反相高效液相色谱在中药制剂质量控制中的应用杨军江苏省中医院，南京２１００２９反相高效液相 色谱是ＨＰＬＣ中应用最广泛的一个分支，其主要原因是这个操作系统的简单性和灵活性。用作流 动相的水和能与水互溶的有机溶剂在价格和获取方便的程度上都比正相色谱中的烃类溶剂有利。特 别是化学键合固定相上样品的不可逆吸附和溶剂的记忆效应小，所以更换溶剂或梯度淋洗非常方便 。更为突出的是分析对象多样化，灵活性大。近年来，反相ＨＰＬＣ在中药制剂质量控制中的应用 得到了迅速发展，主要用于中药制剂中非极性至中等极性的各类分子型成分的定量分析。反相键合 相色谱，又称极性键合相色谱。键合相表面都是极性很小的烃基，如十八烷基硅烷键合硅胶（ＯＤ Ｓ或Ｃ１８），而洗脱液大多采用强极性溶剂或无机盐的缓冲液。在这种键合相色谱中，洗脱次序 恰好与正相色谱相反，即极性大的化合物先洗脱，极性小的化合物不易洗脱。因为键合相表面的官 能团不易流失，溶剂的极性可以很大范围内调整，因此应用范围很宽，加之由其派生的反相离子对 色谱法与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、硷和盐等离子化合物，扩大了应用范围［１］。反相 高效液相色谱的作用机理主要有疏溶剂作用理论［２］和双保留机理［３］。疏溶剂理论解释保留 时，假定键合相表面是一层均匀的非极性烃类配位基，在大多数商品反相键合填料上，这是正确的 或接近正确的，特别是在使用水和有机溶剂二元混合物做流动相的情况下。但是我们也知道，烷基 键合相表面也是不均匀的，除了烃类配位基外，还有残余硅羟基。这是一种显微酸性的基团，可以 与溶质阳离子或氢键基团相互作用，这种作用叫做“亲硅羟基效应”或二次相互作用。这种“双保 留机理”决定了溶质的保留值应包括两部分的贡献，即疏溶剂效应和亲硅醇基效应。１试样的提取 方法中药制剂在测定前应根据其剂型和待测主份的理化性质，选择适当的溶媒和提取方法，将待测 成分从剂型中提取出来。方剂、水泛丸和冲剂研成细粉，硬胶囊去壳得细粉，散剂可直接取样，准 确称取适量，选择适当溶媒，常用甲醇或乙醇，浸泡一定时间，超声波振荡器提取或加热回流提取 。口服液，常用有机溶媒萃取，或者取一定量口服液拌入适量硅藻土，混匀，干燥，然后用超声波 振荡提取或索氏提取。蜜丸，先剪碎，称取一定量，拌入适量硅藻研匀，干燥，再根据待测成分选 择适当溶剂提取。２试样纯化方法２．１过大孔树脂柱，可除去糖的干扰。２．２用聚酰胺柱纯化 黄酮类成分。２．３生物硷类，先调ｐＨ至硷性，再用氯仿提取。２．４过氧化铝和活性炭混合柱 ，可除去试样中少量杂质及色素。２．５用滤膜过滤或过ＰＴ系列色谱预处理小粒。３色谱条件的 选择３．１色谱柱：常用Ｃ１８柱，柱长１５～３０ｃｍ，填料粒度５～１０μｍ。３．２流动相 ：甲醇－水，乙腈－水，甲醇－磷酸盐，乙腈－磷酸盐，可适当调节组分的配比和流动相的ｐＨ值 ，个别流动相中添加离子对试剂。３．３检测器：多为紫外检测器，根据组分的吸收度，选择最佳 波长。４杂质干扰检查中成药药味多，成分复杂，相互干扰大，所以采用反相ＨＰＬＣ研究时必须 去掉中成药中含被测成分的药材，制成模拟样品，然后再按供试药品的方法提取、分离，在拟定好 的条件下进样分析，无干扰峰方可确证所建立的定量方法符合要求。５定量方法定量方法为内标法 和外标法，由于中药制剂成分复杂，出峰多且密，故多采用外标法。以试样的标准品作对照物质， 相对比较以求得试样的含量，常用工作曲线法和外标一点法。６反相高效相色谱在中药制剂质控中 应用概况６．１口服液：蛇胆川贝液（胆酸）［４］、二仙汤口服液（淫羊藿甙）［５］、蜂三浆 口服液（１０－羟基癸烯酸）［６］等。６．２注射液及粉针剂：祖司麻注射液（秦艽甲、丙素） ［７］、丹素粉针剂（丹参素）［８］等。６．３片剂：消癃片（绿原酸）［９］、牛黄解毒片（ 大黄素）［１０］、三七片（人参皂甙Ｒｇ）［１１］、护肝片（五味子乙素）［１２］等。６． ４丸剂：速效救心丸（川芎嗪）［１３］、止咳化痰丸（麻黄硷）［１４］、归芍六君丸［１５］ 、木香顺气丸（厚朴酚）［１６］等。６．５冲剂：虎杖冲剂（白黎醇甙）［１７］、喉痹康冲剂 （黄芩甙）［１８］等。６．６胶囊：马钱子胶囊（马钱子硷）［１９］等。参考文献１安登魁， 张正行，盛龙生．药物分析．济南：济南出版社，１９９２∶４３９２张仁斌，徐修容，杨一鸣， 等．ＨＰＬＣ在医药研究中的应用．上海：上海科技出版社，１９８３∶２２５３王俊德，商振华 ．色谱，１９８７，５（２）∶８６４倪坤仪，屠树滋，黄斌学，等．药物分析杂志，１９９３， １３（１）∶３５张艺，孟宪丽，石磊．中草药，１９９３，２４（４）∶１７９６王书俊，崔智 奇，李翰章．