近年来的研究结果表明，氧自由基与人类的健康和疾病密切相关［‘j。人类赖以生存的氧（O。） 在新陈代谢转变成水的过程中，要经历获得4个电子阶段，产生氧自由基Oi、过氧化氢H。O。 、羟自由基OH这一群自由基，也叫活性氧，这是氧毒性的关键所在。活性氧和其他自由基多数情 况下对细胞有明显毒性作用，引起各种生物结构广泛损伤，如导致核酸链断裂，蛋白质变性，多糖 降解，酶失活，细胞病变和死亡，乃至使机体内某些组织破坏、癌变和衰老。正常情况下，机体内 含有一些抗氧化物：超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷眺甘肽过氧化物酶（ GSH—PX）和一些小分子的物质［如谷跳甘肽（GSH）、维生素A、维生素E、维生素C］ ，它们都有清除自由基和阻止脂质过氧化的作用，使机体的自由基代谢处于平衡状态。而皮肤则直 接与环境接触，太阳紫外线、臭氧、环境毒物等常会引发皮肤细胞产生过量的自由基，使自由基代 谢失衡。皮肤的病变能反映内脏的病变，并影响内脏功能。因此现代化妆品不仅要求具有保温、润 肤、增白、抗皱作用，还要求有营养性和抗氧化性，以增加皮肤抗辐射和抗毒物的能力，减少皮肤 病变，延缓皮肤衰老。笔者曾对热带、亚热带地区盛产的余甘于（Phylanthuse。hi 。caf。）进行抗癌作用研究‘’－‘’，又对其进行抗衰老作用研究“－，证明余甘于有清除 人体内氧自由基的效果。在此基础上，笔者进一步研究余甘提取物（余甘果汁）及其制品（余甘营 养液和余甘健肤霜）的抗氧化特性和对皮肤过量自由基的清除效果。1材料和方法卫．l材料余甘 果汁由鲜果直接压榨而成；余甘营养液由余甘果汁配以具有活血化瘀、抗炎消斑作用的中草药液组 成，含有丰富的营养成分：维生素C（比橙汁高20倍）、维生素PP、维生素BI、BZ、胡萝 卜素、多种氨基酸、蛋白质、有机酸及Fe、Zn、Ca、Se等微量元素厂”。余甘健肤霜由美 容霜剂基质加入适量余甘提取物制成。Wester大鼠购自（上海生物制品研究所实验动物中心 ），雄性，体重180g左右。昆明种小鼠，雄性，体重zz～isg，麻醉后剃去腹部皮肤的毛 ，取下皮肤作余甘健肤霜的透皮试验。1．2药品黄源吟、鲁米诺购自Sisma公司；黄源吟氧 化酶，调理的酵母多糖为实验室自制；NaCI、KH。PO。、K。HPO。、FeSO。、H 。O。、CuSO；、N。OCI等药品为国产分析纯试剂，SOD、LPO药盒购自南京铁道医 学院，美容霜剂由南源永芳集团公司提供；DMPO购自南京大学化工厂。1．3仪器发光计有2 种，SHC—1型生物化学发光测量仪和FH463A定标器加BH0057光度计探头组成的发 光计（北京核仪器厂产），Varian112EPR谱仪（美国产）。1．4方法1．4．回化 学发光法（CL）和顺磁共振法（ESR）使用化学发光测量技术，测量余甘提取物及其制品对发 光体系产生的活性氧的清除作用。以发光的抑制率为纵坐标，余甘提取物及其制品的浓度为横坐标 作图，从图中找出抑制发光50％的浓度（IC。。）来衡量其抗氧化效果，定为1个活力单位。 门）黄膘吟、黄膘吟氧化酶、鲁米诺产生of的化学发光体系，测量余甘营养液对of的清除作用 ［’1（2）H。O。C。CI。Lllmiflol化学发光体系，测量余甘营养液对H。O。 的清除效果。（3）Vlt．C—CU’”一酵母化学发光体系，测量营养液清除OH的活性D’ （4）N。。CI—H。O。一酵母化学发光体系，测量营养液清除单线态氧’OZ的活性。（5 ）全血吞噬细胞化学发光体系：血中的多型核白细胞（PMN）在调理的酵母多糖刺激下，产生O Z、OH一、H。O。、OCI、IO。等多种活性氧，并伴随细胞膜的脂质过氧化。在有鲁米诺 存在时，这些活性氧的能量转移给鲁米诺，使鲁米诺发光。余甘提取物可清除这些活性氧，因而使 化学发光的强度下降，其抑制PMN化学发光（PMN—CL）峰强一半的浓度以IC。。表示。 （6）给大鼠口服余甘果汁200mL／d，连服5d。然后用结扎两侧劲动脉的方法。造成大脑 缺血缺氧；去结扎再给氧0．sh，随即断头取全脑制备生理盐水匀浆，测其自发的化学发光强度 和全血吞噬细胞的化学发光强度，同时测定红细胞SOD、血浆的SOD和过氧化脂质LPO（以 丙二醛MDA表示）等指标。用DMPO捕捉剂捕捉Fenton反应所产生的OH－，用顺磁共 振法（ESR）测OH信号，信号峰值降低一半的浓度以IC。。表示。亚，4．2余甘提取物的 透皮能力试验取两头通的小一及．Icm，长5cm的玻璃管2根，将同一只小鼠腹部两侧（对称 ）取下的二块去了毛的皮肤分别捆绑在2根玻璃管的一端，做两种试验：一是在管内装入lmL生 理盐水，管外皮肤（表皮）上涂布0．5％的余甘健肤霜100mg，对照组涂布无余甘提取物的 普通霜剂。将玻管挂入玻璃瓶中保湿，每间隔30min取50qL生理盐水测定抑制黄膘吟一黄 瞟吟氧化酶一鲁米诺发光体系的发光；另一种试验是小管中加入同样的生理盐水，再将小管浸入加 0．