肝细胞提取物组分Ｓ４对肿瘤细胞体外增殖的影响李茹冰孔祥平邹清雁杨联萍曾平鲁张宜俊余宙耀 李灼亮ＥｆｅｃｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒａｃｔｉｏｎＳ４ｏｎｐ ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓｉｎｖｉｔｒｏＬＩＲｕＢｉｎ ｇ，ＫＯＮＧＸｉａｎｇＰｉｎｇ，ＺＯＵＱｉｎｇＹａｎ，ＹＡＮＧＬｉａｎｇＰｉｎｇ ，ＺＥＮＧＰｉｎｇＬｕ，ＺＨＡＮＧＹｉＪｕｎ，ＹＵＺｈｏｕＹａｏａｎｄＬＩＺｈｕ ｏＬｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＰＬＡＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅＣｅｎｔｒｅ，Ｇｕ ａｎｇｚｈｏｕＡｉｒＦｏｒｃｅ４５８Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６０２， ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｌｉｖｅｒ ｎｅｏｐｌａｓｍ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ／ｐａｔｈｏｌｏｇｙ；ｌｉｖｅｒ／ｃｙｔｏｌｏｇ ｙ；ｔｕｍｏｒｃｅｌ，ｃｕｌｔｕｒｅｄ；ｌｉｖｅｒｅｘｔｒａｃｔｓ／ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｏｇｙ；ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃａｇｅｎｔｓＡｂｓｔｒａｃｔＡＩＭＴｏｓｔｕｄｙｔ ｈｅｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｅｘｔｒａｃｔｉ ｏｎｆｒａｃｔｉｏｎＳ４ｏｎ８ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓｉｎｖｉｔｒｏ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｔｈｅ１ｍｇ／Ｌ－１０ｍｇ／ＬＳ４ｏｎｔｈｅｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎ ｅｓｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｕｓｉｎｇＭＴＴｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙｉ ｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅｒｉｏｄｓ（０－１２，２４，４８ｏｒ７２ｈ）．ＲＥＳＵＬＴＳＴ ｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＩＣ５０ｍｇ／Ｌ）ｅｆｅｃｔｓｏｆ Ｓ４ｏｎ７４０２，７７２１，７７０３ａｎｄＨｅｐｅｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｓｉｎ７２ｈｗ ｅｒｅ３９，４２，９５ａｎｄ６５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉ ｔｏｒｙ（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＩＣ５０ｍｇ／Ｌ）ｅｆｆｅｃｔｓ（ＩＣ５０）ｏｎＳ ＧＣ７９０１，ＨＣＴ８ａｎｄＧＬＣ８２ｗｅｒｅ１４３，９９ａｎｄ５４．