中成药，１９９５，１７（６）∶１１７王晓燕．中成药，１９９５，１７（２）∶ １９８关大卫．药物分析杂志，１９９４，１４（３０∶３６９王兰霞，白亚明，张伯崇，等．中 成药，１９９４，１６（３）∶１３１０王玉珏，孟宪纾，陈骐．沈阳药学院学报，１９９３，１ ０（２）∶１２９１１任世木，黄新生．中成药，１９９６，１８（４）∶１４１２仲昭庆，王清 华，杨瑞琪．中草药，１９９６，２７（４）∶２１５１３赵志春，俞惠琴，陆克平，等．中国中 药杂志，１９９１，１６（１２）∶７２９１４梁宏唏，于如嘏，杨清华，等．中成药，１９９０ ，１２（１０）∶１３１５朱秀华．中成药，１９９１，１３（６）∶１４１６黄新生．中成药， １９９４，１６（６）∶１６１７童平．中成药，１９９０，２１（１１）∶１６１８成永武，薛 杉春，冯中平，等．中成药，１９９４，１６（９）∶５１１９王京霞，许家鸾．现代应用药学， １９９６，１３（３）∶５３反相高效液相色谱在中药制剂质量控制中的应用@杨军$江苏省中医 院１安登魁，张正行，盛龙生．药物分析．济南：济南出版社，１９９２∶４３９２张仁斌，徐修 容，杨一鸣，等．ＨＰＬＣ在医药研究中的应用．上海：上海科技出版社，１９８３∶２２５３王 俊德，商振华．色谱，１９８７，５（２）∶８６４倪坤仪，屠树滋，黄斌学，等．药物分析杂志 ，１９９３，１３（１）∶３５张艺，孟宪丽，石磊．中草药，１９９３，２４（４）∶１７９６ 王书俊，崔智奇，李翰章．中成药，１９９５，１７（６）∶１１７王晓燕．中成药，１９９５， １７（２）∶１９８关大卫．药物分析杂志，１９９４，１４（３０∶３６９王兰霞，白亚明，张 伯崇，等．中成药，１９９４，１６（３）∶１３１０王玉珏，孟宪纾，陈骐．沈阳药学院学报， １９９３，１０（２）∶１２９１１任世木，黄新生．中成药，１９９６，１８（４）∶１４１２ 仲昭庆，王清华，杨瑞琪．中草药，１９９６，２７（４）∶２１５１３赵志春，俞惠琴，陆克平 ，等．中国中药杂志，１９９１，１６（１２）∶７２９１４梁宏唏，于如嘏，杨清华，等．中成 药，１９９０，１２（１０）∶１３１５朱秀华．中成药，１９９１，１３（６）∶１４１６黄新 生．中成药，１９９４，１６（６）∶１６１７童平．中成药，１９９０，２１（１１）∶１６１ ８成永武，薛杉春，冯中平，等．中成药，１９９４，１６（９）∶５１１９王京霞，许家鸾．现 代应用药学，１９９６，１３（３）∶５３，孟宪纾，陈骐．沈阳药学院学报，１９９３，１０（ ２）∶１２９１１任世木，黄新生．中成药，１９９６，１８（４）∶１４１２仲昭庆，王清华， 杨瑞琪．中草药，１９９６，２７（４）∶２１５１３赵志春，俞惠琴，陆克平，等．中国中药杂 志，１９９１，１６（１２）∶７２９１４梁宏唏，于如嘏，杨清华，等．中成药，１９９０，１ ２（１０）∶１３１５朱秀华．中成药，１９９１，１３（６）∶１４１６黄新生．中成药，１９ ９４，１６（６）∶１６１７童平．中成药，１９９０，２１（１１）∶１６１８成永武，薛杉春 ，冯中平，等．中成药，１９９４，１６（９）∶５１１９王京霞，许家鸾．现代应用药学，１９ ９６，１３（３）∶５３反相高效液相色谱在中药制剂质量控制中的应用@杨军$江苏省中医院１ 安登魁，张正行，盛龙生．药物分析．济南：济南出版社，１９９２∶４３９２张仁斌，徐修容， 杨一鸣，等．ＨＰＬＣ在医药研究中的应用．上海：上海科技出版社，１９８３∶２２５３王俊德 ，商振华．色谱，１９８７，５（２）∶８６４倪坤仪，屠树滋，黄斌学，等．药物分析杂志，１ ９９３，１３（１）∶３５张艺，孟宪丽，石磊．中草药，１９９３，２４（４）∶１７９６王书 俊，崔智奇，李翰章．中成药，１９９５，１７（６）∶１１７王晓燕．中成药，１９９５，１７ （２）∶１９８关大卫．药物分析杂志，１９９４，１４（３０∶３６９王兰霞，白亚明，张伯崇 ，等．中成药，１９９４，１６（３）∶１３１０王玉珏，孟宪纾，陈骐．沈阳药学院学报，１９ ９３，１０（２）∶１２９１１任世木，黄新生．中成药，１９９６，１８（４）∶１４１２仲昭 庆，王清华，杨瑞琪．中草药，１９９６，２７（４）∶２１５１３赵志春，俞惠琴，陆克平，等 ．中国中药杂志，１９９１，１６（１２）∶７２９１４梁宏唏，于如嘏，杨清华，等．中成药， １９９０，１２（１０）∶１３１５朱秀华．中成药，１９９１，１３（６）∶１４１６黄新生．中成药，１９９４，１６（６）∶１６１７童平．中成药，１９９０，２１（１１）∶１６１８成永武，薛杉春，冯中平，等．中成药，１９９４，１６（９）∶５１１９王京霞，许家鸾．现代应用药学，１９９６，１３（３）∶５３
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