补髓生血胶囊对慢性再障患者造血干／祖细胞作用的实验研究黑龙江中医药大学附属第一医院赵新 广王祥麒朱跃岚孙劲晖（１５００４０）指导孙伟正摘要从细胞培养角度对慢性再障（ＣＡＡ）的 疗效机理及中医辨证分型的客观指标进行了深入的探讨，结果显示补髓生血胶囊治疗慢性再障其作 用环节是多方位的。它既能促进再障患者造血干／祖细胞增殖，改善造血微环境，又能修复机体免 疫力。且疗效优于再障生血片。还通过本方治疗慢性再障患者前后血象变化观察，并与已知治疗再 障的药物再障生血片比较，结果提示本方对回升白细胞、血红蛋白方面确实有明显的优势。关键词 慢性再障补髓生血胶囊造血干细胞培养再障素有“不治之症”之称，严重地危害着人类的健康。自 ６０年代以来，我们黑龙江中医药大学附属一院血液科就开展了中医药治疗再障的临床与实验研究 ，集孙伟正教授多年临床经验之精华并结合中医辨证施治精心研制出了补髓生血胶囊Ⅰ、Ⅱ号，应 用到临床不但克服了单纯西药作用途经单一或毒副作用大而收效不佳的缺陷，又打破了治疗再障的 一些中成药的局限性，因而值得临床推广和应用。为进一步弄清本药作用环节、疗效机理，实施本 课题。现报告如下：１材料与方法１．１实验对象本研究实验组和对照组病人诊断均符合１９８７ 年第四届全国再障学术会制定的诊断标准，中医辨证分型参照１９８９年大连中国中西医结合研究 会血液病专业委员会制定的方案标准进行辨证分型。其中实验组３１例，男２０例，女１１例，年 龄在１５～５６岁之间，中位年龄２６．０岁。对照组１７例，男１０例，女７例，年龄在１３～ ５３岁之间，中位年龄２９．０岁。以上患者均为黑龙江中医药大学附一院１９９５年８月～１９ ９６年１０月期间住院患者。随机分为实验组和对照组，采用单盲法给药。实验组又分为肾阳虚和 肾阴虚组，符合肾阳虚型者１３例，服用Ⅱ号方。符合肾阴虚型者１８例，服用Ⅰ号方。对照组１ ７例均使用再障生血片，ⅠⅡ号方是按一定比例研末装入胶囊，每粒含生药１．５ｇ，再障生血片 研粉加入适量淀粉装入与实验组相同的胶囊。以上３方，均１次服１０粒，日服３次，３个月为１ 疗程，２个疗程后判定疗效。１．２治疗方药补髓生血Ⅰ号：生地、红参、黄芪、五味子、山萸肉 、桑椹、枸杞子、鸡血藤、女贞子、仙灵脾、补骨脂、菟丝子等。补髓生血Ⅱ号：仙灵脾、补骨脂 、巴戟天、附子、鹿茸、仙茅、熟地、红参、黄芪、枸杞子、鸡血藤、山药、首乌等。再障生血片 ：吉林省辽原市中药厂生产，吉卫药准字（８４）７３００７７１．３实验方法１．３．１骨髓有 核细胞分离按常规穿刺法吸取骨髓液（正常组来自胸外科手术切除的肋骨，用咬骨钳挤出骨髓液） 悬浮于含肝素的ＭＥＭ培养液中，轻轻吹打，振摇后缓缓加入３ｍｌ淋巴细胞分离液上，１５００ ｒｐｍ离心２０′，取出单核细胞层（ＭＮＣ），采用ＭＥＭ培养液洗涤３次，每次１５００ｒｐ ｍ，离心２０′，计数（外周血单核细胞分离同上）。１．３．２ＢＦｕ－Ｅ、ＣＦｕ－Ｆ、ＣＦ ｕ－Ｔｌ、ＣＦｕ－Ｍｅｇ培养体系及培养方法：ＢＦｕ－Ｅ培养采用Ｇｒｅｇｏｒｙ［１］培养 法加以改良。ＣＦｕ－Ｆ培养采用姜学英［２］方法略加修改。ＣＦｕ－Ｔｌ培养采用戴玉成［３ ］法加以改良。ＣＦｕ－Ｍｅｇ培养采用Ｍｅｓｎｅｒ［４］法加以改良。２结果与分析表１实验 组与对照组疗前、疗后骨髓干／祖细胞集落数分组ＢＦｕ－Ｅ／２×１０５（Ｘ±Ｓ）ＣＦｕ－Ｆ ／２×１０６（Ｘ±Ｓ）ＣＦｕ－Ｔｌ／２×１０５（Ｘ±Ｓ）ＣＦｕ－Ｐｉｅｇ／２×１０５（ Ｘ±Ｓ）
