怀牛膝总皂甙对肿瘤细胞的抑制作用王一飞王庆端刘晨江江金花孙文欣夏薇吴玉河南省医学科学研 究所郑州４５００５２摘要从中药怀牛膝（ＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢＬ．） 根中分离得到总皂甙，采用体内外实验对怀牛膝总皂甙（ＡＢＳ）的抗肿瘤活性进行了研究。结果 ：随着药物浓度的升高，牛膝总皂甙体外对艾氏腹水癌细胞的细胞毒作用逐渐增强；体内对小鼠肉 瘤１８０腹水型及肝癌实体瘤的抑制率分别为５６％和４６２％（Ｐ＜００１）。提示：怀牛 膝总皂甙对肿瘤细胞具有抑制作用。关键词怀牛膝；总皂甙；抗肿瘤中图分类号Ｒ２８５５怀牛 膝（ＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢＬ．）在抗肿瘤药组方中为一味常用中药。药 理实验发现怀牛膝总皂甙（ＡＢＳ）具有抗生育、强心活性等［１～４］。国内外少见ＡＢＳ抗肿 瘤及免疫调节活性的研究报道。作者对ＡＢＳ的抗肿瘤及免疫药理作用进行了初步研究。１材料与 方法１１材料１１１ＡＢ８大孔吸附树脂：天津南开大学化工厂产品。１１２ＡＢＳ 的提取：中药怀牛膝干根（产于武陟，由河南农业大学王遂义教授鉴定生药）１０５ｋｇ，体积 分数为８０％的乙醇热回流提取３次，回收溶剂，得乙醇浸膏。水溶解，分别以Ｈ２Ｏ、
体积分数 为２０％、６０％、８０％的乙醇为洗脱剂，于ＡＢ８大孔吸附树脂柱层析，减压回收６０％～ ８０％乙醇馏份得ＡＢＳ。１１３动物：昆明雄性小鼠，体重（２０±２）ｇ，由河南省实验 动物中心提供。１１４瘤株：小鼠肉瘤１８０腹水型（Ｓ１８０Ａ）、艾氏腹水癌（ＥＡＣ） 及肝癌实体瘤（Ｈｅｐｓ）细胞株。１２实验方法１２１体外抑制小鼠ＥＡＣ肿瘤细胞实验 ：取接种后第７ｄ的荷ＥＡＣ小鼠腹水细胞，混悬于含体积分数１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６ ４０培养液中，瘤细胞浓度为２．５×１０５／ｍｌ，置于培养瓶中，然后分别依次加入不同剂量 的药物，置３７°Ｃ体积分数为５％ＣＯ２培养箱内，分别培养２４、４８ｈ后取出。以体积分数 为０．５％台盼蓝液染色，显微镜下计数，统计蓝染率。观察不同时间ＡＢＳ药液对肿瘤细胞的抑 制率。１２２体内抑制小鼠Ｓ１８０Ａ及肝癌实体瘤实验：①肿瘤细胞的接种。无菌条件下抽 取荷瘤小鼠腹水，显微镜下计数，用无菌生理盐水调整肿瘤细胞数至２５×１０１０／Ｌ，混匀 后，每鼠右腋皮下分别注射Ｓ１８０Ａ或Ｈｅｐｓ０２ｍｌ。②实验前配成５０、２５、１ ２５ｇ／Ｌ３种浓度的ＡＢＳ药液备用。③小鼠接种后，随机分为４组，即Ａ、Ｂ、Ｃ３组（其 ＡＢＳ药液浓度分别为５０、２５、１２５ｇ／Ｌ）及生理盐水（ＰＢＳ）对照组，每组８ 只。④动物接种第２ｄ后开始用药观察。每ｄ给Ｓ１８０Ａ组小鼠分别腹腔注射ＡＢＳ５０、２ ５、１２５ｍｇ／ｋｇ，给Ｈｅｐｓ组小鼠分别以５０、２５及１２５ｍｇ／ｋｇ剂量 的ＡＢＳ进行灌胃，用生理盐水作对照，连续７ｄ，第８ｄ采用颈椎脱臼法处死。处死动物后，取 瘤组织称重，按下述公式计算肿瘤抑制率（Ｒ）。Ｒ＝对照组平均瘤重－试验用药组平均瘤重对照 组平均瘤重×１００％２结果２１ＡＢＳ体外对小鼠ＥＡＣ肿瘤细胞不同时间的抑制率见表１。 表１ＡＢＳ体外对小鼠肿瘤细胞不同时间的抑制率组别抑制率／％２４ｈ４８ｈＲＰＭＩ１６４ ０００ρ（ＡＢＳ）／１０－２ｇ·Ｌ－１３４１００ρ（ＡＢＳ）／１０－１ｇ·Ｌ－１１００ １００由表１可见，ＡＢＳ低浓度组（１０－２ｇ／Ｌ）对ＥＡＣ细胞的抑制率与作用时间呈正相 关关系，高浓度组（１０－１ｇ／Ｌ）对ＥＡＣ细胞的抑制率２４ｈ时明显高于低浓度组。２２ ＡＢＳ体内对小鼠Ｓ１８０Ａ和Ｈｅｐｓ的抑制作用分别见表２、３。