Ｓ４ ｈａｄｎｏａｐｐａｒｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｎＣＮＥ２ｉｎ４８ｈ．ＣＯ ＮＣＬＵＳＩＯＮＳ４ｉｎｈｉｂｉｔｓ７ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉ ｏｎｉｎａｃｌｅａｒｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．主题词肝提 取物／药理学；肿瘤细胞，培养的／药物作用；肝肿瘤，实验性／病理学；肝／细胞学；抗肿瘤药 中国图书资料分类号Ｒ９７９１摘要目的观察肝细胞提取物组分Ｓ４对８株肿瘤细胞增殖的影响 ．方法采用ＭＴＴ比色法研究不同浓度Ｓ４对８株肿瘤细胞不同时相增殖的影响．结果Ｓ４对７４ ０２，７７２１，７７０３，Ｈｅｐｅ肝癌细胞作用７２ｈ后ＩＣ５０（ｍｇ／Ｌ）分别为３９ ，４２，９５和６５．对胃腺癌细胞（ＳＧＣ７９０１）、回盲部腺癌细胞（ＨＣＴ８ ）、肺腺癌细胞（ＧＬＣ８２）作用７２ｈ的ＩＣ５０分别为１４３，９９和５４．对鼻 咽癌细胞（ＣＮＥ２）４８ｈ未显示抑制作用．结论Ｓ４抑制７株肿瘤细胞呈现明显的量效与时 效关系，在１ｍｇ／Ｌ～１０ｍｇ／Ｌ浓度范围内及２４ｈ～７２ｈ时限内，抑制作用随剂量增加 、时间延长而增强．０引言以往研究证明［１］，从肝细胞提取物中分离纯化的单一组分活性物质 Ｓ４，抑制ＢＥＬ７４０２肝癌细胞增殖活性大于肝细胞提取物１００倍，诱导ＢＥＬ７４０ ２细胞凋亡有良好的量效关系．Ｓ４对不同来源的肝癌细胞是否有相似的作用，是否抑制非肝癌系 肿瘤细胞生长，一直是我们关注的问题．我们观察了Ｓ４对４株肝癌细胞和４株非肝癌肿瘤细胞增 殖的影响，进一步观察其时相和量效规律．１材料和方法１．１材料①肝细胞提取肽纯化组分Ｓ４ 的制备参见文献［１］．②细胞系及培养条件：ＢＥＬ７４０２肝癌细胞引自中日友好医院中西 医结合研究所；ＳＭＭＣ７７２１，ＱＧＹ７７０３肝癌细胞系和ＨＣＴ８回盲部腺癌及Ｇ ＬＣ８２肺腺癌细胞系购自中国科学院细胞所；ＣＮＥ２鼻咽癌细胞系由中山医科大学肿瘤研 究所惠赠；ＳＧＣ７９０１胃腺癌细胞由第四军医大学生化教研室惠赠；Ｈｅｐｅ小鼠肝癌细胞 由中山医科大学实验动物中心惠赠．实验时，８种细胞株均接种于ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中，培 养液含１００ｍｌ／Ｌ小牛血清，青、链霉素各１００ｍｇ／Ｌ，在３７℃，５０ｍｇ／ＬＣＯ２ 的培养箱内培养并传代，传代用２５ｇ／Ｌ胰蛋白酶加０２ｇ／ＬＥＤＴＡ消化液消化．③溴 化噻唑蓝四氮唑（ＭＴＴ）、二甲亚砜（ＤＭＳＯ）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液均为Ｓｉｇｍａ产 品，小牛血清购自杭州四季青研究所．１．２方法肝细胞提取肽Ｓ４组分对肿瘤细胞增殖影响的测 定，采用ＭＴＴ法．取对数生长期细胞稀释成（２５～５０）×１０７细胞／Ｌ，接种９６孔 培养板，０１ｍｌ／孔．对照组加等体积培养液，置３７℃，５０ｍｌ／ＬＣＯ２，培养箱培养 ２４ｈ，以使其恢复正常状态．置４℃，１ｈ后立即恢复３７℃，换液后加入不同浓度（１，５， １０ｍｇ／Ｌ）Ｓ４０１ｍｌ／孔，每浓度平均５孔．分别于１２，２４，４８，７２ｈ取出， 弃上清，每孔加入０１５ｇ／ＬＭＴＴ０１ｍｌ，于３７℃继续孵育４ｈ～６ｈ，弃上清，每 孔加入ＤＭＳＯ０１ｍｌ以溶解ＭＴＴ甲月替沉淀，振荡１５ｍｉｎ后在９６０酶标仪上测定 ５７０ｎｍ处Ａ（ＯＤ）值（参考波长６３０ｎｍ）．统计学处理数据以ｘ±ｓ表示，统计学处理 按ｔ检验进行．２结果Ｓ４对８种肿瘤细胞不同时间增殖的影响结果见表１．根据实验结果，为便 于比较，我们选定作用时间为４８ｈ．不同浓度Ｓ４对８种肿瘤细胞作用后结果见表２及图１．图 １不同剂量Ｓ４（４８ｈ）对８种肿瘤细胞的影响．