用绵羊或猪血浆测定肝素钠效价结果的比较罗喜牛沈静（南京大学生物化学厂，南京２１００９３） 摘要利用自制的绵羊或猪血浆测定肝素钠效价，获得一致结果，已满意地应用于生产。关键词肝素 钠效价测定肝素钠（１）是我国出口的主要生化产品之一，本文对其效价测定所用血浆进行了研制 ，已应用于生产，效果满意。特别是可应用猪血浆，摆脱了以往单纯依靠绵羊血浆。１材料和试剂 １．１试剂８％柠檬酸钠；１．０％氯化钙；０．２５％氯化钙；０．９％氯化钠。１．２供试溶 液的配制１．２．１１标准品配制精确称取１标准品适量，用０．９％氯化钠溶液配成１ｍｇ／１ ｍｌ的贮备液，于冰箱内密封保存，临用时，按标示效价乘以０．９３后，用０．９％氯化钠溶液 稀释成８ｕ／ｍｌ。１．２．２１供试品配制精确称取供试品适量，用０．９％氯化钠溶液配成１ ｍｇ／１ｍｌ溶液，进行测定时，按估计效价，用０．９％氯化钠溶液稀释成８ｕ／ｍｌ。２绵羊 和猪血浆的制备在洗净烘干标有刻度的容器中，按比例（抗凝剂∶血液＝１∶１９）加入抗凝剂８ ％柠檬酸钠溶液。用此容器直接接受健康绵羊（或猪）宰杀时放出的新鲜血液至所标示体积刻度。 同时轻轻摇动容器，使充分与抗凝剂混匀。混匀后的绵羊血于离心机内以２５００ｒ／ｍｉｎ的速 度离心１０ｍｉｎ分离血浆（猪血以１４００ｒ／ｍｉｎ，离心１５ｍｉｎ）。将离心得到的血浆 分装于清洁干燥的容器中，置－２０°Ｃ冰柜内冻结贮存。测定时，取出冻结血浆于３７±１°Ｃ 恒温水浴中融化，用滤纸过滤，即为测试所用血浆，放入冰箱（５°Ｃ）中待用。３两种血浆重钙 化试验取血浆１．０ｍｌ置于具塞试管，加入１％氯化钙溶液０．２ｍｌ，轻轻倒转三次，充分混 匀，于３７±１°Ｃ水浴中保温５ｍｉｎ，观察５ｍｉｎ内应有凝块出现，方可用于测定肝素效价 。４两种血浆灵敏度（０．５凝固度）及１效价测定取数支具塞试管按１溶液１０μｌ递增序排列 ，分别加入不同剂量的１标准品和供试品稀释液，再加入血浆１．０ｍｌ及０．２５％氯化钙溶液 ０．８ｍｌ，密塞试管，轻轻倒转三次，充分混匀，置３７±１°Ｃ水浴中保温６０ｍｉｎ。以猛 击一下试管方式检查各剂量级试管内血浆凝固程度，确定完全凝固（１．０）和完全不凝固（０） 及介于其间的０．７５、０．５０、０．２５三个凝固度剂量级。按简捷法计算０．５０凝固度剂 量体积Ｖ１２［１］及１效价（Ｐ）［２］。公式如下：０．５凝固剂量体积Ｖ１２＝邻近全凝固 度级对应的剂量体积＋相邻两剂量体积之差×（各剂量体积对应的凝固度级总和－常数０．５）Ｐ （ｕ／ｍｇ）＝标准品０．５凝固度的肝素溶液加入体积（μｌ）供试品０．５凝固度的肝素溶液 加入体积（μｌ）×供试品估计效价例如：肝素钠溶液测定剂量体积（μｌ）及凝固度１９０２０ ０２１０２２０２３０标准品１．０１．００．７５０．２５０．０供试品１．０１．０１．００ ．２５０．０注：供试品估计效价９６．０ｕ／ｍｇ标准品Ｖ１２＝２００＋１０（１．０＋０． ７５＋０．２５－０．５）＝２１５．０μｌ供试品Ｖ１２＝２１０＋１０（１．０＋０．２５－ ０．５）＝２１７．５μｌＰ＝２１５．０２１７．５×９６．０＝９４．９（ｕ／ｍｇ）。５结 果（表１～表３）表１两种血浆重钙化试验和灵敏度测定结果血浆重钙化试验时间（ｍｉｎ）现象 灵敏度测定剂量（μｌ）及凝固度１７０１８０１９０２００２１０２２０Ｖ１２（μｌ）绵羊５ 全凝１．０１．００．２５０－－１８７．５猪５全凝－－１．０１．００．５０２１０．０表２ 用绵羊血浆、猪血浆测定１效价重复性比较测定次数溶液剂量（μｌ）及凝固度１６０１７０１８ ０１９０２００２１０２２０Ｖ１２（μｌ）效价（ｕ／ｍｇ）绵羊血浆初测标准品１．０１．０ ０．７５００－－１８２．５供试品１．０１．００．７５００－－１８２．５９６．０复测标准 品１．０１．００．７５００－－１８２．５供试品１．０１．００．５００－－１８０．５９７ ．３猪血浆初测标准品－－１．０１．００．２５００１９７．５供试品－－１．０１．０１．０ ００２０５．０９２．５初测标准品－－１．０１．００．２５００１９７．５供试品－－１．０ １．０１．００．２５０２０７．５９１．４表３不同组别测定１同一样品效价（ｕ／ｍｇ）结果 比较血浆组别１２３４平均效价绵羊１０７．８１０６．８１１２．４９０．０１０４．３猪１０ ５．８１０９．８１０９．５９２．０１０４．３６讨论表１结果与文献［２］报道近似，一般血 浆重钙化试验能在５ｍｉｎ内凝固，即可用于０．５凝固度测定。猛击试管后观察各管凝固现象的 操作，需用力均一，否则效价会有差异。表２结果表明猪与绵羊血浆测定１效价自身重复性良好。 特别是先后分别用４种１粗品进行两种血浆测定效价，也获得满意效果。同一样品分４组测定平均 结果基本一致（表３）。上述结果表明，猪血浆可以用于１效价的测定。