为正确评价某品牌绿藻茶的保健功能，我们按照卫生部１９９６年颁发的《保健食品功能学评价程序 与方法》对其进行了免疫调节和抗疲劳功能试验研究，结果如下。１实验材料１．１该绿藻茶由某 公司提供，为绿褐色粉末，其主要成分是优质绿茶和螺旋藻。试验前按所设剂量以沸水浸泡１小时 ，取浸泡液备用。１．２实验动物为湖南医科大学实验动物学部提供的健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠 和昆明种小鼠，批准号为湖南省医动字第２０－００９号和２０－０１１号，大鼠体重为（１８０ ～２２０）ｇ，小鼠体重为（１８～２２）ｇ。１．３所用仪器与试剂主要有游泳箱（大小约５３ ｃｍ×４０ｃｍ×３５ｃｍ），７２２型分光光度计，绵羊红细胞（ＳＲＢＣ），二氧化碳培养箱 ，１ｇ／Ｌ二乙酰－肟溶液，１０ｍｍｏｌ／Ｌ尿素标准溶液（含尿素氮２．８０ｍｇ／Ｌ），５ ％三氯醋酸（ＴＣＡ），蒽酮试剂，补体（豚鼠血清），Ｈａｎｋｓ液，ＳＡ缓冲液，琼脂糖和印 度墨汁等。２方法与结果２．１按ＧＢ１５１９３－９４《食品安全性毒理学评价程序和方法》， 用该茶浸泡液作急性经口毒性试验，结果为大鼠ＬＤ５０大于２１５００ｍｇ／ｋｇ；小鼠骨髓微 核试验、精子畸形试验及Ａｍｅｓ试验均为阴性，表明该茶可以安全饮用。２．２免疫调节及抗疲 劳功能试验取２４０只雄性小鼠随机分成４组，即低剂量组（１．６７５ｇ／ｋｇ．ｂｗ）、中剂 量组（３．３５ｇ／ｋｇ．ｂｗ）、高剂量组（１０．０５ｇ／ｋｇ．ｂｗ）和对照组，每组６０ 只，前三组每天用浸泡液灌胃一次，每次剂量分别相当于人饮用量的５、１０和３０倍；对照组每 日以蒸馏水灌胃一次，灌胃体积为０．２ｍｌ／１０ｇ．ｂｗ。均连续灌胃３０天后，分别测定以 下六项指标。２．２．１对小鼠迟发型变态反应（ＤＴＨ）的影响。采用足跖增厚法，即取每组小 鼠各１０只，在小鼠腹腔注射２％（Ｖ／Ｖ）ＳＲＢＣ（０．２ｍｌ／每鼠）致敏后４天，测量左 后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射２０％（Ｖ／Ｖ）ＳＲＢＣ（２０ｕｌ／每鼠），于注射后 ２４小时测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。对照组和低、中、高剂量组攻击前 后足跖厚度差值（足跖肿胀度，表示ＤＴＨ的程度）分别为（０．４３０±０．２７）ｍｍ，（０ ．５５７±０．１２）ｍｍ，（０．３５３±０．１９）ｍｍ和（０．５５０±０．１９）ｍｍ。 表明足跖肿胀度有增高的趋势。２．２．２抗体生成细胞检测采用Ｊｅｒｎｅ改良玻片法。取羊血 ，用生理盐水洗涤３次，每次离心（２０００转／分钟）１０分钟，然后将压积ＳＲＢＣ用生理盐 水配成２％（Ｖ／Ｖ）的细胞悬液。分别取每组小鼠各１０只，用细胞悬液在每鼠腹腔注射０．２ ｍｌ。免疫后４天将全部小鼠处死，取脾，轻轻撕碎，用Ｈａｎｋｓ液制成细胞悬液，洗涤、离心 ２次，最后将细胞悬浮在１０ｍｌＨａｎｋｓ液中。将表层培养基加热溶解后与等量的酸度为１× １０－７．４的２倍浓度的Ｈａｎｋｓ液混合，分装小试管，每管０．