黄花倒水莲对乙肝病毒Ｅ抗原体外抑制作用的初步观察湖南省儿童医院（４１０００７）李梨平，王 伟华主题词＠黄花倒水莲／药理学，乙肝病毒Ｅ抗原／药物作用黄花倒水莲对乙肝病毒表面抗原（ ＨＢｓＡｇ）具有体外抑制作用（１），为了探讨其是否对乙肝病毒（ＨＢＶ）有比较全面的体外 抑制作用，我们对其进行了体外抑制ＨＢｅＡｇ的实验，现将结果报道如下。１材料与方法１．１ 药物制备黄花倒水莲生药由湖南中医学院药学分院提供，按通常煎煮方法将生药置三角烧瓶内加适 量蒸馏水浸泡３０ｍｉｎ，在火上加热煮沸１５～２０ｍｉｎ，冷却后经纱布过滤去渣并浓缩成１ ０％（每１００ｍｌ含生药１０ｍｇ）剂量的药液（原液），４℃保存备用。１．２ＨＢｅＡｇ阳 性血清ＨＢｅＡｇ阳性血清由湖南省儿童医院传染科提供。通过反向间接血凝抑制实验（ＲＰＨ） 选用ＨＢｅＡｇ滴度在１∶８００～１∶３２００的血清，并用中和实验证实。将阳性血清混匀， 置超低温冰箱（美国ＨＡＲＲＩＳ公司生产）－７０℃冻存。实验前再经ＥＬＩＳＡ实验证实为Ｈ ＢｅＡｇ强阳性。１．３试剂ＨＢｅＡｇＥＬＩＳＡ试剂盒购自华美生物工程有限公司，批号为９ ７０６０８。１．４主要仪器ＤＧ－３０２２Ａ型酶联免疫检测仪，华东电子管厂生产。１．５实 验方法参照文献（２）改进而成。１．５．１药物分为原液（药物浓度为１０ｍｇ／１００ｍｌ） ，１：２稀释（５．０ｍｇ／１００ｍｌ），１∶４稀释（２．５ｍｇ／１００ｍｌ）３个剂量组 。１．５．２血清分为原液，１：２稀释，１：４稀释３组。１．５．３作用时间分为１ｈ，２ｈ ，４ｈ３组。１．５．４实验过程取不同浓度药液加入９６孔细胞培养板中，以生理盐水（ＮＳ） 作为阴性对照，“８４”消毒液作为阳性对照，每组均做２０孔。每孔均加入１：２稀释的ＨＢｅ Ａｇ阳性血清５０ｕｌ，震荡混匀后置３７℃培养箱内接触４ｈ。将未经稀释（原液）、２倍（１ ：２）及４倍（１：４）稀释的ＨＢｅＡｇ阳性血清５０ｕｌ加入９６孔细胞培养板孔内，每组２ ０孔．分别加入药物原液５０ｕｌ，３７℃接触４ｈ。将药物原液５０ｕｌ加入９６孔培养板孔内 ，再加入１：２稀释的ＨＢｅＡｇ阳性血清５０ｕｌ，３７℃分别接触１ｈ．２ｈ和４ｈ．每一时 间均作２０孔。上述各组达到预定接触时间后，吸取５０ｕｌ药物与血清的混合液加入到已预包被 处理好的酶标板孔内（试剂盒已提供），按试剂盒说明书继续操作。最后在酶标仪上使用波长４９ ２ｎｍ滤光片，经空白孔调零后检测。将所测得的每组（吸光度）ＯＤ值进行均数ｔ检验。２结果 ２．１不同药物剂量对抑制能力的影响血清稀释度（１∶２）与接触时间（４ｈ）不变，黄花倒水 莲水煎液３个不同剂量组（原液、１∶２稀释、１：４稀释）的吸光度值（ＯＤ值）与ＮＳ对照组 相比，具有明显差异（Ｐ均＜０．０５），而且３个不同剂量之间两两比较，亦有明显差异（Ｐ＜ ０．０５）．结果见表１。２．２ＨＢｅＡｇ不同滴度对药物抑制能力的影响ＨＢｅＡｇ阳性血清 未经稀释（原液）．２倍及４倍稀释时，药物浓厚（原液）与接触时间（４ｈ）不变，其抑制能力 ３组间两两比较。具有明显差异（Ｐ＜０．０５）．见表２。２．３不同接触时间对药物抑制能力 的影响药物浓度（原液）与ＨＢｅＡｇ滴度（１：２）不变时，１ｈ．２ｈ．４ｈ３组之间，随着 接触时间延长，其ＯＤ值逐渐降低．经两两比较发现不同接触时间组之间有显著性差异（Ｐ＜０． ０５）．见表３。湖南中医学院第一附属医院３讨论黄花倒水莲水煎液３种不同浓度对乙肝病毒Ｈ ＢｅＡｇ均具有体外抑制作用，但随着药物稀释度的增加（亦即浓度降低）．其ＯＤ值逐渐增加， 且差异具有显著性。说明药物浓厚越低对ＨＢｅＡｇ的体外抑制作用越弱，提示在服用黄花倒水莲 口服液时，应注意有效浓度，不要过度稀释。ＨＢｅＡｇ阳性血清无论是否稀释，黄花倒水莲水煎 液对其均具有明显的体外抑制作用，但是当ＨＢｅＡｇ稀释度逐渐增大时，抑制作用亦逐渐增强。 因ＨＢｅＡｇ是ＨＢＶ的复制指标之－，ＨＢｅＡｇ滴度高说明ＨＢＶ复制活跃，病毒数量多，反 之亦然。据此可推测黄花倒水莲对血清ＨＢｅＡｇ低滴度的患者，亦即ＨＢＶ低复制、病毒数量少 的人其疗效可能优于ＨＢＶ高复制者。药物与病毒接触时间越长则抑制作用越强。中草药对乙肝病 毒体外抑制作用的报道较多（３－５）。黄花倒水莲（Ｐｏｌｙｇａｌａａｕｒｅｏｃａｕｄａｄ ｕｎｎ）为远志科植物黄花倒水莲全草，我们曾经报道过黄花倒水莲水煎液对ＨＢｓＡｇ的体外抑 制作用（１）．从本实验结果初步看来，黄花倒水莲水煎液对ＨＢｅＡｇ亦具有一定程度的体外抑 制作用，这为扩大黄花倒水莲的临床适应证提供了初步的实验依据。但体外抑制实验受“体外”及 方法的局限，黄花倒水莲进入体内后对ＨＢＶ是否仍具有抑制作用，尚须进一步探讨。