东风菜皂甙生物活性的研究Ⅱ黑龙江中医药大学匡海学肖洪彬张腾张鹏蒋立范摘要对东风菜根部的 总皂甙进行荷瘤小鼠炭粒廓清、Ｔ淋巴细胞及其亚群的免疫研究，结果证明，小鼠按３００ｍｇ／ ｋｇ口服给药，可增加炭粒廓清速率、吞噬活性α值和Ｔ淋巴细胞总数及其亚群的百分率。抑瘤实 验证明，小鼠按１５０、３００、６００ｍｇ／ｋｇ口服给药，对Ｓ１８０和ＨＡＣ实体瘤有明显 的抑制作用，对肝癌腹水型荷瘤小鼠的生命延长率有明显的增加作用。故认为东风菜根总皂甙具有 一定的增加机体免疫功能及抗肿瘤的生物活性。关键词东风菜总皂甙生物活性免疫作用抗肿瘤东风 菜Ａｓｔｅｒｓｃａｂｅｒｔｈｕｎｂ是菊科多年生草本植物。前文我们曾报道从其根部分离出总 皂甙及其单体皂甙Ｓ－Ⅰ、Ｓ－Ⅱ具有明显提高细胞免疫及体液免疫的作用［１］。本文报道东风 菜总皂甙对荷瘤小鼠的免疫作用及抗肿瘤作用的研究结果。１实验材料受试药物：东风菜根总皂甙 由黑龙江中医药大学药学院提供。动物：昆明种小白鼠由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。试 剂与药品：①抗小鼠Ｔｈｙ－１、Ｌ３Ｔ４、Ｌｙｔ２单克隆抗体：北京医科大学免疫教研室提供 。②胎牛血清（Ｆｃｓ）：哈尔滨兽医研究所产品。③氟尿嘧啶注射液：上海普海药厂，批号：９ ２０９０２。④注射用环磷酰胺：上海第十二制药厂，指号：９２０５２０。瘤株：小鼠肉瘤Ｓ１ ８０和小鼠肝癌ＨＡＣ：均由哈尔滨医科大学肿瘤研究所提供。２方法和结果２．１对ＨＡＣ实体 瘤炭粒廓清速率的影响［２］取昆明种雄性小鼠３０只，按常规方法接种ＨＡＣ实体瘤，接种次日 ，随机分为三组，空白对照组、阳性药环磷酰胺组及东风菜根总皂甙组，连续口服给药８ｄ，次日 按０．０５ｍｌ／１０ｇ尾静脉注射１：２用生理盐水稀释的印度墨法，分别于注入墨汁后５ｍｉ ｎ和２０ｍｉｎ从鼠眼眶静脉丛取血０．０２５ｍｌ，放入含有２ｍｌ０．１％碳酸钠溶液试管中 ，在６５０ｎｍ处测定光密度值，最后根据鼠体重、肝重、脾重求出吞噬活性（α），结果见表１ 。表１东风菜根总皂甙对荷瘤小鼠炭粒廓清作用的影响组别动物数剂量（ｍｇ／ｋｇ）α值（Ｘ± ＳＤ）Ｐ值空白对照１０—３．８４８±０．３２１总皂甙１０３００５．０３１±０．３２６＜ ０．０１
环磷酰胺１０２５３．１１５±０．２６４＜０．０１表１表明，东风菜根总皂甙能增加 荷瘤小鼠炭粒廓清速率，使吞噬活性α值明显增加，而环磷酰胺可使α值明显降低。２．２对荷瘤 小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群的影响取昆明种小鼠２０只，雌雄各半，常规接种ＨＡＣ实体瘤。次日随 机分为空白对照组和东风菜根总皂甙组，连续给药８天，每天１次，次日颈椎脱臼处死动物，无菌 取脾剪碎制成脾细胞悬液，并用含５％ＦＣＳ的Ｈａｎｋ’ｓ液调细胞浓度为２×１０６／ｍｌ（ 染色法证明细胞活力在９５％以上）。用Ｈａｎｋ’ｓ液稀释抗小鼠Ｔｈｙ－ｌ、Ｌ３Ｔ４、Ｌｙ ｔ２及豚鼠补体（１：５）。在４０孔板上加４孔５０μｌ２×１０６／ｍｌ细胞悬液。试验组分 别加２０μｌ单克隆抗体、对照组加２０μｌＨａｎｋ’ｓ液。３７℃３０ｍｉｎ孵育取出各孔加 入２０μｌ补体３７℃６０ｍｉｎ孵育。实验结束后，每孔加入１％伊红１５μｌ和０．