在制备绵羊血浆过程中， 因采集时期不同及绵羊个体差异，所得血浆的灵敏度不同大规模制备时，往往不能于采血现场离心 ；又因采血时根据估计预先按比例加入抗凝剂，但羊出血量有时与估计相差较大，导致抗凝剂加入 量有差异，而影响血浆灵敏度［３，４］，另外对离心转速与时间应以具体条件来选择。只要注意 和克服上述的问题，就能制备出高灵敏度的血浆。参考文献１谢金明．生化药物杂志，１９８６； （２）∶３４２刘绍唐，张天民．生化药物杂志，１９８６；（２）∶３９３赵小燕，施宁．生化 药物杂志，１９９０；（１）∶附３４熊伟，蔡骏，吴文俊等．生化药物杂志，１９８７；（４） ∶３６ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＯＦＨＥＰＡＲＩＮＰＯＴＥＮＣＹ ＵＳＩＮＧＧＯＡＴＡＮＤＰＩＧＢＬＯＯＤＰＬＡＳＭＡＬＵＯＸｉ－Ｎｉｕ，ＳＨＥＮＪｉｎ ｇ（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＦａｃｔｏｒｙｏｆＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎ ｊｉｎｇ２１００９３）ＡＢＳＴＲＡＣＴＣｏｍｐａｒａｂｌｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｓａｔ ｉｓｆａｃｔｏｒｉｌｙｏｂｔａｉｎｅｄｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａ ｒｉｎｐｏｔｅｎｃｙｕｓｉｎｇｇｏａｔａｎｄｐｉｇｂｌｏｏｄｐｌａｓｍａｐｒｅｐａｒｅ ｄｉｎｔｈｅｆａｃｔｏｒｙＫｅｙＷｏｒｄｓｈｅｐａｒｉｎｓｏｄｉｕｍ，ｐｏｔｅｎｃｙ， ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ用绵羊或猪血浆测定肝素钠效价结果的比较@罗喜牛@沈静$南京大 学生物化学厂肝素钠,效价,测定利用自制的绵羊或猪血浆测定肝素钠效价，获得一致结果，已满 意地应用于生产１谢金明．生化药物杂志，１９８６；（２）∶３４２刘绍唐，张天民．生化药物 杂志，１９８６；（２）∶３９３赵小燕，施宁．生化药物杂志，１９９０；（１）∶附３４熊伟 ，蔡骏，吴文俊等．生化药物杂志，１９８７；（４）∶３６敏度不同大规模制备时，往往不能于 采血现场离心；又因采血时根据估计预先按比例加入抗凝剂，但羊出血量有时与估计相差较大，导 致抗凝剂加入量有差异，而影响血浆灵敏度［３，４］，另外对离心转速与时间应以具体条件来选 择。只要注意和克服上述的问题，就能制备出高灵敏度的血浆。参考文献１谢金明．生化药物杂志 ，１９８６；（２）∶３４２刘绍唐，张天民．生化药物杂志，１９８６；（２）∶３９３赵小燕 ，施宁．生化药物杂志，１９９０；（１）∶附３４熊伟，蔡骏，吴文俊等．生化药物杂志，１９ ８７；（４）∶３６ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＯＦＨＥＰＡＲＩＮＰ ＯＴＥＮＣＹＵＳＩＮＧＧＯＡＴＡＮＤＰＩＧＢＬＯＯＤＰＬＡＳＭＡＬＵＯＸｉ－Ｎｉｕ，Ｓ ＨＥＮＪｉｎｇ（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＦａｃｔｏｒｙｏｆＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉ ｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９３）ＡＢＳＴＲＡＣＴＣｏｍｐａｒａｂｌｅｒｅｓｕｌｔｓｗ ｅｒｅｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｉｌｙｏｂｔａｉｎｅｄｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｈｅｐａｒｉｎｐｏｔｅｎｃｙｕｓｉｎｇｇｏａｔａｎｄｐｉｇｂｌｏｏｄｐｌａｓｍａｐ ｒｅｐａｒｅｄｉｎｔｈｅｆａｃｔｏｒｙＫｅｙＷｏｒｄｓｈｅｐａｒｉｎｓｏｄｉｕｍ，ｐｏ ｔｅｎｃｙ，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ用绵羊或猪血浆测定肝素钠效价结果的比较@罗喜牛@ 沈静$南京大学生物化学厂肝素钠,效价,测定利用自制的绵羊或猪血浆测定肝素钠效价，获得一致结果，已满意地应用于生产１谢金明．生化药物杂志，１９８６；（２）∶３４２刘绍唐，张天民．生化药物杂志，１９８６；（２）∶３９３赵小燕，施宁．生化药物杂志，１９９０；（１）∶附３４熊伟，蔡骏，吴文俊等．生化药物杂志，１９８７；（４）∶３６
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