疏肝理脾片抗大鼠免疫性肝纤维化研究＊国家科委“八五”攻关项目（８５９１９０４０２）部分内 容孙克伟刘伟士谌宁生王伟华刘明德（湖南中医学院第一附属医院长沙４１０００７）摘要用牛血 清白蛋白（ＢＳＡ）造成大鼠免疫损伤性肝纤维化模型，观察疏肝理脾片对肝纤维组织增生程度、 肝羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量和血清透明质酸（ＨＡ）及肝功能的影响。结果表明疏肝理脾片能明显 降低肝Ｈｙｐ含量，减轻肝纤维组织增生程度，并较好地提高血清白蛋白水平。关键词肝纤维化疏 肝理脾片ＳｔｕｄｙｏｆＳｈｕｇａｎＬｉｐｉＴａｂｌｅｔｏｎＡｎｔｉ┐ｈｅｐａｔｉｃＦｉ ｂｒｏｓｉｓＩｎｄｕｃｅｄｂｙＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍＡｌｂｕｍｉｎｉｎＲａｔＳｕｎＫｅ ｗｅｉ，ＬｉｕＷｅｉｓｈｉ，ＣｈｅｎＮｉｎｓｈｅｎｇ，ＷａｎｇＷｅｉｈｕａ，ＬｉｕＭｉ ｎｇｄｅ（ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｕｎａｎＣｏｌｅｇｅ ｏｆＴＣＭ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，４１０００７）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆａｎｔｉ－ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｏｆＳｈｕｇ ａｎＬｉｐｉｔａｂｌｅｔ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｍｍｕｎｏ－ｉｎｊｕｒｅｄｆｉｂｒｏｓｉｓｗ ａｓｉｎｄｕｃｅｄｉｎｒａｔｓｂｙｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ．Ｔｈｅｃｏｎｔ ｅｎｔｓｏｆｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ（Ｈｙｐ）ｉｎｌｉｖｅｒａｎｄｓｅｒｕｍｈｙａ ｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ（ＨＡ）ａｎｄｏｔｈｅｒｌｉｖｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎｗｅｒｅｍｏｎ ｉｔｏｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅＨｙｐｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｄｅｇｒｅｅｏｆｈｅｐａ ｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎＳｈｕｇａｎＬｉｐｉｔａｂｌｅｔ－ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅｒｅｍａｒｋａｂｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔ ｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｌｅｖｅｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ，Ｓｈｕｇａｎ Ｌｉｐｉｔａｂｌｅｔ疏肝理脾片是已故的湖南省名老中医谭日强教授治疗慢性肝炎、肝硬化的有 效验方。１９９４年５月已获新药证书。在其Ⅱ期临床试验中，发现其有较好的防治肝炎慢性化的 作用［１］。本文旨在研究疏肝理脾片抗肝纤维化的作用，从而为临床运用及深入研究提供基础。 １材料与方法１．１试剂与药品牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、电泳纯，德国产品，上海市浦江应用生 物化学研究所分装。疏肝理脾片由本院药剂科提供。大黄虫丸，北京中药五厂产品。秋水仙碱为 Ｓｅｒｖａ分装，研究级，上海化学试剂采购供应站提供。１．２动物及造模方法Ｗｉｓｔａｒ大 鼠，清洁级，雌雄各半，体重１８２±３６ｇ，由本院动物房提供。造模方法采用朱启贵方法［２ ］。尾静脉攻击ＢＳＡ量由每只动物每次２ｍｇ／０．５ｍｌ逐渐递增至４．０ｍｇ／０．５ｍｌ ，每周２次，共１５次。１．３分组及给药大鼠按体重分层随机分为７组：正常组，阳性对照组， 疏肝理脾片大、中、小剂量组，大黄虫丸组，秋水仙碱组。大鼠用药量参照人用量按体表面积折 算。在尾静脉攻击的同时分别以生理盐水２ｍｌ／只（正常组和阳性对照组），疏肝理脾片３．２ ４ｇ／ｋｇ、１．６２ｇ／ｋｇ、０．８１ｇ／ｋｇ（分别相当于人一日用量的４、２、等倍量） ，大黄虫丸１．０８ｇ／ｋｇ（相当于人用量的２倍），秋水仙碱０．１ｍｇ／ｋｇ体重（相当 于人１日用量）灌胃，末次攻击后１周，断头处死大鼠，取血及肝组织备检。用药时间为２个月（ 相当于临床１疗程）。１．４检测指标及方法血清ＡＬＴ：赖氏法；血清白蛋白（ＡＬｂ）：溴甲 酚绿法；球蛋白（Ｇ）：双缩脲法，Ｂａｃｋｍａｎ－７０００全自动生化仪检测；透明质酸（Ｈ Ａ）：ＲＩＡ法，上海海研医学研究所产品；肝组织羟脯氨酸（Ｈｙｐ）：采用郑少雄方法［３］ 。肝组织取右叶，１０％甲醛固定，石蜡包埋，ＨＥ及Ｍａｓｓｏｎ染色。肝纤维化分级参照文献 分为４级［４］：“－”汇管区无明显纤维组织；“＋”汇管区有较多的纤维组织，局限性；“＋ ＋”汇管区有大量纤维组织增生，呈窄带状，并向肝小叶周围伸展；“＋＋＋”汇管区有大量纤维 组织增生，呈宽带状，并伸展包绕肝小叶，且可见中央静脉偏位。１．５统计学处理Ｒｉｄｄｉｔ 分析和Ｆ分析。２结果２．１对大鼠肝组织病理学的影响模型组肝细胞广泛变性，表现为浊肿、水 样及脂肪样变；坏死以小灶性坏死为主；肝纤维化形成率为１００％。各用药组肝细胞变性和坏死 均较模型组轻，肝纤维化程度有所下降。其中以疏肝理脾片大、中剂量组疗效最好，肝纤维化形成 率大、中剂量分别为５４．５％和８３．３％，与模型组比较，差异有显著性意义。结果见表１。 表１各组大鼠肝脏纤维化情况比较组别动物数肝纤维化程度－＋＋＋＋＋＋正常组１０１００００ 模型组１４０１５８疏片小组１３１３４５疏片中组１２２＊５４１疏片大组１１５＊２１３大黄 虫丸组１１３１３４秋水仙碱组１３１３６３与模型组比较＊Ｐ＜０．０５表２各组血清ＨＡ、 肝组织Ｈｙｐ含量比较ｎＨＡ（ｎｇ／Ｌ）肝Ｈｙｐ（ｍｇ／ｇ肝干粉）正常组１０２７６．８± ９２．４１６．９±３．７模型组１３８０７．８±３６６．７３９．４±６．９疏片小组１２２ ４５．１±８１．３＊３０．６±９．６＊疏片中组１０２８２．２±７６．８＊３０．０±９． ０＊疏片大组１０２６４．８±３７．８＊２８．３±７．３＊大黄虫丸组１１２３９．７±４ ６．７＊３２．３±１０．３秋水仙碱组１２２４９．１±６２．７＊３５．３±８．６与模型组 比较＊Ｐ＜０．０５２．２对大鼠血清ＨＡ及肝组织Ｈｙｐ的影响模型组血清ＨＡ、肝组织Ｈｙｐ 均较正常组高。各用药组血清ＨＡ与模型组比较，均有明显下降。但各组间无明显差异。肝组织Ｈ ｙｐ含量变化以疏肝理脾片组为最好，与模型组比较均有明显下降。结果见表２。２．３对大鼠肝 功能的影响模型组血清ＡＬＴ明显升高，ＡＬｂ明显降低。各用药组ＡＬＴ明显下降，与模型组比 较，差异显著。但升高血清白蛋白、降低球蛋白以疏肝理脾片中剂量为最好，其他各组与模型组比 较，差异无显著性。结果见表３。