表２ＡＢＳ体内对小鼠Ｓ１ ８０肉瘤抑制作用（ｘ±ｓ）组别ｎ瘤重／ｇ抑制率／％ＰＰＢＳ８１７０±０２３Ａ８１ ２８±０７２２５＞００５Ｂ８０９０±０５６４７＜００５Ｃ８０９６±０３０ ５６＜００１表３ＡＢＳ体内对小鼠Ｈｅｐｓ实体瘤抑制作用（ｘ±ｓ）组别ｎ瘤重／ｇ抑制率 ／％ＰＰＢＳ８２８６±１３７９Ａ８１５６±０４９３４５５＜００１Ｂ８１５ ４±０８８５４６２＜００１Ｃ８１５６±０４８０４５５＜００１由表２可见， ＡＢＳ小剂量组（每ｄ１～２５ｍｇ／ｋｇ）与对照组平均瘤重相比经统计学ｔ检验无显著性差异 ；ＡＢＳ中剂量组（每ｄ２５ｍｇ／ｋｇ）与对照组相比有显著性差异，ＡＢＳ大剂量组（每ｄ ５０ｍｇ／ｋｇ）与对照组平均瘤重相比有非常显著性差异。可见随着ＡＢＳ用药剂量的增加， ＡＢＳ对Ｓ１８０Ａ的生长的抑制作用逐渐增强。由表３可见，ＡＢＳ小剂量组（每ｄ１２５ｍ ｇ／ｋｇ）与对照组平均瘤重相比，经统计学ｔ检验有显著性差异；ＡＢＳ中剂量组（每ｄ２５ ｍｇ／ｋｇ）与对照组平均瘤重相比有显著性差异；ＡＢＳ大剂量组与对照组平均瘤重相比有显著 性差异。３个剂量组对Ｈｅｐｓ的生长期均有抑制作用，但未观察到量效关系。３讨论ＡＢＳ在体 外可以抑制ＥＡＣ肿瘤细胞的生长，且其抑瘤效应呈现出量效关系；ＡＢＳ在体内具有抑制Ｓ１８ ０Ａ和Ｈｅｐｓ的生长，对Ｓ１８０Ａ的抑瘤效应呈现明显量效关系，而对Ｈｅｐｓ的抑制效应却 未观察到量效关系。结果表明，ＡＢＳ对肿瘤细胞具有明显的抑制效应，一方面可能与其细胞毒性 有关，另一方面由于ＡＢＳ为齐墩果烷型五环三萜皂甙，而此类皂甙多具有免疫调节活性［５］， 其抑制肿瘤的作用也可能与ＡＢＳ的免疫调节作用有关，因此，很有必要进一步研究ＡＢＳ的免疫 调节作用及其与抗肿瘤活性的相关性，从而有助于探讨ＡＢＳ的抗肿瘤机制。现有的抗肿瘤化疗药 物一般毒性较大，继续寻找高效低毒的抗肿瘤药物，尤其是天然药物是当今研究的热点之一。怀牛 膝作为一味常用中药，毒性低，而且为河南的优势资源，有可能成为一种颇有前途、值得进一步开 发的天然抗肿瘤药物。参考文献１向道斌，蒋超，李晓玉，等牛膝多糖对Ｔ淋巴细胞和天然杀伤 细胞功能的影响中国药理学与毒理学杂志，１９９４，８（３）：２０９９２王一飞，吕玉民， 黄自明主编中药与肿瘤免疫研究北京：中国医药科技出版社，１９９６３９３３余上才，章 玉正牛膝多糖抗肿瘤作用及免疫机制实验研究中华肿瘤杂志，１９９５，１７（４）：２７５ ４ＤａｏｂｉｎＸｉａｎｇ，ＸｉａｏｙｕＬｉ．Ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉ ｍｍｕｎｍｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇａｃｔｉｏｎｓｏｆＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅ ｎｔａｔａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ，１９９ ３，１４（６）：５５６５吴寿金，张晓闻近年来皂甙药理活性的研究概况国外医药·植物药 分册，１９９４，９（６）：２４６Ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｃｒｕｄｅ ｓａｐｏｎｉｎｓｆｒｏｍＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＷａｎｇＹｉｆｅｉ，Ｗ ａｎｇＱｉｎｇｄｕａｎ，ＬｉｕＣｈｅｎｊｉａｎｇ，ＪｉａｎｇＪｉｎｈｕａ，ＳｕｎＷｅｎ ｘｉｎ，ＸｉａＷｅｉ，ＷｕＹｕＨｅｎａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎ ｃｅｓ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２Ｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈ ｅｃｒｕｄｅｓａｐｏｎｉｎｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｏｆＡｃｈｙｒａｎｔ ｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａ（ＡＢＳ）ｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｉｎｖｉ ｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄｔｈｅｉｎｈｉｂ ｉｔｏｒｙｒａｔｅｉｎｖｉｖｏａｇａｉｎｓｔｓａｒｃｏｍａ１８０ａｎｄＨｅｐｓｗａｓ５ ６％ａｎｄ４６．２％（Ｐ＜０．０１），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓ ｕｇｇｅｓｔｔｈａｔＡＢＳｍａｙｈａｖｅａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｎｔｕｍｏ ｒｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ；ｃｒｕｄｅｓａｐｏｎｉｎｓ；ａｎｔｉｔ ｕｍｏｒ怀牛膝总皂甙对肿瘤细胞的抑制作用@王一飞@王庆端@刘晨江@江金花@孙文欣@夏薇 @吴玉$河南省医学科学研究所怀牛膝；总皂甙；抗肿瘤从中药怀牛膝（Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ ｂｉｄｅｎｔａｔａＢＬ．）根中分离得到总皂甙，采用体内外实验对怀牛膝总皂甙（ＡＢＳ）的 抗肿瘤活性进行了研究。结果：随着药物浓度的升高，牛膝总皂甙体外对艾氏腹水癌细胞的细胞毒 作用逐渐增强；体内对小鼠肉瘤１８０腹水型及肝癌实体瘤的抑制率分别为５６％和４６２％（ Ｐ＜００１）。提示：怀牛膝总皂甙对肿瘤细胞具有抑制作用。１向道斌，蒋超，李晓玉，等 牛膝多糖对Ｔ淋巴细胞和天然杀伤细胞功能的影响中国药理学与毒理学杂志，１９９４，８（３ ）：２０９９２王一飞，吕玉民，黄自明主编中药与肿瘤免疫研究北京：中国医药科技出版社 ，１９９６３９３３余上才，章玉正牛膝多糖抗肿瘤作用及免疫机制实验研究中华肿瘤杂志 ，１９９５，１７（４）：２７５４ＤａｏｂｉｎＸｉａｎｇ，ＸｉａｏｙｕＬｉ．Ａｎｔｉｔｕ ｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｍｍｕｎｍｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇａｃｔｉｏｎｓｏｆ Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．ＡｃｔａＰｈａ ｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ，１９９３，１４（６）：５５６５吴寿金，张晓闻近年来皂甙药理活 性的研究概况国外医药·植物药分册，１９９４，９（６）：２４６中国博士后基金制作用，但 未观察到量效关系。３讨论ＡＢＳ在体外可以抑制ＥＡＣ肿瘤细胞的生长，且其抑瘤效应呈现出量效关系；ＡＢＳ在体内具有抑制Ｓ１８０Ａ和Ｈｅｐｓ的生长，对Ｓ１８０Ａ的抑瘤效应呈现明显量效关系，而对Ｈｅｐｓ的抑制效应却未观察到量效关系。结果表明，ＡＢＳ对肿瘤细胞具有明显的抑制效应，一方面可能与其细胞毒性有关，另一方面由于ＡＢＳ为齐墩果烷型五环三萜皂甙，而
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