参考文献｜ ｜１王伟华，褚裕义，刘伟士，等．黄花倒水莲对乙肝病毒体外抑制作用的初步观察。湖南中医药 导报．１９９６：２（６）：３１２ＺｈｇｎｇＭｉｎｓｈｉ．ｅｔａｌ．Ａｎｅｘｐｇｒｉｍｅ ｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎａＶａｓｔＳｃｕｌｅｏｎＨＢｓＡｇＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＵｓｉｎｇ １０００Ｈｅｒｂｓ．ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ．１９９０：１（ ３）：２９３郑民实。ＥＬＩＳＡ技术检测中草药抗ＨＢｓＡｇ．中西医结合杂志。１９９０：１ ０（９）：５６０４杨斌武．中药对ＨＢｓＡｇ抑制作用的观察．甘肃中医学院学报，１９９３： １０（２）：５２５蒋锡源．５０种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制ＨＢｓＡｇ活性的比较．现代 应用药学，１９９２：９（５）：２０８黄花倒水莲对乙肝病毒E抗原体外抑制作用的初步观察@ 李梨平，王伟华$湖南省儿童医院$湖南中医学院第一附属医院黄花倒水莲／药理学，乙肝病毒Ｅ 抗原／药物作用１王伟华，褚裕义，刘伟士，等．黄花倒水莲对乙肝病毒体外抑制作用的初步观察 。湖南中医药导报．１９９６：２（６）：３１２ＺｈｇｎｇＭｉｎｓｈｉ．ｅｔａｌ．Ａｎｅｘ ｐｇｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎａＶａｓｔＳｃｕｌｅｏｎＨＢｓＡｇＩｎｈｉｂｉｔｉｏ ｎＵｓｉｎｇ１０００Ｈｅｒｂｓ．ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ．１ ９９０：１（３）：２９３郑民实。ＥＬＩＳＡ技术检测中草药抗ＨＢｓＡｇ．中西医结合杂志。 １９９０：１０（９）：５６０４杨斌武．中药对ＨＢｓＡｇ抑制作用的观察．甘肃中医学院学报 ，１９９３：１０（２）：５２５蒋锡源．５０种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制ＨＢｓＡｇ活性 的比较．现代应用药学，１９９２：９（５）：２０８Ｍｉｎｓｈｉ．ｅｔａｌ．Ａｎｅｘｐｇｒ ｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎａＶａｓｔＳｃｕｌｅｏｎＨＢｓＡｇＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＵｓ ｉｎｇ１０００Ｈｅｒｂｓ．ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ．１９９０ ：１（３）：２９３郑民实。ＥＬＩＳＡ技术检测中草药抗ＨＢｓＡｇ．中西医结合杂志。１９９ ０：１０（９）：５６０４杨斌武．中药对ＨＢｓＡｇ抑制作用的观察．甘肃中医学院学报，１９ ９３：１０（２）：５２５蒋锡源．５０种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制ＨＢｓＡｇ活性的比较 ．现代应用药学，１９９２：９（５）：２０８黄花倒水莲对乙肝病毒E抗原体外抑制作用的初步 观察@李梨平，王伟华$湖南省儿童医院$湖南中医学院第一附属医院黄花倒水莲／药理学，乙肝 病毒Ｅ抗原／药物作用１王伟华，褚裕义，刘伟士，等．黄花倒水莲对乙肝病毒体外抑制作用的初 步观察。湖南中医药导报．１９９６：２（６）：３１２ＺｈｇｎｇＭｉｎｓｈｉ．ｅｔａｌ．Ａ ｎｅｘｐｇｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎａＶａｓｔＳｃｕｌｅｏｎＨＢｓＡｇＩｎｈｉｂｉ ｔｉｏｎＵｓｉｎｇ１０００Ｈｅｒｂｓ．ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＪｏｕｒｎａ ｌ．１９９０：１（３）：２９３郑民实。ＥＬＩＳＡ技术检测中草药抗ＨＢｓＡｇ．中西医结合杂志。１９９０：１０（９）：５６０４杨斌武．中药对ＨＢｓＡｇ抑制作用的观察．甘肃中医学院学报，１９９３：１０（２）：５２５蒋锡源．５０种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制ＨＢｓＡｇ活性的比较．现代应用药学，１９９２：９（５）：２０８
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