我院自制制剂ZO％盐酸普鲁卡因注射液，用于外科手术麻醉，临用时取25～50ml，加到5％ 葡萄糖注射液中供静脉滴注，有必要检查热原。本文经考察，采用鲨法检查细菌内毒素，方法可行 、简便，有利于医院快速。高效地监控制剂质量。现报道如下。一、仪器和材料电热恒温水浴箱（ 上海医疗器械七厂）；XW毛OA型旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）。2％盐酸普鲁卡因注射 液（上海海普药厂，0．04g／Zml，批号931002）；20％盐酸普鲁卡因注射液（本 院自制，批号961030）；5％葡萄糖注射液（本院自制，批号9610O9．2）；盐酸普 鲁卡因（南京制药厂，批号940123）；鱼试剂（厦门鲨试剂厂，灵敏度“＝0．25EU／ ml，批号960606）；鱼试剂溶解液（厦门鲨试剂厂，为超纯水，内毒素含量＜0．03E U／ml，批号950110，本实验兼作无热原水）；细菌内毒素工作标准品（厦门鲨试剂厂， 10EU／支，批号950320）。二、实验方法与结果采用试管法，按卫生部颁布的（细菌内 毒素检查法），结合（中华人民共和国药典牌二部1995年版附录76页的方法，做如下试验。 （一）2％盐酸普鲁卡因注射液的增强试验和抑制试验1．增强试验取盐酸普鲁卡因注射液（0． 049／Zml）为原液，用无热原水稀释成系列稀释液：A液（原液）；B液（1：1）；C液 （1：2）；D液（1：3），分别进行细菌内毒素试验，各液平行做4份，同时用无热原水做一 组阴性对照和阳性对照。结果，除阳性对照外，各液均呈阴性。2．抑制试验取上述系列稀释液， 分别溶解和稀释细菌内毒素工作标准品至ZA。二O．SEU／ml处，各取0．lml，加鲨试 剂0．lml，进行内毒素试验，各液平行做4份，同时用无热原水做一组阴性对照和阳性对照。 结果，A液呈阴性；B液，C液和D液全部呈阳性。（二）20％盐酸普鲁卡因注射液的增强试验 和抑制试验分别取热原试验均呈阴性的ZO％盐酸普鲁卡因注射液25．sml和5％葡萄糖注射 液25Oml，两者混合均匀，使该液含盐酸普鲁卡因2％，作为原液人，用无热原水稀释成系列 稀释液，得入（原液）；E（1：1）；C（1：2）；D（1：3），分别按前面所述的方法做 增强试验和抑制试验。结果与二（－）相对应一致，即人液有抑制作用，其内毒素管（0．SEU ／ml）呈阴性。取ZO％盐酸普鲁卡因注射液12．6ml加入到5％葡萄糖注射液250ml 中，使盐酸普普卡因含量为1％，作为原液，再按五：豆，且：Z稀释，按前法做干扰试验。结果 表明，各液对内毒素试验均无干扰，即增强试验管内毒素全部呈阴性，抑制试验各管内毒素反应全 部呈阳性。（三）含供试品的尝试剂灵敏度试验按照（中国药典）二部1995年版（细菌内毒素 检查法），将含盐酸普鲁卡因为1．％的葡萄糖注射液制成最大有效稀释液（稀释20倍），用该 供试液把细菌内毒素工作标准品制成ZAb（O．SEU／hi）、Ah（O．25EU／hi） 、0．SAb（0．125EU／ml）、0．25A。（0．O625EU／ml），与用无热 原水稀释制成的ZAb、Ah、O．SAb、0．25Ah一起，同时做鲨试剂灵敏度测定，各稀 释液平行做4管，结果，内毒素水溶液有一管最低凝＿＿。＿。。＿。＿，，，。＿＿、，；ZX ，集终点在O．125EU／＿1．根据人一in‘牛＜（x”I”一、“”、”～’————— ’”””“”—”””””“”4为反应终点内毒素浓度的对数值）计算，测得灵敏度Ac为0． ZIOZ，标准差S为O．1504＜0．365；l％供试品内毒素溶液4管的最低凝集终点都 在O．25EU／ml上，放＼二0．25EU／ml，s＝0。两测得灵敏度分别合标示灵敏度 的84．OS％和IOO％，证明，l％盐酸普普卡因溶液不干扰鲨试验。结果见表1。