内皮素（endothelin，ET）是由ZI个氨基酸织成的多肽，具有强大的缩血管效应和致 有丝分裂作用，并且参与多种疾病的病理生理过程。ET的一级线性结构与某些作用于细胞膜离了 通道的毒素相似，如蜂毒、蛇毒和蝎毒等，特别是与非洲蛇毒sarafotoxin具有高度的 相似性，并且二者的生物活性亦相似。我们拟从我国传统的抗蛇毒中草药中发现能括抗ET生物效 应的部分并建立药理学评价模型。l材料与方法1．l材料ET－1、去甲肾上腺素购自美国Si gma公司，动物血压计由中日友好医院临床医学研究所提供（RBP－l型），台式平衡记录仪 为上海大华仪器厂产品。昆明种小鼠、Wistar和SD大鼠分别购自中国医学科学院药物研究 所实验动物繁育场和北京医科大学实验动物部（有等级动物合格证）。红背丝绸「Cissusa s．samica（Law．）Cra山．」采自广西平乐县，并经华西医科大学沈俄德教授鉴定 。红背丝绸根粗粉以95／的乙醇提取，减压回收乙醇，并在水浴上挥千至无醇味，加适量蒸馏水 调整体积至每ml相当于3g原药材，置冰箱中备用。1．2方法括抗ET－1急性致死作用：小 鼠20只，随机分为2组，每组10只，用红背丝绸醇提物按309／kg量给小鼠灌胃，30m in后尾静脉注射6nmol／kgET－1，并用不加药物处置的生理盐水灌胃作为对照，观察 小鼠急性死亡时间与死亡数。桔抗ET－1的升压作用：SD大鼠12只，随机分为2组，每组6 只，用红背丝绸醇提物按30g／kg和6g／kg量给SD大鼠灌胃，45min后尾静脉注射 6pg／kgET－1，用阻抗法无创记录大鼠收缩压，以给药前为基础值，计算收缩压的变化； 并用等体积的中理盐水灌胃后，再用与上述相同的方法注射ET－l后，观察收缩压的变化。体外 灌流桔抗ET－1收缩血管作用：成年Wistar大鼠击昏后开胸取出主动脉，分离结缔组织后 剪成2～3minK的血管环，置于Krebs－Henseleit生理溶液中（K－H氏液， pH7．4O士0．05，95％O。＋596CO。，370土0．soC）．经稳定、用10 ’M去甲背上腺素预激、加Zg基础张力、平衡后．加10’M的ET－l待收缩达到效应后。再 加入红背丝绸醇提物（用2％DMDO为港媒，并用此为对照）一记录生动脉血管环等张性的变化 。2结果2．！信抗ET－l急性致死作用来加药物处置的小鼠尾静脉注射ET－1后，死亡时间 大约在3．smin左右，而经预先给予309／kg红背丝绸醇提物后．死亡时间明显延长而死 亡动物数亦明显减少，经丁检验（死亡时间和X’检验（死亡率），结果与对照组相比．具有显著 性意义（P＜0．OS）。韦1灯沓＆钢住情PT．1乞忖发栏作田2．2桔抗ET一旦的升压作 用图1红背丝绸醇援物括抗ET－l的升压效应（n一6－M土SD）静脉注射ET－l后，大鼠 的收缩压迅速上升，在15min上升幅度达到最高点，收缩压平均上升800kPa。预先用红 背丝绸醇提物进行处置后，与对照组相比，收缩压的变化趋势大体相似，但上升幅度明显降低，除 60min点外，药物处置组各时间点收缩压的值经尸检验，与对照组相比存在明显差异（p＜0 ．OS）。表明红背丝绸醇援物抬抗ET－1升压作用有显著性意义，并且用高低两个剂量后（剂 量间差异为6倍），用方差分析后发现两组之间存在剂量依赖性。2．3体外灌流桔抗ET－1缩 血管作用用10’红背丝绸醇提物母液（每毫升母液中含有原药材30g）在体外灌流装置中，可 括抗ET－1的缩血管作用，最大桔抗效能为41．26％，与对照组相比，桔抗作用有非常显著 性意义。3讨论我国传统的抗蛇毒中草药具有一定程度桔抗ET生物学效应的作用「‘”，但由于 ET生物效应涉及面较广，用中草药对其生物活性括抗作用的筛选时应尽可能地考虑到其作用方式 。为此，我们用上述三项指标作为筛选中草药桔抗ET效应的模型．并用红背丝绸的醇提物进行了 验证。ET－1在心脏的蓄积可导致致死性的心肌缺血，而且冠状动脉对ET－1最为敏感，ET －1可引起冠状动脉的强烈收缩造成动物的摔死‘“‘’。ET一且是目前已知最强的缩血管物质 ，对于全身的动脉及静脉均有收缩作用，由于其对心脏具有正性肌力作用，同时又有强烈的缩血管 作用，桔抗其升压作用和缩血管作用可以作为敏感的指标。