地黄止血冲剂抗大鼠免疫性血小板减少的作用研究蒋文明陈大舜１邓常青陈孟君２鲁耀邦（湖南中医 学院长沙４１０００７）摘要目的研究中药复方对免疫性血小板减少的作用。方法采用注射兔抗大 鼠血小板血清（ＡＰＳ）建立了大鼠免疫性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）模型。运用地黄止血冲剂 ，与西药强的松对大鼠实验性ＩＴＰ的防治效果进行了观察。结果地黄止血冲剂和强的松均可对抗 免疫反应引起的血小板下降（Ｐ＜０．０１），并促进停止注ＡＰＳ后血小板的恢复（Ｐ＜０．０ ５）。且骨髓巨核细胞增生活跃，但对外周血红细胞和白细胞无破坏作用。关键词地黄止血冲剂免 疫性血小板减少大鼠血小板中药地黄止血冲剂是根据清代名医叶天士凉血散血止血的原理制药，以 凉血止血、活血化瘀为主要作用，是治疗免疫性血小板减少性紫癜的有效方之一［１］。为了进一 步明确本方的药效作用，我们在建立ＩＴＰ的实验动物病理模型的基础上，观察了本方对ＩＴＰ动 物的实验性治疗作用。现报告如下：材料与方法１药物地黄止血冲剂由水牛角、生地、茯苓、丹皮 、白芍等组成。由本院自制生产成混悬型颗粒冲剂，每包含量５克。临用时加蒸馏水适量，煎煮２ 次，每次３０分钟，过滤浓缩成１克生药／毫升、０．５克生药／毫升、０．２５克生药／毫升３ 种不浓度药液备用。对照药强的松以蒸馏水配成０．５ｍｇ／ｍｌ悬液。２动物ＳＤ系大鼠６０只 ，体重１８０～３５０克，全部雄性，由湖南中医学院动物实验中心提供。３模型制作采用注射兔 抗大鼠血小板血清（ＡＰＳ）方法，建立了大鼠免疫性血小板减少模型［２］。大鼠腹腔注射１４ 稀释的ＡＰＳ（０．７ｍｌ／２００ｇ体重），连续３ｄ，可使血小板数量显著降低，其降低率为 ８１±９％，且其骨髓巨核细胞增生活跃，但注射ＡＰＳ后对血中红细胞数和白细胞数无明显影响 。４实验方法４．１分组ＳＤ大鼠随机分为５组，即地黄止血冲剂大（Ａ）、中（Ｂ）、小（Ｃ） ３个剂量组，强的松对照组（Ｄ）和模型组（Ｅ）。每组动物数１２只，先于实验前尾静脉取血测 血小板、白细胞和红细胞计数。然后Ａ组灌胃地黄止血冲剂２ｇ／２００ｇ，Ｂ组灌胃１ｇ／２０ ０ｇ，Ｃ组灌胃０．５ｇ／２００克；Ｄ组灌胃强的松悬液１ｍｇ／２００ｇ，Ｅ组灌胃等量蒸馏 水。每天１次，连续５天后同上测定。然后每组注射１４稀释的兔抗大鼠血小板血清（ＡＰＳ）０ ．７ｍｌ（ｉｐ），连续注射３天，并同时给药３天，于次日同上测定。再停止注射ＡＰＳ，同时 继续给药４天，分别于停ＡＰＳ后２天和４天取血同上测定。此外，在注射ＡＰＳ后３天和停止注 射ＡＰＳ后４天，各组分别随机杀死半数大鼠作骨髓检查。４．２观察指标①皮肤粘膜出血情况； ②血小板计数；③红细胞计数；④白细胞计数；⑤骨髓巨核细胞形态检查。４．３统计分析以方差 分析和ｑ检验、秩和检验及ｔ检验和ｔ＇检验分析。结果１对皮肤粘膜的影响注ＡＰＳ３天后将各 组处死的６只大鼠解剖发现，每组大鼠均可见到背部、腹部及大腿有不同程度的出血点和瘀斑，其 中以生理盐水组大鼠皮下出血点和瘀斑最多，而中药大剂量组和强的松组皮下出血情况最轻，每组 剩余６只动物在停注抗体４天后处死解剖发现，各组动物无皮下出血等异常情况，这可能是随着抗 体在体内的消失，血小板逐渐恢复，制止了出血的缘故。２对血小板的影响２．１对注射ＡＰＳ血 小板下降的影响（见表１）各组在单纯给药５天后，与实验前比较，血小板计数均无明显变化（Ｐ ＞０．