5％余甘盐水的玻璃瓶中，对照组小管浸入的盐水中无余甘提取物。同样每间隔一定时间从小 管内取样测其对oi的清除能力。1·4·3稳定性试验（1）将余甘健肤霜剂加热至25、40 、50、60、80、90C，余甘营养液经高压灭菌后，分别测其抗氧化能力。（2）将余甘果 汁在4C条件下贮存la，余甘粉（由余甘果汁经减压浓缩、干燥后所得的粉状固体）经塑料袋密 封包装，在常温下贮存半年以上，再分别测其清除自由基和抗氧化的能力。2结果与分析2．1余 首营养液清除自由基的作用用化学发光法（CL）和顺磁共振法（ESR）测定余甘营养液对各发 光体系所产生的各种活性氧的清除能力如表1。表1余首营养清除活性氧的能力（IC50）由表 1可见，余甘营养液是一种理想的、全能的自由基清除剂，在它的配方中，既有清除自由基的作用 ，又有活血化瘀、消炎抗斑的作用，因此可作为健肤营养液。2．2抑制脂质过氧化，提高细胞内 SOD的活性，降低血浆中LPO的含量大鼠大脑缺血、缺氧模型试验结果见表2。表2余首提取 物对大鼠脑缺血再活氧化损伤的防护作用（n—10）余甘提取物可明显地提高红细胞和血浆的S OD活力，降低血浆中LPO含量并削弱PMN一CL，对大脑缺血再灌的氧化损伤有很好的防护 作用。对老年人的试验结果表明，服用余甘营养液2个月后，红细胞SOD升高1．3倍，血浆L PO含量降低11％［‘’。Hochstein认为，细胞长期受过氧化损伤是细胞老化的原因 之一，个体的衰老是在细胞的老化基础上产生，因此细胞老化是机体衰老的基础“‘。上述试验结 果证明了余甘提取物可抑制脂质过氧化，又是自由基的清除剂，从某种意义上说，它具有防衰老的 效果。2二3余甘提取物可透过小鼠皮肤，清除皮肤内部产生的自由基两组余曾提取物的透皮能力 试验结果都证明余甘霜剂能穿透皮肤，使小管内的生理盐水具有抑制发光的能力。放置的时间越长 ，透过的量越多，抑制发光的能力就越强（表3）。但在同一时间内浸液的抑制发光率要比涂霜的 高得多，说明浸入含余甘提取物盐水中的小管透过余甘提取物的量远比涂布余甘健肤霜剂的小管透 过的量多。表3余首提取物透过皮肤的能力2·4甘提取物具有耐热性温度梯度25、40、50 、60、80、90C内余甘健肤霜剂清除Oir、OH一及抑制PMN—CL活性变化不大（表 4）。表4温度对金甘健肤霜剂抗氧化能力的影响余甘营养液经过高压灭菌消毒后，其清除O；的 活性仍然保持不变（表5）表5高压处理后的余甘营养液清除）．．的活性以上试验结果证明，适 当加热并不影响余甘提物的抗氧化特性，因此在利用余甘提取物制作健肤霜和营养液过程中，可以 进行巴氏灭菌和高压灭菌处理。2．5余甘提取物具有耐贮存的特性余甘果汁在40C冰箱中密封 贮存la以上，余甘粉经密封包装常温条件下存放半年多，测其清除O；的能力（表6）表6余首 提取物长期贮存对清除O．活力的影响由表6可见，余甘提取物清除O；的活力虽然有所下降，但 下降较少，说明只要保存得当，余甘原汁和余甘粉是可以限期贮存的。3结论余甘提取物是极好的 、全能的自由基清除剂和脂质过氧化的阻断剂，对大脑缺血再灌的氧化损伤有很好的防护作用。将 它们组入护肤霜和营养液中仍能保存其全能的抗氧化特性，在一定温度范围内具有热稳定性和定期 贮存不丧失活性等特点。这些抗氧化成分都是小分子物质，能够透过皮肤，去清除皮肤中产生的过 量自由基。这些特点是O；的清除剂一SOD所无法比拟的。SOD是大分子物质，其分子量大于 30000道尔顿，不易透过皮肤发挥其清除O；的能力；SOD是酶类，也就是蛋白质，不耐干 和热，制备霜剂时易失活，久贮易变性，因此余甘提取物有更广泛的应用前景。余甘提职物及其制 品清除自由基和抗氧化的特性@刘凤书$中国林业科学研究院资源昆虫研究所!云南昆明，650 216@李绍家$中国林业科学研究院资源昆虫研究所!云南昆明，650216@侯开卫$中国 林业科学研究院资源昆虫研究所!云南昆明，650216@胡天喜$华东师范大学生物系!上海 ，200062余甘提取物;;自由基;;抗氧化;;化学发光用化学发光法（CL）和顺磁共振 法（ESR）测定结果表明，余甘提取物及其制品有清除活性氧的能力。通过大鼠大脑缺血、缺氧 模型试验，证明余甘果汁对大脑缺血再灌的氧化损伤有防护作用。余甘提取物混入霜剂后，仍然有清除自由基的活性，而已其有效成分可透过皮肤，清除皮肤内部产生的过量自由基。该有效成分既耐热又耐贮存，因而具有较好的应用前景。1Phtak,P.S.Res.Commun.chem.pharmacol,1980,29.113
2刘凤书,侯开卫,杨臣武,等.余甘于对强致癌物N-亚硝基化合物合成的阻断作用(一).热带作物学报,198.8,9(2):65～67
3侯开卫,刘凤书,杨臣武,等.余甘子对强致癌物N-亚硝基化合
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