５ｍｌ，再向管内加５０ｕ ｉ１０％（Ｖ／Ｖ，用ＳＡ液配制）ＳＲＢＣ，２０ｕｌ脾细胞悬液，迅速混匀后，倾倒于已刷琼 脂糖薄层的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育１． ５小时，然后用ＳＡ液稀释的补体（１∶１０）加入到玻片凹槽内，继续温育１．５小时后计数溶 血空斑数（×１０３／全脾），对照组和低、中、高剂量组分别为１２．４±１．７１，１２．９ ±４．８６，２２．９±１１．８６和３５．８５±１２．１０。各剂量组与对照组比较，低剂量 组虽无显著性差别（ｔ＝０．３１，Ｐ＞０．０５）但中剂量和高剂量均能明显增加小鼠抗体生成 细胞数（ｔ中＝２．５８，ｔ高＝６．０７，Ｐ均＜０．０５），仍能说明该茶能增强小鼠的体液 免疫功能。２．２．３对小鼠碳粒廓清的影响。分别取每组小鼠各１０只，在小鼠尾静脉注射以生 理盐水稀释４倍的印度墨汁，每１０ｇ体重注射０．１ｍｌ，待墨汁注入后立即计时，注入墨汁后 ２和１０分钟，分别从内眦静脉丛取血２０ｕｌ，并将其加入到２ｍｌＮａ２ＣＯ３溶液中，用７ ２２型分光光度计在６００ｎｍ波长处比色测光密度值（ＯＤ值），并以Ｎａ２ＣＯ３溶液作空白 对照。将小鼠处死，取肝和脾脏称重，计算各组吞噬指数（ａ），对照组和低、中、高剂量组分别 为６．３１±１．１３，６．３８±０．８６，６．４４±０．６７和７．２１±０．７３。低、 中剂量组与对照组均无显著性差别（ｔ＝０．１５、０．３１，Ｐ均＞０．０５）；但高剂量组显 著高于对照组（ｔ＝２．１２，Ｐ＜０．０５），说明该茶能增强小鼠吞噬细胞的吞噬功能。２． ２．４负重游泳试验。取每组小鼠各１０只，在末次灌胃后３０分钟，在小鼠尾根部负荷５％体重 的铅皮。放入水深约３０ｃｍ，水温２５℃±０．５℃的游泳箱中让其游泳，记录小鼠自游泳开始 至死亡的时间，为小鼠游泳时间。对照组和低、中、高剂量组分别为（３３８．５６±１０２．４ １）秒，（４００．２９±７４．８６）秒，（６６０．８７±３５０．７５）秒和（７９２．６ ３±２８１．０３）秒，低剂量组与对照组比较，小鼠游泳时间两者无显著性差异（ｔ＝１．５４ ，Ｐ＞０．０５）；中、高剂量组与对照组比较均有显著性差异（ｔ＝２．７９、４．８０，Ｐ均 ＜０．０５）。说明该茶能延长小鼠负重游泳时间。２．２．５对小鼠运动时血清尿素氮的影响。 在末次灌胃３０分钟后，将小鼠放入温度为３０℃的水中游泳９０分钟。运动后安静６０分钟，拔 眼球采血０．５ｍｌ。于４℃静置３小时后１５００转／分钟离心１５分钟，取血清用二乙酰－肟 法在５２０ｎｍ波长比色测定尿素氮。对照组和低、中、高剂量组分别为（２．６４±０．１９） ｍｇ／Ｌ，（２．４４±０．３５）ｍｇ／Ｌ，（２．０７±０．１５）ｍｇ／Ｌ和（２．３３± ０．３４）ｍｇ／Ｌ。低剂量组与对照组比较无显著性差异（ｔ＝１．６２，Ｐ＞０．０５），但 中、高剂量组均明显低于对照组（ｔ中＝７．６２，Ｐ＜０．０１；ｔ高＝２．５４，Ｐ＜０．０ ５）。２．２．６对小鼠运动时肝糖元消耗量的影响。末次灌胃后３０分钟，将小鼠放在温度为３ ０℃的水中游泳９０分钟，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏２００ ｍｇ，每管加入４ｍｌＴＣＡ，匀浆１分钟，将匀浆液倒入离心管，以３０００转／分钟离心１５ 分钟，将上清液转移至另一试管内。在沉淀中再加入４ｍｌＴＣＡ，匀浆１分钟后离心１５分钟， 取上清液，与第一次离心的上清液合并，充分混匀。