实验组（ｎ＝３１）对照组（ｎ＝１７）正常组（ｎ＝１５）阳虚型（ｎ＝１３）阴虚型 （ｎ＝１８）｛｛疗前疗后疗前疗后疗前疗后１５．７±４．１△△３４．２±９．３□□☆☆ １０．５±６．０△△２８．９±６．８△□□○１６．９±９．２△△２７．８±１１．２△□ □３６．４±９．１５４．３±６．８△７１．６±２０．９□□☆３６．２±７．８△△６６ ．３±１９．２△□○４４．８±１６．６△△６８．４±１９．４△□７２．６±１９．８４８ ．２±９．７△６９．９±６．３□□☆４０．９±１２．３△△６０．７±２．１△□○３９ ．４±９．７△△６２．９±８．２△□７１．８±６．１１９．６±８．７△△２９．６±２０ ．３□□☆１３．２±８．１△△２０．３±１３．２△△□○１６．６±９．３２△△２１． ３±１７．２△△□４１．６±２３．５注：与正常组比较△△Ｐ＜０．０１；△Ｐ＜０．０５； Ｐ＞０．０５组内疗前疗后比较□□Ｐ＜０．０１；□Ｐ＜０．０５实验组与对照组疗后比较☆ ☆Ｐ＜０．０１；☆Ｐ＜０．０５；○Ｐ＞０．０５由表１能够看出，疗前实验组和对照组分别与 正常组比较，其ＢＦｕ－Ｅ、ＣＦｕ－Ｆ、ＣＦｕ－Ｍｅｇ集落数均有差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜ ０．０５）。而疗后和正常组比较，其ＢＦｕ－Ｅ、ＣＦｕ－Ｆ、ＣＦｕ－Ｔｌ、ＣＦｕ－Ｍｅｇ 集落数对照组，阴虚组疗后有差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。而实验阳虚组疗后ＢＦｕ－ Ｅ、ＣＦｕ－Ｆ、ＣＦｕ－Ｔｌ无差异（Ｐ＞０．０５），ＣＦｕ－Ｍｅｇ有差异（Ｐ＜０．０５ ）。实验组和对照组疗前、疗后ＢＦｕ－Ｅ、ＣＦｕ－Ｆ、ＣＦｕ－Ｔｌ、ＣＦｕ－Ｍｅｇ集落数 均有显著性差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），疗后造血干细胞集落数均有不同程度提高，阴 虚组疗后不如阳虚组，其与对照组基本相同（Ｐ＞０．０５），阳虚组疗后与对照组疗后相比有显 著性差异（Ｐ＜０．０１）。表２实验组与对照组疗前、疗后末稍血象变化情况分组Ｈｂ／ｇ／Ｌ （Ｘ±Ｓ）Ｗｂｃ／×１０９／Ｌ（Ｘ±Ｓ）Ｂｐｃ／×１０９／Ｌ（Ｘ±Ｓ）实验组（ｎ＝３１ ）对照组（ｎ＝１７）阳虚型（ｎ＝１３）阴虚型（ｎ＝１８）｛｛｛疗前疗后疗前疗后疗前疗后 ６２．４５±３．３６９６．７３±３．４９□□☆☆５７．４３±４．８５７１．６４±５．８ ７□□○５４．７８±２．７９７６．２８±３．３６□□２．６４±０．６２３．９１±１．４ ６□□☆☆１．９１±０．７８２．９１±０．９４□□○１．９７±０．４９２．８９±０．４ ５□□４６．２３±３．８４５０．４５±２．７７□□○３９．４２±２．８０４３．８１±２ ．８９□○４０．１６±１．６７４６．９８±２．８２□由表２能够看出，实验组与对照组疗前 、疗后血红蛋白有明显上升，白细胞、血小板亦有不同程度的上升，而以血红蛋白上升最为明显。 阳虚组疗后与对照组疗后相比，其血红蛋白、白细胞有显著性差异，而对回升血小板方面基本相近 。３讨论八十年代以来，多数医家公认再障中医当以肾虚立说，临床上从肾治疗也确实有效。我们 黑龙江中医药大学一附院血液科自六十年代就开展中医药治疗再障的临床与实验研究，集孙伟正教 授三十年临床经验之精华，也认为治肾是治疗再障的关键，为此精心研制出补髓生血ⅠⅡ号方。