鉴于以上考虑再加上前人所做的工作基 础，将测定以上三个指标的实验作为评价中草药括抗ET生物效应的筛选模型。红背丝绸是我国临 床有效的抗蛇毒中草药，我们以往的实验证明其醇提物秸抗ET生物效应的作用大于其水提物。本 实验的结果表明，利用该模型对红背丝绸的醇提物能较好地反映出其括抗ET的生物效应，对于E T引起小鼠急性死亡有明显的保护作用，使得其死亡数及死亡时间与对照组相比有显著性差异；对 升压作用亦有桔抗作用，并在体外实验中发现能舒张ET的缩血管效应。该模型的建立并用具体药 物进行评价．对于在我国数量繁多的中草药中筛选ET桔抗物质、客观有效地得到初步的结论有较 大的益处。红背丝绸拮抗内皮素-1生物效应的研究@王峰$解放军空军总医院药剂科!1000 36@杨连春$解放军空军总医院药剂科!100036@程言亮$解放军空军总医院药剂科!1 00036@刘敏$解放军空军总医院药剂科!100036@吕敏$解放军空军总医院药剂科! 100036@贾恒明$解放军空军总医院药剂科!100036内皮素-1;;中草药;;拮抗 作用本研究用内皮素-1（ET－1）引起动物的急性死亡、升压及编血管作用为模型，以评价中 草药桔抗ET生物效能，并用红背丝绸醇提物在该模型上进行了验证。结果表明，红背丝绸醇提物 能减少ET－1引起的小鼠死亡数并延长死亡时间、降低ET－1的升压效应，并在体外有桔抗ET－1的缩血管作用。提示中草药具有桔抗内皮素-1的效能。1王峰,杨连春,刘敏,等.抗蛇毒中草药桔抗ET-1和S6b作用的初步研究.空军总医院学报,1996,12(3):128
2田青,赵东,张继峰,等.对内皮素生物学效应拮抗作用的研究.中国科学B辑,1995,25(2):172
3Okumura H, Ashizawa N, Asakura R et aL PossibleInvolememnt of Different Mechanisms in SuddenDeath Induced Endothelin-1 and Big-endothelin-1。Biol Pharm Bull, 1955, 18(1):18
4Charles R Buenett JC Jr, Lerman A EnhancedCoronary Vasoconstrlcation to Endothelin-B-receptor Activation in Experimental Congestive HeartFailure.Circulation,1996,93(4):646国家自然科 学基金!39370845用本研究用内皮素-1（ET－1）引起动物的急性死亡、升压及编血 管作用为模型，以评价中草药桔抗ET生物效能，并用红背丝绸醇提物在该模型上进行了验证。结 果表明，红背丝绸醇提物能减少ET－1引起的小鼠死亡数并延长死亡时间、降低ET－1的升压 效应，并在体外有桔抗ET－1的缩血管作用。提示中草药具有桔抗内皮素-1的效能。1王峰, 杨连春,刘敏,等.抗蛇毒中草药桔抗ET-1和S6b作用的初步研究.空军总医院学报,1996,12(3):128
2田青,赵东,张继峰,等.对内皮素生物学效应拮抗作用的研究.中国科学B辑,1995,25(2):172
3Okumura H, Ashizawa N, Asakura R et aL PossibleInvolememnt of Different Mechanisms in SuddenDeath Induced Endothelin-1 and Big-endothelin-1。Biol Pharm Bull, 1955, 18(1):18
4Charles R Buenett JC Jr, Lerman A EnhancedCoronary Vasoconstrlcation to Endothelin-B-receptor Activation in Experimental Congestive HeartFailure.Circulation,1996,93(4):646国家自然科学基金!39370845
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