用蒽酮法在６２０ｎｍ波长比色测定肝糖元。 对照组和低、中、高剂量组分别为（７．１５±１．４８）ｍｇ／ｇ肝，（５．４９±２．８１） ｍｇ／ｇ肝，（６．４０±２．８０）ｍｇ／ｇ肝和（８．９８±１．６９）ｍｇ／ｇ肝。低、中 剂量组与对照组比较无显著性差异（ｔ＝１．６５、０．７５，Ｐ＞０．０５），但高剂量组明显 高于对照组（ｔ＝２．５８，Ｐ＜０．０５），表明该茶能增加肝糖元的储备量和／或减少小鼠运 动时糖元的消耗。３小结试验结果表明，在本试验条件下，某品牌绿藻茶能增强小鼠体液免疫功能 和吞噬细胞的吞噬功能，具有免疫调节作用。同时能延长小鼠负重游泳时间，降低运动时血清尿素 氮水平，明显降低运动时肝糖元的消耗量，具有抗疲劳作用某品牌绿藻茶保健功能研究@周月婵@ 胡怡秀@臧雪冰@丘丰@聂焱@吴丽霞$湖南省卫生防疫站６６０．８７±３５０．７５）秒和（ ７９２．６３±２８１．０３）秒，低剂量组与对照组比较，小鼠游泳时间两者无显著性差异（ｔ ＝１．５４，Ｐ＞０．０５）；中、高剂量组与对照组比较均有显著性差异（ｔ＝２．７９、４． ８０，Ｐ均＜０．０５）。说明该茶能延长小鼠负重游泳时间。２．２．５对小鼠运动时血清尿素 氮的影响。在末次灌胃３０分钟后，将小鼠放入温度为３０℃的水中游泳９０分钟。运动后安静６ ０分钟，拔眼球采血０．５ｍｌ。于４℃静置３小时后１５００转／分钟离心１５分钟，取血清用 二乙酰－肟法在５２０ｎｍ波长比色测定尿素氮。对照组和低、中、高剂量组分别为（２．６４± ０．１９）ｍｇ／Ｌ，（２．４４±０．３５）ｍｇ／Ｌ，（２．０７±０．１５）ｍｇ／Ｌ和（ ２．３３±０．３４）ｍｇ／Ｌ。低剂量组与对照组比较无显著性差异（ｔ＝１．６２，Ｐ＞０． ０５），但中、高剂量组均明显低于对照组（ｔ中＝７．６２，Ｐ＜０．０１；ｔ高＝２．５４， Ｐ＜０．０５）。２．２．６对小鼠运动时肝糖元消耗量的影响。末次灌胃后３０分钟，将小鼠放 在温度为３０℃的水中游泳９０分钟，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取 肝脏２００ｍｇ，每管加入４ｍｌＴＣＡ，匀浆１分钟，将匀浆液倒入离心管，以３０００转／分 钟离心１５分钟，将上清液转移至另一试管内。在沉淀中再加入４ｍｌＴＣＡ，匀浆１分钟后离心 １５分钟，取上清液，与第一次离心的上清液合并，充分混匀。用蒽酮法在６２０ｎｍ波长比色测 定肝糖元。对照组和低、中、高剂量组分别为（７．１５±１．４８）ｍｇ／ｇ肝，（５．４９± ２．８１）ｍｇ／ｇ肝，（６．４０±２．８０）ｍｇ／ｇ肝和（８．９８±１．６９）ｍｇ／ｇ 肝。低、中剂量组与对照组比较无显著性差异（ｔ＝１．６５、０．７５，Ｐ＞０．０５），但高 剂量组明显高于对照组（ｔ＝２．５８，Ｐ＜０．０５），表明该茶能增加肝糖元的储备量和／或 减少小鼠运动时糖元的消耗。３小结试验结果表明，在本试验条件下，某品牌绿藻茶能增强小鼠体液免疫功能和吞噬细胞的吞噬功能，具有免疫调节作用。同时能延长小鼠负重游泳时间，降低运动时血清尿素氮水平，明显降低运动时肝糖元的消耗量，具有抗疲劳作用某品牌绿藻茶保健功能研究@周月婵@胡怡秀@臧雪冰@丘丰@聂焱@吴丽霞$湖南省卫生防疫站
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