方 中大多数药归肾经并少佐补气血之品，这样既填补了髓海的空虚，又兼补了气血。另外方中助阳时 还添加了补阴药，补阴时也添补了助阳药，亦即景岳“阴中求阳，阳中求阴”意，其神机妙理，精 湛备至。最后方中还酌加了部分活血化瘀药，更有其深意，因慢性再障多为久病不愈，必致“久病 入络”，故使用活血化瘀药，达到了活血不留瘀，祛瘀而生新，不但不会使出血加重，反而达到了 生血生髓控制病情的目的。现代医学研究认为再障其主要发病机理是造血干细胞内在增殖缺陷，造 血微环境损伤，免疫机能异常影响干细胞增殖及遗传因素，而对于存在于骨髓内的造血干细胞，我 们认为当属中医的骨中之髓，造血干细胞内在增殖缺陷即中医的髓之功能低下，乃肾虚不能主骨生 髓；造血微环境异常即髓海瘀阻；机体免疫机能异常影响干细胞增殖即邪气对骨髓的损害。正如经 云：“邪之所凑，其气必虚”。遗传倾向应属先天禀赋不足，首当责之于肾虚。本项研究从细胞水 平通过实验证实了补髓生血胶囊也即补肾中药能提高再障患者其ＢＦｕ－Ｅ、ＣＦｕ－Ｔｌ、ＣＦ ｕ－Ｆ、ＣＦｕ－Ｍｅｇ集落产率，疗前疗后相比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５ ），说明其作用环节是多位的，本方既能增进干细胞增殖与分化（ＣＦｕ－Ｍｅｇ、ＢＦｕ－Ｅ） ，又能改善再障患者造血微环境（ＣＦｕ－Ｆ），还能提高再障患者免疫应答能力，修复机体免疫 力（ＣＦｕ－Ｔｌ），这显然优于单方位作用的康力龙，硝酸士的宁等西药。同时通过本实验还证 实本方疗效优于再障生血片。且曹氏证实本方无毒副作用，故我们认为无论从传统中医学角度或是 现代医学角度分析均显示补髓生血胶囊具有很高的临床可取性。４参考文献１ＧｒｅｇｏｒｙＣＪ ，ｅｔ．ｃｅｌｐｈｙｓｉｌｏ１９７６，８９：２８９２姜学英，等．人类骨髓成纤维细胞集落 形成及征的初步观察．天津医学，１９８５，１３（２）：６７３戴玉成，等．人类Ｔ淋巴细胞集 落形成的研究，微量甲基纤维素半固体培养法及细胞间相互作用对Ｔ细胞集落形成的影响．中华血 液学杂志，１９８５，６（７）：３８８４ＭｅｓｎｅｒＨＡ，ＪａｍａｌＮ，Ｉｌａｇｕｉｒｅ Ｃ，ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌａｒｇｅＭｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｉｅｓｆｒｏｍ ｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｏｗ．Ｊｃｅｌｌｕｌａｒｐｈｙｓｉｏｌ，１９８２，１：４５补 髓生血胶囊对慢性再障患者造血干/祖细胞作用的实验研究$黑龙江中医药大学附属第一医院@赵 新广@王祥麒@朱跃岚@孙劲晖@孙伟正慢性再障,补髓生血胶囊,造血干细胞培养从细胞培养角 度对慢性再障（ＣＡＡ）的疗效机理及中医辨证分型的客观指标进行了深入的探讨，结果显示补髓 生血胶囊治疗慢性再障其作用环节是多方位的。它既能促进再障患者造血干／祖细胞增殖，改善造血微环境，又能修复机体免疫力。且疗效优于再障生血片。还通过本方治疗慢性再障患者前后血象变化观察，并与已知治疗再障的药物再障生血片比较，结果提示本方对回升白细胞、血红蛋白方面确实有明显的优势。１ＧｒｅｇｏｒｙＣＪ，ｅｔ．ｃｅｌｐｈｙｓｉｌｏ１９７６，８９：２８