０５），这表明中药和强的松对正常大鼠的血小板数均无明显影响。注抗体３天后，各组血 小板计数均明显低于给药前和注ＡＰＳ前（均为Ｐ＞０．０１）。以血小板下降率［下降率＝（注 ＡＰＳ前的血小板数－注ＡＰＳ后的血小板数）／注ＡＰＳ前的血小板数×１００％］进行比较发 现：大剂量组（Ａ）和强的松组（Ｄ）的血小板下降率均明显低于模型组（Ｅ）（Ｐ＜０．０１和 Ｐ＜０．０５）；且Ａ组下降率明显低于中剂量组（Ｂ）（Ｐ＜０．０１）、小剂量组（Ｃ）（Ｐ ＜０．０５）和强的松组（Ｄ）（Ｐ＜０．０５）。表明大剂量组和强的松组均可对抗ＡＰＳ引起 的血小板下降，并且大剂量组的对抗作用强于强的松组。２．２对停止注射后血小板恢复的影响（ 见表２）表１给药前后及注ＡＰＳ的ｐｔ比较（×１０９／Ｌ）（ｘ±ｓ）组别ｎ给药前给药５天 后注ＡＰＳ３天后（下降率％）Ａ１２４０８７．７±２３２．５３９４．８±９７．３１５４． ３±２７．６△△＊＊（５９±１４）Ｂ１２４０６．８±２１６．７４８４．８±１１２．０１ １４．３±２９．７△△＊＊（７６±７）Ｃ１２４０４．６±２３１．８４１９．７±７１．３ １０６．５±３７．５△△＊＊（７３±１２）Ｄ１２３９９．０±２０２．５４５１．３±１０ ６．８１２７．７±４４．７△△＊＊（７１±９）Ｅ１２３９８．９±１８７．２４６９．４± １６３．９７９．３±２９．７△△＊＊（８１±９）注：△△与给药前比较：Ｐ＜０．０１；＊ ＊与给药５天后比较：Ｐ＜０．０１；ＡＥ：Ｐ＜０．０１；ＡＤ：Ｐ＜０．０５；ＡＣ：Ｐ＜０ ．０５；ＡＢ：Ｐ＞０．０１；ＤＥ：Ｐ＜０．０５。表２注ＡＰＳ前后血小板数的比较（×１０ ９／Ｌ）（ｘ±ｓ）组别ｎ注ＡＰＳ前注ＡＰＳ３天后停ＡＰＳ２天后（上升率％）停ＡＰＳ４天 后（上升率％）Ａ６３８４．０±１５２．０１５１．０±３３．６△△３７３．８±９８．３☆ ☆（１００±８０）４３２．５±５０．１☆☆（１２５±３４）Ｂ６４１６．０±１１６．０１ ２４．５±２７．９△△３０５．８±２９．１☆☆（４９±１９）４５０．８±８４．３☆☆（ ８４±２５）Ｃ６４４９．４±７３．７１０７．２±３８．４△△３０６．７±８３．１☆☆（ ６０±２８）５５１．７±５６．４☆☆（１２９±２２）Ｄ６４９５．４±７３．７１５０．７ ±５０．２△△３６１．７±１０１．１☆☆（６７±１９）６７０．０±１８５．３☆☆（１０ ８±５６）Ｅ６４９０．２±２２１．５８４．５±３８．１△△２５６．７±６８．６☆☆（５ ３±２２）５２３．３±１０４．６☆☆（１２４±２７）注：△和△△与ＡＰＳ前比较：Ｐ＜０ ．０５和Ｐ＜０．０１；☆和☆☆与注ＡＰＳ后比较：Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５；ＡＢ：Ｐ＜ ０．０５，ＡＣ：Ｐ＜０．０５，ＡＥ：Ｐ＜０．０５，ＡＤ：Ｐ＜０．０５；ＤＢ：Ｐ＜０．０ ５。由表２可知，注ＡＰＳ３天后各组ｐｔ数下降（均为Ｐ＜０．０１）。在停止注ＡＰＳ２天和 ４天后，各组血小板数均较注ＡＰＳ３天后上升（均为Ｐ＜０．０１）。以血小板上升率（上升率 ＝上升数／下降数×１００％）进行比较，在停ＡＰＳ２天时，以大剂量组（Ａ）上升最快，上升 率明显高于Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ４组（均为Ｐ＜０．０５），中、小剂量组和强的松组虽有一定程度改 变，但差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。