表1堂试 剂灵敏度试验注1“＋”表示37℃水浴60min后试管缓缓倒转180”时，省内凝胶不变形 ，不从管壁滑脱者，即为阳性；“－”表示凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者，即为阴性。注2O EU／ml列，实为阴性对照。（四）样品测定分别取3批热原反应明性的20％盐酸普鲁卡因注 射液（批号为951012‘951219‘960424）12．6ml，加到热原检查合格的 5％葡萄糖注射液（批号为951025－2，951213－2，960419－2）250m l中混合均匀，使盐酸普鲁卡因含量为1％，依法做内毒素检查，结果均呈阴性。三、讨论（－） 实验表明，浓度＞2％的盐酸普鲁卡因对鲨试验有抑制作用，浓度为1％的盐酸普鲁卡因对卷试验 无干扰，有供试品（盐酸普鲁卡因）和无供试品测得的尝试剂灵敏度人都在0．5～2．OA。内 。实验表明，可以用鲨试验来检查浓度为三％或1％以下的盐酸普鲁卡因注射液中的细菌内毒素。 （二）注射用盐酸普鲁卡因在（中国药典）二部1995年版中规定用家兔法检查热原。临床上， 为强化外科手术的麻醉效果，往往采用盐酸普鲁卡因（0．25～l％）与葡萄糖（5％）混合的 注射液［l］，因此，笔者将20％的盐酸普鲁卡因注射液用5％葡萄糖注射液稀释成1％浓度后 进行细菌内毒素检查，不仅符合临床需要，而且方法更实用、简便、迅速、且重现性好。（三）内 毒素限量L＝rt，一般注射途径”－”’”——””’———一M’”—————“——一家兔 发热阈剂量K＝5．OEU／kg［‘］，而且％浓度的盐酸普鲁卡因家兔热原剂量M二lmll kg［3］，故L一社主w空一SEU／ml。再根据供试品最大有效稀释（MVD）公式推算［ 2］．MVD＝…，其中P，为供艄中药物浓度，如剂量及内毒素限量直接按供试品溶液计算，则 马二1；人为所用鲨试剂灵敏度，入一0·25EU／”l，MVD“in“20o说明，所含浓 度为1％的盐酸普鲁卡因注射液，即使稀释到ZO倍，鱼试验结果仍然可靠。鲎试验考察盐酸普鲁 卡因注射液中细菌内毒素@吴文飞$上海市第一肺科医院!上海,200433@刘明忠$上海市 第一肺科医院!上海,200433盐酸普鲁卡因注射液;;鲎试剂;;细菌内毒素;;干扰试验用鲎试剂对盐酸普鲁卡因注射液进行抑制试验、增强试验和灵敏度复核试验，确定其对鲎试验的干扰作用。<1>顾学裘主编.药物制剂注解.第二版.北京:人民卫生出版社,1981:362～4
<2>陈菡芬,申蕴布.内毒素检查法研究进展.国外医学药学分册,1992;19(5):303
<3>中华人民共和国药典.二部.1995年版.北京:化学工业出版社,1995:713～4 EU／ml。再根据供试品最大有效稀释（MVD）公式推算［2］．MVD＝…，其中P，为供 艄中药物浓度，如剂量及内毒素限量直接按供试品溶液计算，则马二1；人为所用鲨试剂灵敏度， 入一0·25EU／”l，MVD“in“20o说明，所含浓度为1％的盐酸普鲁卡因注射液， 即使稀释到ZO倍，鱼试验结果仍然可靠。鲎试验考察盐酸普鲁卡因注射液中细菌内毒素@吴文飞 $上海市第一肺科医院!上海,200433@刘明忠$上海市第一肺科医院!上海,20043 3盐酸普鲁卡因注射液;;鲎试剂;;细菌内毒素;;干扰试验用鲎试剂对盐酸普鲁卡因注射液进 行抑制试验、增强试验和灵敏度复核试验，确定其对鲎试验的干扰作用。<1>顾学裘主编.药物制剂注解.第二版.北京:人民卫生出版社,1981:362～4
<2>陈菡芬,申蕴布.内毒素检查法研究进展.国外医学药学分册,1992;19(5):303
<3>中华人民共和国药典.二部.1995年版.北京:化学工业出版社,1995:713～4
More abstracts about the 鲎试验考察盐酸普鲁卡因注射液中细菌内毒素