８％戊二 醛１５’混匀后滴于载玻片上，计数２００个细胞并计算赤染细胞的百分数，结果见表２。表２东 风菜根总皂甙对荷瘤小鼠Ｔ细胞及其亚群的影响（Ｘ±ＳＤ）组别剂量（ｍｇ／ｋｇ）Ｔｈｙ－１ Ｌ３Ｔ４Ｌｙｔ２Ｌ３Ｔ４／ＬｙＴ２空白对照—３５．７６±４．８９２５．１３±３．９８１ ７．３６±３．２４１．４１８±０．１９７总皂甙３００４２．１２±５．８３３３．２５±４ ．４１２２．１４±３．６９１．５７９±０．２０３Ｐ值＜０．０１＜０．０１＜０．０５＞０ ．０５注：空白对照与总皂甙均为１０例。表２表明，总皂甙组Ｔ细胞总数及其亚群百分率均明显 高于空白对照组，且给药组Ｌ３Ｔ４／ＬｙＴ２比值在正常范围之中（正常为１．５～２．５之间 ）。２．３对荷瘤小鼠抑瘤作用的影响［３］实验用荷瘤小鼠均按常规方法接种肿瘤细胞。取传代 ８天，生长良好的乳白色腹水，以１：２无菌生理盐水稀释，肉瘤Ｓ１８０和肝癌ＨＡＣ实体瘤细 胞分别接种于腋下，每只鼠０．２ｍｌ，接种次日，随机分为五组，均为口服给药，每天一次，连 续８天，停药次日，分别将两批动物（肉瘤Ｓ１８０和ＨＡＣ实体瘤）处死。剥取皮下实体瘤瘤块 ，分别称重，计算出瘤重及抑瘤率，结果见表３、表４。表３东风菜根总皂甙对小鼠肉瘤Ｓ１８０ 的抑瘤作用组别例数（只）给药剂量（ｍｇ／ｋｇ）平均瘤重（Ｘ±ＳＤｇ）抑瘤率（％）Ｐ值空 白对照１４—２．１１±０．２１３总皂甙１４１５０１．２４±０．１９９４１．０４＜０．０ １总皂甙１４３０００．９９±０．１９５５２．８４＜０．０１总皂甙１４６０００．９５±０ ．１８８５５．０７＜０．０１环磷酰胺１４２５０．６３±０．１６９７０．３３＜０．０１表 ４东风菜根总皂甙对小鼠肝癌ＨＡＣ的抑瘤作用组别例数（只）给药剂量（ｍｇ／ｋｇ）平均瘤重 （Ｘ±ＳＤｇ）抑瘤率（％）Ｐ值空白对照１４—１．７５±０．１７９总皂甙１４１５０１．１ ３±０．２１５３５．７７＜０．０１总皂甙１４３０００．８３±０．１８２５２．４８＜０． ０１总皂甙１４６０００．６３±０．１７６６４．００＜０．０１环磷酰胺１４２５０．４８± ０．１３２７２．４５＜０．０１表３、表４结果证明，总皂甙各剂量组同空白对照组相比，对Ｓ １８０和ＨＡＣ实体瘤均有明显的抑制作用，抑瘤率均大于３０％。２．４对肝癌腹水型荷瘤小鼠 生命延长率的影响取生长良好的肝癌ＨＡＣ小鼠腹水，以１：２无菌盐水稀释，每只小鼠腹腔接种 ０．２ｍｌ，接种次日，随机分为５组。分组及给药剂量见表５，每天口服给药，连续８天，停药 后，观察各组小鼠存活天数，计算各组的平均生存时间，并求出生命延长率，结果见表５。表５东 风菜根总皂甙对肝癌ＨＡＣ腹水型小鼠生命延长率的影响组别例数（只）给药剂量（ｍｇ／ｋｇ） 平均存活天数（Ｘ±ＳＤ天）延长率（％）Ｐ值空白对照１４—１３．２７±３．６４总皂甙１４ １５０２０．６８±４．２６５５．８４＜０．０１总皂甙１４３００２３．２４±４．９８７５ ．１３＜０．０１总皂甙１４６００２５．３２±３．７８９０．８１＜０．０１氟尿嘧啶１４２ ５１８．９８±４．１３４３．０３＜０．０１表５结果证明，总皂甙三个剂量组生命延长率均大 于５０％，与空白对照组相比均具有明显的差异性（Ｐ＜０．０１）。３小结上述研究证明，东风 菜总皂甙可增加荷瘤小鼠炭粒廓清速率，使吞噬活性α值明显增加，使荷瘤小鼠Ｔ细胞总数及其亚 群百分率明显增加；对Ｓ１８０和ＨＡＣ实体瘤有明显的抑制作用；对肝癌腹水型荷瘤小鼠的生命 延长率有明显增加作用。