人及动物体表几乎完全由皮肤覆盖,皮肤就是机体同外界环境接触的第一道防线。业已证明,海洋肽(polypeptides fromChlamys far他“,PCF)外涂对皮肤具有抗老化作用,本文旨在对海洋肽PCF‘进行皮肤毒理学研究,以正确评价其对皮肤毒性作用的性质及危险度。1材料1.1 试剂 硫化钠,北京化工厂生产,批号9500233;PCF,中国水产科学院黄海研究所自栉孔扇贝分 离提取,本室自制面膜和基质;无水乙醇,德州金源医药酒精有限公司生产,批号9600211;2,4一二硝基氯苯,上海试剂一厂产品,批号9601378。1.2动物 白色豚鼠购自上海医学实验动物调剂服务处(0000422)2方法与结果2.1 PCF的皮肤急性毒性实验 选用白色豚鼠20只,雌雄各半,体重286.9±35.7g,随机分为基质组和PCF’面膜组 (5倍)。实验前24h将动物背部脊柱两侧脱毛,将受试物(1g)均匀涂在6×5(cm)。 动物背部,保鲜膜包裹24h。连续观察15d内豚鼠的活动、饮食、体重变化和死亡情况及局部皮肤和全身的中毒反应<1>。实验期间,各组豚鼠活动自如,饮食良好,皮毛光泽,粪便正常,体重的经时变化(表1)组间无明显差异,也未见明显全身急性中毒症状。表1 PCF‘面膜外用于完整皮肤时对豚鼠体重 的影响(g,至±s) 与基质对照组比较,P>O.052.2.PCF‘的急性皮肤刺激实验 将雌雄各半的16只豚鼠(体重310.O士28.3g),随机分组并按常规方法脱毛。①组脱毛 区涂擦PCF面膜(5倍);②组涂基质(各1g),保鲜膜包裹24h。温水清除受试物后,即刻观察,并连续观察1h、24h、48h、72h至7d涂抹部位的皮肤反应<2>。除去受试物1h,可见局部胶布固定的痕迹,①组动物中有1例出现轻微的可见红斑,但未见明显红 肿等异常。24h～7d,②组动物未见异常。②组动物皮肤均未出现红斑和水肿反应。根据皮肤刺激性反应评分标准,计算其刺激强度为O.2。见表2。《中国海洋药物》杂志1998年第3期(总第67期)表2 PCF面膜的急性皮肤刺激试验结果2.3 PCF的多次皮肤刺激实验 采用配对设计,将6只豚鼠(雌雄各半)(体重295.0士23.1g),常规方法脱毛,于左、 右两侧脱毛区分别涂以基质和PCF面膜(0.5g),每日1次,连续14d,逐日观察皮肤局 部红斑、水肿反应。14d后,将豚鼠处死,分别取下背部脊柱两侧涂抹部位的皮肤,以Bour’s液固定,HE染色行光镜观察n>。病理组织学检查结果表明,两侧的皮肤组织结构完整、层次清晰,除皮肤棘层和颗粒层局部轻度增厚、细胞间轻度水肿外,其它均未见明显组织形态学变化。2.4 PCF的皮肤过敏实验 取白色豚鼠30只,雌雄各半,体重275.7±36.9g,随机分为3组:①组为基质组,②组 为PCF面膜组,③组为阳性对照组(2,4一二硝基氯苯组),按文献方法<1。>,分别进行致敏接触和激发接触,对皮肤过敏反应程度进行评分并计算致敏发生率。表3PCF‘面膜对豚鼠皮肤的过敏试验结果 如表3所示,阳性对照组,即2,4一二硝基氯苯组动物皮肤受试区自激发给药6h,8/10出现 中度红斑(雌、雄各4只),1/10为轻度红斑无水肿。24h后,除红斑外,轻度水肿为2/ 10,余皆出现红斑,4/10为中度红斑(雌2只、雄2只),2/10为轻度红斑,致敏率达1009/5。48h后,轻、中度红斑各为1/10。72h后恢复正常。PCF组动物皮肤受试区激发给药6h,仅有1/10为轻度红斑,致敏发生率为10%。3讨论 王符兰实验证明人皮的渗透速度与猪、豚鼠接近14>,作者的工作又证明,PCF仅在涂皮肤时才 产生抗皮肤老化作用。