试管内。再于每支试管内加入1ml酶液。另取酶液1ml,加蒸馏水1ml作为对照用。加毕, 置36±1℃保温箱保温作用12h,取出实验。1.5 酶环测定 取备妥的甲苯胺蓝琼脂玻片 ,用微量吸管于每张玻片的2只小孔内注入10μl不同稀释浓度的药物—酶液混合液。每一稀释 级做5张玻片共10个样本。另取5张玻片,同法于孔内注入不加药物的酶液对照品。36±1℃ 保温12h取出测定粉红色酶环。2 结 果 不同稀释度的药物—酶液与不含药物的对照酶液 所形成的酶环比较,见附表。结果表明,当药物浓度达7.8mg/ml时,已可明显抑制酶环形 成。随药物浓度的增大,所形成的酶环渐趋缩小。至药物浓度达62.5mg/ml时,已无酶环 出现。经方差分析,各级药物稀释度间及与对照酶液间的酶环直径差异均有显著性(P<0.01 )。提示,金荞麦提取物对金葡菌胞外耐热核酸酶活性有明显抑制作用。附表 金荞麦制剂对金葡 菌胞外耐热核酸酶活性的影响组 别药物浓度(mg/ml)酶环直径(mm)对照组金荞麦金荞 麦金荞麦金荞麦金荞麦金荞麦0 7.80 15.60 31.25 62.50 125.00 250.00 16.79±0.66 15.23±0.53** 12.81±0.48**△△ 6.75±0.44**△△##000 **P<0. 01,与对照组比较,△△P<0.01,与7.8mg/ml组比较,##P<0.01,与1 5.6mg/ml组比较(方差分析)3 讨 论金葡菌可产生多种毒素,胞外耐热核酸酶是其 中之一。有多种细菌可产生这种酶,但唯有金葡菌所产生的能耐受高温,虽经100℃15min 或60℃2h而不致被破坏<4,5>。其主要毒理是对DNA、RNA有较强的降解作用<5> 。甲苯胺蓝法测定耐热核酸酶有较高的敏感性,其灵敏度为0.005μg/ml<4>,也是测 定金葡菌有无致病力的重要指标和手段之一<4>。金荞麦具有清热解毒作用。早期报道<3>, 未发现其有明显的抗菌作用,但却能保护腹部受金葡菌感染的小鼠。迄今未见有人对该保护作用作 进一步的研究。我们将甲苯胺蓝法引用于本实验中,以观察金荞麦对耐热核酸酶的影响。结果发现 金荞麦提取物对该酶的活性有明显抑制作用。这也许可从解毒方面为进一步探讨金荞麦的保护作用 提供参考金荞麦对金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶活性的影响@印德贤$江苏省南通市药品检验所 !南通226006@刘明强$江苏省南通市卫生防疫站微生物室金荞麦;;金黄色葡萄球菌;; 感染;;胞外耐热核酸酶;;甲苯胺蓝法的:观察金荞麦对金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶活性的 影响。方法:采用甲苯胺蓝法,检测不同浓度金荞麦药液与该酶混和作用下该酶的酶环直径。结果 :当金荞麦药液浓度为7.8mg/ml时即可明显影响胞外耐热核酸酶的酶环大小;至62.5mg/ml时,已无酶环出现。结论:金荞麦能明显抑制金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶的活性1 彭 勇,孙载明 ,肖培根 ,等 .金荞麦的研究与开发 .中草药 ,1996 ,2 7( 10 )∶ 6 2 9
2 张国风 .金荞麦治疗细菌痢疾 80例临床报告 .南通医学院学报 ,1987,7( 3 )∶ 5 1
3 刘文富 ,宋玉梅 ,王灵芝 ,等 .金荞麦的一些药理作用 .药学学报 ,1981,16 ( 4)∶ 2 47
4 杨履渭 .微生物学及检验技术 .广州 :广东科技出版社 ,1986 .12 7
5 陆德源 .医用微生物学 .第 4版 .北京 :人民卫生出版社 ,1998.7
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