Ｒ－ＨＰＬＣ法测定清热解毒粉剂和口服液中黄芩甙林秋明（佛山教育学院化学系，佛山５２８００ ０）关键词清热解毒药；
制剂；黄芩甙；反相高效液相色谱法中图号Ｒ９２７．２清热解毒粉剂和 口服液具有清热解毒之功效，主要用于治疗由感冒病毒引起的上呼吸道感染等疾病。它的主要成分 为黄芩、银翘等，黄芩中的黄芩甙为其主要活性成分。其它中成药中黄芩甙含量的测定有ＨＰＬＣ 法和ＴＬＣ法［１］，但对清热解毒粉剂和口服液中黄芩甙的测定方法未见报道，由此研究建立清 热解毒粉剂和口服液中黄芩甙的测定方法对制剂质量控制具有实际意义。１实验部分１．１仪器与 试药ＬＣ－６ＡＨＰＬＣ带ＳＰＤ－６ＡＶ可变波长紫外检测器，ＣＲ－４Ａ微处理机（日本岛津 ），ＯＤＳ色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，１０μｍ，大连化学物理研究所），Ｕ２０００Ｕ Ｖ／ＶＩＳ光谱仪（日本日立）。黄芩甙对照品（９９％，中国药品生物制品检定所），甲醇，磷 酸，冰醋酸（分析纯，北京化工厂）。
清热解毒口服液（郑州中药制药厂，批号９７０１１５，９ ７０１２７和９７０２０１三批，每批５支，１０ｍｌ／支）；清热解毒粉剂（郑州中药制药厂， 批号为９６１２０９，９６１２２８和９７０１１０三批，每批５袋，１０ｇ／袋）。１．２色谱 条件色谱柱ＯＤＳ，柱温２０℃，
流动相０．４％磷酸／甲醇（４５／５５，Ｖ／Ｖ），流速ｌｍ ｌ／ｍｉｎ，检测波长为黄芩甙的最大吸收波长２７６ｎｍ（见图１），进样体积为１０μｌ。图 ２中Ａ、Ｂ和Ｃ分别为黄芩甙对照品，口服液空白样品和口服液样品的色谱图。１．３实验方法１ ．３．１黄芩甙对照品储备溶液制备准确称取黄芩甙对照品２０ｍｇ于１０００ｍｌ的容量瓶中， 用５０％的甲醇水溶液配制成每１００ｍｌ含２ｍｇ的溶液作为储备液。１．３．２样品溶液制备 用移液管准确吸取５ｍｌ清热解毒口服液于１００ｍｌ的容量瓶中，超声波溶解５分钟，静置。用 ５０％甲醇水溶液定容，用滤纸过滤，弃去初滤液，续滤液再次经３μｍ的砂芯漏斗过滤，滤液即 可作为ＨＰＬＣ的实验溶液。准确从每袋中称取清热解毒粉剂约１．０ｇ于１００ｍｌ容量瓶中， 同法制备ＨＰＬＣ实验溶液。图１黄芩甙对照品（５μｇ／ｍｌ）的紫外吸收光谱图２黄芩甙对照 品（Ａ），口服液空白样品（Ｂ）和口服液（Ｃ）的色谱图。２结果２．１黄芩甙的工作曲线与检 测限准确移取一定体积的黄芩甙对照品储备液于５０ｍｌ容量瓶中，用流动相配制成５，１５，３ ０，４０，６０和７５μｇ／ｍｌ对照溶液，进样测定。以浓度Ｃ与峰面积Ａ进行线性回归，得回 归方程为：Ａ＝１４６５９０Ｃ－５７８０，ｒ＝０．９９９５（ｎ＝６）表明黄芩甙浓度为５～ ７５μｇ／ｍｌ范围内线性关系良好。２．２方法的回收率采用空白样品中加入浓度为１５μｇ／ ｍｌ的黄芩甙对照品溶液进行回收率测定。５次测定的平均回收率为１０２．８％；ＲＳＤ为０． ９％２．３样品测定取１．３．２项制备的样品溶液进行ＨＰＬＣ分析，依黄芩甙的工作曲线，峰 面积和取样量计算供试品中黄芩甙的含量，结果见表１。表１清热解毒粉剂和口服液中黄芩甙的含 量（Ｓ表示粉剂，Ｌ表示口服液）批号９６１２０９（Ｓ）９６１２２８（Ｓ）９７０１１０（Ｓ ）９７０１１５（Ｌ）９７０１２７（Ｌ）９７０２０１（Ｌ）样品量１．００４０ｇ０．９９６ ５ｇ０．９９７１ｇ１０ｍｌ１０ｍｌ１０ｍｌ黄芩甙含量（ｍｇ）４．７２±０．０３２４．５ ６±０．０２１４．７５±０．０２５１４．９０±０．１４１８．１４±０．１１１５．４３± ０．１２结果表明，该方法可用于清热解毒粉剂与口服液中黄芩甙的含量测定。３讨论３．１流动 相的确定由于清热解毒粉剂和口服液的成分比较复杂，要实现黄芩甙与其它组分的基线分离，必须 对ＲＰ－ＨＰＬＣ的流动相组成进行优化选择，采用流动相Ａ（０．４％磷酸／甲醇）在不同组成 比例时对清热解毒口服液和黄芩甙对照品进行ＨＰＬＣ分析。结果表明，比例为６０／４０时，黄 芩甙的保留时间为２９．２７ｍｉｎ，峰展宽和拖尾严重；比例为５０／５０和４５／５５时，黄 芩甙与口服液中的其它组分可达到基线分离且峰形对称，但是峰时间较长，为１８．５２ｍｉｎ。 由此，选０．４％磷酸／甲醇（４５／５５，Ｖ／Ｖ）为最佳流动相。３．２系统试验采用上述所 建方法对清热毒粉剂和口服液中黄芩甙进行测定，由于黄芩甙的峰与样品中其它峰的距离较大，不 需要特别考虑分辨率或分离度的影响。当黄芩甙的峰形因子不大于１．５，理论塔板数不小于３５ ００时，该方法准确可靠。参考文献１中华人民共和国卫生部药典委员会．中国药典（一九九五年 版一部）．北京：化学工业出版社．１９９５．２７１；３９９R-HPLC法测定清热解毒粉剂 和口服液中黄芩甙@林秋明$佛山教育学院化学系清热解毒药；制剂；黄芩甙；反相高效液相色谱法１中华人民共和国卫生部药典委员会．中国药典（一九九五年版一部）．北京：化学工业出版社．１９９５．２７１；３９９
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