在停ＡＰＳ４天时，Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ４组均上升至正 常或超过正常水平，仅中剂量组上升略为减弱。说明地黄止血冲剂大剂量可促进停止注射ＡＰＳ后 大鼠的血小板恢复，但强的松的促血小板上升作用不显著。３对红细胞的影响（见表３）大鼠红细 胞数除强的松组外，其余各组红细胞数在注ＡＰＳ３天后略有下降，与用药前比较，差异有显著性 意义（Ｐ＜０．０５）；若停注抗体２天和４天后，各组红细胞数之间差别无显著性意义（Ｐ＞０ ．０５），虽然红细胞在注ＡＰＳ过程中受到破坏，但其量仍属正常范围。之所以被部分小量破坏 的原因，可能是在制备兔抗大鼠血清时，吸附不彻底，使被注动物部分红细胞受到轻度破坏所致。 ４对白细胞的影响（见表３）在注ＡＰＳ３天后，Ａ组白细胞较给药前升高（Ｐ＜０．０５），其 余各组虽略有升高，但差异并无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。停注ＡＰＳ后，只有Ｄ组白细胞在 停ＡＰＳ２天和４天后，白细胞较注ＡＰＳ３天后降低（Ｐ＜０．０５），其余各组均无明显改变 。５对大鼠骨髓巨核细胞的影响（见表４）在注ＡＰＳ３天和停注ＡＰＳ４天后，各组大鼠骨髓巨 核细胞数与正常动物巨核细胞数相似，其分类幼稚巨核细胞与颗粒巨核细胞之间已无明显差异（Ｐ ＞０．０５），中药及其各组骨髓巨核细胞呈增生活跃状态。可见，地黄止血冲剂对大鼠骨髓造血 巨核细胞无抑制等副作用。表３对红细胞和白细胞的影响（ｘ±ｓ）Ａ７．２２±０．８５６．８ ７±０．８６５．３４±１．４０６．０２±１．２０６．３８±１．３４（６）（６）（６）（ ６）（６）Ｂ７．４４±０．８９６．９３±０．５０６．５５±０．９０６．１０±１．７７６ ．２２±０．３４（６）（６）（６）（６）（６）ＲＢＣＣ７．６７±０．８２７．１４±０． ９５６．６３±０．６９６．４４±０．７５６．０２±１．１０（６）（６）（６）（６）（６ ）（×１０１２／Ｌ）Ｄ７．４５±０．３８７．３７±０．７６６．２０±１．３２６．９１± ０．７５５．９８±０．３１（６）（６）（６）（６）（６）Ｅ６．８５±０．６４６．６９± ０．７９６．１７±０．６７６．６３±０．８６６．１０±１．２１（６）（６）（６）（６） （６）Ａ２７．６４±７．８２５．１±５．３３５．８±１３．５３５．２±１３．４３７．２ ±２２．８（５）（６）（６）（６）（６）Ｂ３０．０±１１．１３６．４±１５．１３０．９ ±１３．９７４３．３±２１．３２９．７±１２．４（６）（６）（６）（６）（６）ＷＢＣＣ ２３．３±１０２５．５±６．９３１．２±８．９２５．９±１０．１２４．５±７．３（６） （６）（６）（６）（６）（×１０９／Ｌ）Ｄ２９±４．４２８．８±５．４３６．３±９．５ ２９．９±１０＊２４．１±９．８＊（５）（６）（６）（６）（６）Ｅ２９．１±７．７３０．３±７．３３６．２±１８．５２７．８±４．２３３．７±９．９（６）（６）（６）（６）（６表４对骨髓巨核细胞的影响（ｘ±ｓ）要（％）组别注抗体３ｄ后幼巨颗粒巨停抗体４ｄ后幼巨颗粒巨正常１２．１±４．６８３．８±４．６１２．１±４．６８３．８±４．６（７）（７
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