２，４┐二氨基┐５┐甲基┐６┐（取代苯氨基）甲基┐吡啶［２，３┐ｄ］并嘧啶脂水分配系数的 测定１）王映芬２）林桂椿（北京医科大学天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京１０００８ ３）李正香周建国李仁利（北京医科大学药物化学教研室，北京１０００８３）摘要应用高效液相 色谱法测定了１５个２，４－二氨基－５－甲基－６－（取代苯氨基）甲基－吡啶［２，３－ｄ］ 并嘧啶类化合物的保留值，由此推算了它们的脂水分配系数（正辛醇／水）．所用固定相为Ｓｐｈ ｅｒｉｓｏｒｂＣ１８（３４／１１８）１０μ４．６ｍｍ×２００ｍｍ反向柱，流动相为甲醇－ 水（５７∶４３，ｐＨ＝７．４）．所得脂水分配系数（对数值）与用取代基π值计算的数值相差 较大．关键词高效液相色谱法；分配系数；２，４－二氨基－吡啶［２，３－ｄ］并嘧啶以前的研 究表明，提高叶酸拮抗剂的脂溶性有可能使其对耐甲氨喋呤（ＭＴＸ）的癌细胞仍有较强的抑制作 用〔１，２〕．为此，设计了一类２，４－二氨基－５－甲基－６－（取代苯氨基）甲基－吡啶并 嘧啶类（Ⅰ）化合物．为了研究（Ⅰ）类化合物的结构与抑癌作用的关系，采用高效液相色谱法测 定了这类化合物的脂水分配系数．实验证明在相同条件下测定的有机化合物高效液相色谱保留值（ Ｋ′）的对数值与其以正辛醇／水为溶剂系统测定的脂水分配系数（Ｐ）的对数值之间有良好的线 性关系〔３，４〕如〈１〉式：ｌｏｇＰ＝ａ＋ｂｌｏｇＫ′〈１〉因此，应用一些已知ｌｏｇＰ 的有机化合物用固定的条件测定它们的Ｋ′值并计算出〈１〉式，作为标准方程，然后在同样条件 下测定样品的Ｋ′值，应用〈１〉式即可得到它们的ｌｏｇＰ值．这种方法有节省样品及省时的优 点．１实验部分１．１仪器所用高效液相色谱仪为ＬＫＢ－２１５２型，紫外检测波长为２５４ｎ ｍ，色谱柱为中国科学院大连物理化学研究所国家色谱研究中心制作的ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１ ８（３４／１１８）１０μ４．６ｍｍ×２００ｍｍ反向柱，塔板数相当于３×１０４／ｍ．１． ２试剂洗脱剂甲醇为北京化工厂产品，优级纯；水为自制重蒸馏水；甲酰胺（重蒸）及氯化铵均为 北京化工厂产品，分析纯．建立标准方程使用的化合物为市售商品，未精制，它们的ｌｏｇＰ取自 参考文献〔６〕的附录部分１．３实验条件室温，甲醇－水（５７∶４３）为流动相，加氯化铵０ ．０３５ｍｏｌ，以氢氧化铵调ｐＨ７．４，流速：１ｍＬ／ｍｉｎ，甲酰胺为内标，检测波长： ２５４ｎｍ，灵敏度：０．０２ＡＵＦＳ，纸速：０．２５ｃｍ／ｍｉｎ．１．４实验结果建立标 准方程所用的已知化合物及测得的数据见表１．Ｔａｂ．１Ｄａｔａｕｓｅｄｉｎｔｈｅｄｅｒｉ ｖａｔｉｏｎｏｆｅｑｕａｔｉｏｎ２ｅｌｕａｎｔＭｅＯＨ∶Ｈ２Ｏ＝５７∶４３，ｐＨ７．４ Ｃｏｍｐｄ．ｌｏｇＰΔｔｔ０Ｋ′ｌｏｇＫ′ｐｙｒｉｄｉｎｅ０．６５２．０１２．０８０． ９７－０．０１ｐｉｐｅｒｏｎａｌ１．０５３．４１２．０３１．６８０．０２ａｃｅｔｏｐｈ ｅｎｏｎｅ１．５８３．８８２．０４１．９００．２８ｐ－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ２．３７ ９．８５２．０４４．８３０．６８ｎａｐｈｔｈａｌｉｎ３．３７２８．２５２．０３１３．９ ２１．１４１－ｍｅｔｈｙｌｎａｐｈｔｈｌｉｎ３．８７５２．８６２．０４２５．９１１．４ １ｄｉｐｈｅｎｙｌｅｔｈｅｒ４．２８４８．４１２．０２２３．９７１．３８由表１的数据得 〈２〉式：ｌｏｇＰ＝２．４０８（±０．３６）ｌｏｇＫ′＋０．６９９（±０．３２）ｎ＝７ ，ｒ＝０．９９２，ｓ＝０．１９９，Ｆ１，５＝３０１．２３〈２〉表２为测得的（Ⅰ）类化合 物的保留值及用〈２〉式计算的ｌｏｇＰ值．Ｔａｂ．２Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎｖａｌｕｅｓａｎｄ ｅｙｔｉｍａｔｅｄｌｏｇＰｏｆｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ２，４┐ｄｉａｍｉｎｏ┐５┐ ｍｅｔｈｙｌ┐６┐（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄａｎｉｌｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌ┐ｐｙｒｉｄｏ［ ２，３┐ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓＣｏｍｐｄ．ＸＤａｔａｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＨＰＬ Ｃ①Δｔｔ０Ｋ′ｌｏｇＫ′ｌｏｇＰ②ｌｏｇＰ③１Ｈ７．３５２．０５３．５８０．５５２． ０２２．０２２２－ＯＣ２Ｈ５７．５２２．０４３．６８０．５７２．０７２．４０３２，５－ （ＣＨ３）２９．３７２．０４４．５９０．６６２．２９３．１４４３，５－（ＣＨ３）２７． ８８２．０５３．８４０．５８２．１１３．１４５３－Ｃｌ，４－ＣＨ３７．２６２．０３３． ５８０．５５２．０３３．２９６４－Ｃｌ，３－ＣＨ３７．２９２．０４３．５８０．５５２． ０３３．２９７３－Ｃｌ，２－ＣＨ３７．３０２．０３３．５９０．５６２．０４３．２９８２ －Ｃｌ，６－ＣＨ３７．４５２．０５３．６３０．５６２．０５３．２９９４－ＣＯＣＨ３４． ２０２．００２．０００．３１１．４５１．４７１０３－ＣＯＣＨ３４．２０２．０３２．０７ ０．３２１．４６１．４７１１２－ＣＨ３６．９０２．０３３．４００．５３１．９８２．５８ １２２，６－Ｃｌ２７．０３２．０３３．４６０．５４２．００３．４４１３３，４－Ｃｌ２７ ．５４２．０５３．６７０．５７２．０６３．４４１４４－Ｃｌ７．２８２．０４３．５７０． ５５２．０３２．７３１５２，３－Ｃｌ２７．７０２．０１３．８７０．５８２．１０３．４４ ①ｅｌｕａｎｔＣＨ３ＯＨ∶Ｈ２Ｏ＝５７∶４３，ｐＨ＝７．４，②ｃａｌｃｕｌａｔｅｄｕｓ ｉｎｇｅｑ．２，③ｃａｌｃｕｌａｔｅｄｕｓｉｎｇｅｑ．３２讨论建立标准方程所使用的化合 物ｌｏｇＰ值的范围应大于欲测定的化合物的ｌｏｇＰ值．根据三甲曲沙（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａ ｔｅ，Ⅱ）的ｌｏｇＰ（２．２５）［５］并应用Ｌｅｏ碎片常数法［６］计算了（Ⅰ）类母体化 合物（Ｘ＝Ｈ）的ｌｏｇＰ为１．５０，因此没有选择ｌｏｇＰ为负值的已知化合物参与标准方程 的建立根据所选择的用于建立标准方程化合物的ｌｏｇＰ范围（０．６５～４．２８），设定流动 相中甲醇比例的变化范围为４５％～６０％．从实验结果来看，流动相的极性过大时有些化合物间 的分离效果不佳，而以５３％～５７％甲醇所得的结果较好，故选用甲醇－水（５７∶４３）为流 动相．由于（Ⅰ）类化合物具有碱性，为使其不易解离，应使用偏碱性的流动相．实验表明流动相 的ｐＨ值为７．４时化合物间的分离效果较好．有机化合物的ｌｏｇＰ值具有加和性［６］，可用 式〈３〉表示：ｌｏｇＰｘ＝ｌｏｇＰＨ＋πｘ〈３〉由表２中所列根据〈２〉式计算的（Ⅰ）类 化合物的ｌｏｇＰ可知，除化合物（９），（１０）符合〈３〉式（２．０２－０．５５＝１．４ ７）外，其余化合物的ｌｏｇＰ均与由〈３〉式所得数值相差较大，其原因值得进一步研究．参考 文献１ＳｅｌａｓｓｉｅＣＤ，ＧｕｏＺＲ，ＨａｎｓｃｈＣ，ｅｔａｌ．Ａｃｏｍｐａｒｉｓｏ ｎｏｆｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｇｒｏｗｔｈｏｆｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ－ｒｅｓｉ ｓｔａｎｔａｎｄ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｓｉｎｃｕｌｔｕｒｅｓｂｙｔ ｒｉａｚｉｎｅｓ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｎｅｗｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｅｌｒｅｓｉｓ ｔａｎｃｅｔｏｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９８２，２５（２）：１５７ ～１６１２ＳｅｌａｓｓｉｅＣＤ，ＬｉＲＬ，ＨａｎｓｃｈＣ，ｅｔａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏ ｎｂｙ５－（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ－ｂｅｎｚｙｌ）－２，４－ｄｉａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉ ｄｉｎｅｓｏｆｍｕｒｉｎｅｔｕｍｏｒ（Ｌ５１７８Ｙ）ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓｓｅｎｓｉｔ ｉｖｅｔｏａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ．Ｆｕｒｔｈｅｒｅｖｉｄ ｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｔｏｈｙｄｒｏｐ ｈｏｂｉｃｄｒｕｇｓ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９８２，２５（５）：５１８～５５２３ＭｃＣａ ｌＪＭ．Ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｂｙｈｉｇｈ －ｐｒｅｓｓｕｒｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９７５ ，１８（６）：５４９～５２２４ＫａｌｉｓｚａｎＲ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎｓｔ ｕｄｉｅｓｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙｒｅｌａｔｉ ｏｎｓｈｉｐｓ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ，１９８１，２２０（１）：７１～８３５Ｈａｈｕｍ Ａ，ＨｏｒｖａｔｈＣ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｏｃｔａｎｏｌ－ｗａｔｅｒｐａｒｔｉｔｉ ｏｎｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｂｙｕｓｉｎｇｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃ ｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－ｐｈｙ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ，１９８０，１９２（１）：３１５～ ３２２６ＨａｎｓｃｈＣ，ＬｅｏＡ．Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔｃｏｎｓｔａｎｔｓｆｏｒｃｏｒ ｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｂｉｏｌｏｇｙ．ＪｏｈｎＷ ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７９．１８～３４Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ＰａｒｔｉｔｉｏｎＣｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆ２，４┐Ｄｉａｍｉｎｏ┐５┐Ｍｅｔｈｙｌ┐ ６（Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄａｎｉｌｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌ┐Ｐｙｒｉｄｏ［２，３┐ｄ］Ｐｙ ｒｉｍｉｄｉｎｅｓＷａｎｇＹｉｎｇｆｅｎ，ＬｉｎＧｕｉｃｈｕｎ（Ｎａｔｉｏｎａｌｋｅｙ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌａｎｄＢｉｏｍｉｍｅｔｉｃＤｒｕｇｓ，Ｂｅｉｊｉ ｎｇ１０００８３）ＬｉＺｈｅｎｇｘｉａｎｇ，ＺｈｏｕＪｉａｎｇｕｏ，ＬｉＲｅｎｌｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｖａｌｕｅｓ（Ｋ′）ｏｆｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａ
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