综合上述结果，可认为东风菜根总皂甙具有一定的增强机体免疫功能及抗 肿瘤的生物活性。４参考文献１肖洪彬，等．中医药学报，１９９７，２５（６）：５７２陶义训 ，等主编．临床免疫学检验，上册．上海科技出版社，１９８３：１２４３徐叔云主编．药理实验 方法学，第一版，人民卫生出版社，１９８２：９４６、１１１６东风菜皂甙生物活性的研究Ⅱ$ 黑龙江中医药大学@匡海学@肖洪彬@张腾@张鹏@蒋立范东风菜,总皂甙,
生物活性,免疫作用 ,抗肿瘤对东风菜根部的总皂甙进行荷瘤小鼠炭粒廓清、Ｔ淋巴细胞及其亚群的免疫研究，结果证 明，小鼠按３００ｍｇ／ｋｇ口服给药，可增加炭粒廓清速率、吞噬活性α值和Ｔ淋巴细胞总数及 其亚群的百分率。抑瘤实验证明，小鼠按１５０、３００、６００ｍｇ／ｋｇ口服给药，对Ｓ１８ ０和ＨＡＣ实体瘤有明显的抑制作用，对肝癌腹水型荷瘤小鼠的生命延长率有明显的增加作用。故 认为东风菜根总皂甙具有一定的增加机体免疫功能及抗肿瘤的生物活性。１肖洪彬，等．中医药学 报，１９９７，２５（６）：５７２陶义训，等主编．临床免疫学检验，上册．上海科技出版社， １９８３：１２４３徐叔云主编．药理实验方法学，第一版，人民卫生出版社，１９８２：９４６ 、１１１６黑龙江省自然科学基金,黑龙江省教育委员会资助组别例数（只）给药剂量（ｍｇ／ｋ ｇ）平均瘤重（Ｘ±ＳＤｇ）抑瘤率（％）Ｐ值空白对照１４—１．７５±０．１７９总皂甙１４ １５０１．１３±０．２１５３５．７７＜０．０１总皂甙１４３０００．８３±０．１８２５２ ．４８＜０．０１总皂甙１４６０００．６３±０．１７６６４．００＜０．０１环磷酰胺１４２ ５０．４８±０．１３２７２．４５＜０．０１表３、表４结果证明，总皂甙各剂量组同空白对照 组相比，对Ｓ１８０和ＨＡＣ实体瘤均有明显的抑制作用，抑瘤率均大于３０％。２．４对肝癌腹 水型荷瘤小鼠生命延长率的影响取生长良好的肝癌ＨＡＣ小鼠腹水，以１：２无菌盐水稀释，每只 小鼠腹腔接种０．２ｍｌ，接种次日，随机分为５组。分组及给药剂量见表５，每天口服给药，连 续８天，停药后，观察各组小鼠存活天数，计算各组的平均生存时间，并求出生命延长率，结果见 表５。表５东风菜根总皂甙对肝癌ＨＡＣ腹水型小鼠生命延长率的影响组别例数（只）给药剂量（ ｍｇ／ｋｇ）平均存活天数（Ｘ±ＳＤ天）延长率（％）Ｐ值空白对照１４—１３．２７±３．６ ４总皂甙１４１５０２０．６８±４．２６５５．８４＜０．０１总皂甙１４３００２３．２４± ４．９８７５．１３＜０．０１总皂甙１４６００２５．３２±３．７８９０．８１＜０．０１氟 尿嘧啶１４２５１８．９８±４．１３４３．０３＜０．０１表５结果证明，总皂甙三个剂量组生 命延长率均大于５０％，与空白对照组相比均具有明显的差异性（Ｐ＜０．０１）。３小结上述研究证明，东风菜总皂甙可增加荷瘤小鼠炭粒廓清速率，使吞噬活性α值明显增加，使荷瘤小鼠Ｔ细胞总数及其亚群百分率明显增加；对Ｓ１８０和ＨＡＣ实体瘤有明显的抑制作用；对肝癌腹水型荷瘤小鼠的生命延长率有明显增加作用。综合上述结果，可认为东风菜根总皂甙具有一定的增强机体
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