表１Ｓ４作用不同时间对８种肿瘤细胞增殖的 影响细胞ＩＣ５０（ｍｇ／Ｌ）１２ｈ２４ｈ４８ｈ７２ｈＢＥＬ７４０２－８２５０３ ９ＳＭＭＣ７７２１－－８４４２ＱＧＹ７７０３－－２４２９５Ｈｅｐｅ－１５ ２８９６５ＳＧＣ７９０１－３０２１９７１４３ＧＬＣ８２－１２４９９ ５４ＣＮＥ２－－－８９ＨＣＴ８－－－９９ＩＣ５０为半数抑制浓度．表２不同剂 量Ｓ４（４８ｈ）对８种肿瘤细胞的抑制作用（ｎ＝５，ｘ±ｓ）细胞Ｓ４（ｕｇ／ｍｌ）Ａ抑制 率ＳＭＭＣ７７２１００２１４±０００９１０１８２±０００７２５０ｂ５０１ ４６±０００８３２０ｂ１０００８６±０００６６００ｂＢＥＬ７４０２００２ ４０±００３１１０２２９±００３０４６５０１１５±００２４５２１ｂ１００ ０７８±００２３６７５ｂＱＧＹ７７０３００２２０±０００７１０１８５±０ ０２０１６０ｂ５０１６８±００１４２４０ｂ１００１２０±００２１４５５ ｂＨｅｐｅ００１７４±０００２１０１４２±０００３１８４ｂ５０１０５±０ ００４３９７ｂ１０００８２±０００４５２９ｂＳＧＣ７９０１００２１１±０ ０１８１０２０２±００１１４３５０１６０±０００３２４２ｂ１００１２２± ００１２４２２ｂＣＮＥ２００３９７±００３８１０３８９±００４８２０５ ０３８７±００３９２５１００３７２±００４８６３ＨＣＴ８００５０６±０ ０３３１０５０１±００３３１０５０４５７±００３０１００ｂ１００４１１ ±００２４１９０ｂＧＬＣ８２００１９６±０００２１０１５６±０００６２０ ４ｂ５０１２３±００１３７２ｂ１０００９３±００１７５２６ｂｂＰ＜００ １ｖｓＺｅｒｏｇｒｏｕｐ抑制率（％）＝１００％－（实验组Ａ／对照组Ａ×１００％）．３讨 论细胞的增殖、分化及凋亡是受基因的表达与关闭调控的．目前的研究表明，细胞凋亡受阻是人体 恶性肿瘤发生的重要因素之一．在以前的工作中我们证实，在肝提取物中存在抑制某些肿瘤细胞增 殖的物质，并可诱导细胞凋亡［２，３］．这一物质与促进受损肝脏及单层培养肝细胞ＤＮＡ合成 的物质生物学行为不同，其纯化组分可以诱导ＢＥＬ７４０２肝癌细胞凋亡［４］．本结果表明 ，Ｓ４对肿瘤细胞具有较强的抑制增殖作用，并呈现较好的时效与量效关系．Ｓ４与７４０２，７ ７２１，７７０３人肝癌细胞及小鼠Ｈｅｐｅ肝癌细胞作用７２ｈＩＣ５０分别为３９，４２ ，９５和６５；对ＳＧＣ７９０１，ＨＣＴ８，ＧＬＣ８２作用７２ｈ，ＩＣ５０分别 为１４３，９９和５４；对ＣＮＥ２作用４８ｈ未显示抑制作用．这一结果显示了Ｓ４对 肝癌细胞有较强抑制特异性．这一抑制作用，在Ｓ４以１ｍｇ／Ｌ～１０ｍｇ／Ｌ浓度范围内，２ ４ｈ～７２ｈ时限内，随浓度、时间增加而得到加强．在另一项研究中，我们亦证实，Ｓ４抑制肿 瘤细胞增殖是通过诱导细胞凋亡实现的，而这种诱导作用与调节ｐ５３，Ｆａｓ，Ｂｃｌ２及ｃ ｍｙｃ基因的表达有密切关系．其中Ｂｃｌ２基因的表达与否与强弱是十分重要的Ｓ４作为一 种天然提取、纯化的肝提取肽，有较强的诱导肿瘤细胞凋亡作用，并对肝细胞源的肿瘤细胞具有一 定特异性，已具备天然提取物抑癌药物的基本标准，具有重要的研究与开发价值．进一步探讨Ｓ４ 抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡及调节基因表达的信号转导则有利于阐明细胞因子在肿瘤生物学治疗中的实际意义．４参考文献１孔祥平，邹清雁，杨联萍，尤玉琴，余宙耀，张宜俊ｅｔａｌ．肝细胞提取物对肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）凋亡相关基因表达的影响．中国病理生理杂志，１９９７；１３（６）：５７０－５７３２简志翰，ＫｒｅｎＬｉ，ＳｔｅｐｈｅｎＫＷＨＯ，Ｐ．Ｊ．
More abstracts about the 肝细胞提取物组分S4对肿瘤细胞体外增殖的影响