所以,以豚鼠为实验对象,进行PCF的皮肤毒性研究,对确定该产品能否 经皮肤渗透和短期作用所产生的毒性反应有重要意义。研究证明,PCF面膜(5倍)外用,对豚鼠未引起急性毒性反应。PCF的急性皮肤刺激实验,是观察一次性皮肤涂擦受试物后局部产生的炎性反应,该产品的刺激强 度为O.2。根据文献<1。’标准皮肤刺激强度在O～O.42或O～O.48之间,可确认为无刺激性,从而证实该产品对豚鼠的完整皮肤无急性刺激作用。资料表明<5>,豚鼠皮肤对受试物的刺激反应灵敏,其反应近似人类,故对作用缓和的刺激物用豚 鼠实验结果较准确。对多次接触PCF面膜的豚鼠皮肤,病理学检查结果提示,PCF面膜对豚鼠完整皮肤不易引起慢性刺激。由于本实验的致敏途径与实际接触方式接近,通过PCF激发接触,观察豚鼠的皮肤变态反应,仅见 轻度红斑,按国家标准规定m。御,受试物的致敏率在9%～28%,为轻度致敏物(Ⅱ级)。据 报道口>,一般情况下,在豚鼠身上致弱过敏者一般不至于引起人体变态反应,提示PCF面膜不易引起人体皮肤过敏反应。海洋肽的皮肤毒理学研究@贺孟泉$青岛大学医学院!青岛266021
@王春波$青岛大学医学院!青岛 266021
@秦守哲$青岛大学医学院!青岛 266021
@汪贯习$青岛大学医学院!青岛 266021
@许开利$青岛大学医学院!青岛 266021
@王玉贞$青岛大学医学院!青岛 266021
@仲伟珍$青岛大学医学院!青岛 266021栉孔扇贝;;多肽;;皮肤毒理学;;安全性评价为确保海洋肽面膜使用的安全性,并 为产品应用提供实验依据,对海洋肽的皮肤毒理学进行了研究。应用豚鼠皮肤急性毒性、刺激性和 过敏性实验,对海洋肽面膜进行安全性评价。结果表明,海洋肽面膜(5倍)对完整皮肤未引起急 性毒性反应,单次和多次实验皮肤未出现水肿和红斑反应,病理检查,皮肤结构完整,层次清晰; 经致敏接触和激发接触,2,4-二硝基氯苯组皮肤平均反应值0.9～1.0,致敏率为90% ～100%,海洋肽面膜皮肤致敏率10%。提示该产品未引起皮肤急性毒性反应,无刺激性,为轻度致敏物。1宋爱国,杨根源,陈勉哉编译.化妆品原料技术标准.北京:中国轻工业出版社,1994:613～628
2 陈奇主编.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,1994:164～167
3 徐叔云,陈修主编.药理学实验方法.北京:人民卫生出版社,1994:201～228
4 江泉观主编.基础毒理学.北京:化学工业出版社,1991:305～307
5 方喜业主编.医学实验动物学.北京:人民卫生出版社,1995:125～128,皮肤结构完整 ,层次清晰;经致敏接触和激发接触,2,4-二硝基氯苯组皮肤平均反应值0.9～1.0,致 敏率为90%～100%,海洋肽面膜皮肤致敏率10%。提示该产品未引起皮肤急性毒性反应,无刺激性,为轻度致敏物。1宋爱国,杨根源,陈勉哉编译.化妆品原料技术标准.北京:中国轻工业出版社,1994:613～628
2 陈奇主编.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,1994:164～167
3 徐叔云,陈修主编.药理学实验方法.北京:人民卫生出版社,1994:201～228
4 江泉观主编.基础毒理学.北京:化学工业出版社,1991:305～307
5 方喜业主编.医学实验动物学.北京:人民卫生出版社,1995:125～128
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