表３各组血清ＡＬＴ、ＡＬｂ、Ｇ的比较（ｘ±ｓ）组别ｎＡＬ Ｔ（Ｕ／Ｌ）ＡＬｂ（ｇ／Ｌ）Ｇ（ｇ／Ｌ）正常组１０５３．８±１６．４４２．８±４．３３ １．６±１０．４模型组１１８８．０±１７．７＃３０．９±４．７＃３６．８±４．１疏片小 组１１６１．６±１０．６＊３４．９±５．２３７．３±９．０疏片中组１０５０．７±１４． ２＊３６．１±３．５＊３０．７±７．５＊疏片大组１０５１．６±８．２＊３４．９±５．４ ３３．６±５．３大黄虫丸组１１５１．８±１２．３＊３２．２±２．７３５．１±８．７秋 水仙碱组１２４８．９±８．５＊３２．２±２．９３５．３±４．４与模型组比较＊Ｐ＜０．０ ５；与正常组比较＃Ｐ＜０．０５３讨论慢性肝炎的主要证型和基本病机是肝郁脾虚，瘀血阻络［ ５］。因此，疏肝健脾，活血化瘀是慢性肝病肝纤维化的重要治则。疏肝理脾片由柴胡、茯苓、白 芍、茜草、白茅根、地龙、湘曲、砂仁、鳖甲组成，具有疏肝健脾、活血通络的功能。疏肝而不燥 ，活血而不峻，适合慢性肝病肝纤维化的基本病机。前期研究表明，疏肝理脾片有较好的护肝降酶 和提高血清白蛋白的作用［６］。本研究选用牛血清白蛋白致大鼠肝纤维化模型，模型组纤维化形 成率达１００％，出现低白蛋白和球蛋白升高及有免疫机理参与的特点，自然恢复慢，符合肝纤维 化、肝硬化的变化。适用于人的肝纤维化研究［７］。运用疏肝理脾片治疗后，肝组织纤维化程度 明显减轻，肝胶原蛋白含量明显减少，疗效优于大黄虫丸和秋水仙碱。同时疏肝理脾片能明显降 低血清ＨＡ和ＡＬＴ含量，中剂量组明显提高血清白蛋白，表现了较好的护肝作用。提示运用疏肝 健脾活血法治疗肝硬化的综合效果优于单纯活血法。应对该方抗肝纤维化的作用作深入的研究。参 考文献１刘伟士，谌宁生，孙克伟．疏肝理脾片治疗慢性乙型肝炎的Ⅱ期临床试验总结．湖南中医 学院学报，１９９３，２：５１２朱启贵，方步武，竺稽能，等．牛血清白蛋白致免疫性肝纤维化 动物模型研究．中西医结合肝病杂志，１９９２，２（１）：２０３郑少雄．血尿羟脯氨酸测定方 法的改进．中华医学检验杂志，１９８８，６：１３３４蔡为民，刘荣华，林瑞炮，等．慢性肝病 患者血清腺苷脱氢酶、甘胆酸和β２－微球蛋白的变化及其意义．中华消化杂志，１９９０，１０ （２）：８１５唐智敏，茹清静，张振鄂，等．肝血瘀阻与肝纤维化关系的临床研究．中国中西医 结合杂志，１９９７，１７（２）：８１６田文艺，兰芳，田育望，等．疏肝理脾片的药理及毒性 研究．湖南中医学院学报，１９９１，２：３０７ＳｕｎＭｉａｏ，ＷａｎｇＢａｏ－ｅｎ，Ｇｉ ｏｒｇｉｏＡｅｔａｌ．ＴｗｏＲａｔＭｏｄｅｌｓｏｆＨｅｐａｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓ．Ｈｅ ｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９０，６３：４６７疏肝理脾片抗大鼠免疫性肝纤维化研究@孙克伟,刘 伟士,谌宁生,王伟华,刘明德$湖南中医学院第一附属医院肝纤维化,疏肝理脾片用牛血清白蛋 白（ＢＳＡ）造成大鼠免疫损伤性肝纤维化模型，观察疏肝理脾片对肝纤维组织增生程度、肝羟脯 氨酸（Ｈｙｐ）含量和血清透明质酸（ＨＡ）及肝功能的影响。结果表明疏肝理脾片能明显降低肝 Ｈｙｐ含量，减轻肝纤维组织增生程度，并较好地提高血清白蛋白水平１刘伟士，谌宁生，孙克伟 ．疏肝理脾片治疗慢性乙型肝炎的Ⅱ期临床试验总结．湖南中医学院学报，１９９３，２：５１２朱启贵，方步武，竺稽能，等．牛血清白蛋白致免疫性肝纤维化动物模型研究．中西医结合肝病杂志，１９９２，２（１）：２０３郑少雄．血尿羟脯氨酸测定方法的改进．中华医学检验杂志，１９８８，６：１３３４蔡为民，刘荣华，林瑞炮，等．慢性肝病患者血清腺苷脱氢酶、甘胆酸和β
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