野生云芝两种多糖的基本结构测定陈海生，廖时萱，张学森，谭建权，田野萍云芝又称彩云革盖菌， 为多孔菌科真菌云芝［ｃｏｒｉｏｌｕｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ（Ｌ）Ｆｒ」的子实体。云芝的主 要活性成分为多糖，药理实验表明具有显著增强免疫活性、抗肿瘤、改善学习记忆和延缓衰老等作 用［１～４］。我们从采自长白山区的野生云芝子实体中提取分离出云芝总多糠（Ｃｏｒｉｏｌｕ ｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＣＶＰＳ）后［５］，进一步分离纯化 得到两种多糠ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ。经气相色谱分析，Ｓｅｐｈａｄｅｘ柱层析和光谱（ ＩＲ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ）分析，分别测定了ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ糖的组成 ，分子量和基本结构。１材料和方法１．１材料和试剂云芝系采自东北长白山区，经上海农科院真 菌研究所陈国良教授鉴定为Ｃｏｒｉｏｌｕｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ（Ｌ）Ｆｒ的子实体。Ｓｅｐ ｈａｄｅｘＧ－１００，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００，标准Ｄｅｘｔｒａｎ（瑞士Ｐｈａｒｍａ ｃｙ提供）。１．２仪器岛津－５Ａ型气相色谱仪；ＢｒｕｋｅｒＭＳＬ－３００型核磁共振仪。 １．３方法１．３．１云芝多糖ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ的分离纯化按文献［５］方法所得云 芝总多糖（ＣＶＰＳ），再用蒸馏水热溶，过滤，滤液分别用二倍量和三倍量９５％ＥｔＯＨ分级 沉淀过滤，分别得ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ。两者分别经脱色处理，置于放有Ｐ２Ｏ５的真空 干燥器内干燥，得白色粉末。ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ再分别经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００ 柱层析纯化后，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析检查证明两者均为一单峰。１．３．２糖组成 测定条件：１％ＮＧＴＳＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂｗ６０～８０目，３ｍｍ×１．５ｍ玻璃柱，柱温 ２１０℃，进样口温度２５０℃，Ｎ２４０ｍｌ／ｍｉｎ。分别取ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ各 ２０ｍｇ分别放入２支试管内，加０．５ｍｏｌ／ＬＨ２ＳＯ４５ｍｌ，沸水浴中水解４ｈ，用Ｂ ａＣＯ３中和至中性，过滤，滤液于水浴上蒸干，残留物按文献［６］方法制成糖氰乙酸酯衍生物 ，进行气相色谱分析。同法将标准糖也制成糖氰乙酸酯衍生物作对照。作者单位第二军医大学药学 院天然药物化学教研室，上海２００４３３；第二军医大学基础医学部药理学教研室，第二军医大 学基础医学部免疫学教研室１．３．３分子量的测定按文献［７］，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２０ ０凝胶层析柱（１ｃｍ×５０ｃｍ），以蓝葡聚糖测定空体积Ｖ０后，选用Ｔ９０，Ｔ７０，Ｔ４ ０，Ｔ１０标准葡聚糖分别上柱，上样量分别为１ｍｇ，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＣ１洗脱，流 速５～６ｍｌ／ｈ，分部收集，每份２ｍｌ，苯酚－硫酸法比色，分别测出各个标准葡聚糖的洗脱 体积Ｖｅ，以Ｖｅ／Ｖ０与分子量对数作标准曲线，再分别取ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ２ｍｇ ，以同样方法测定出洗脱体积，然后根据标准曲线计算。１．３．４ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ 的结构测定采用１Ｈ－ＮＭＲ和１３Ｃ－ＮＭＲ技术。２结果２．１ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ 的组成根据ＧＣ分析，ＣＶＰＳⅠ含有４种糖，ＣＶＰＳ－Ⅱ含有５种糖（附表）。附表糖氰乙酸 衍生物的气相色谱分析（保留时间ｔ／ｍｉｎ）峰面积按归一化方法处理，得出各种糖的摩尔比。 ＣＶＰＳ－Ⅰ：
葡萄糖：岩藻糖：甘露糖：半乳糖＝１：０．４１：０．３３：０．２７；ＣＶＰ Ｓ－Ⅱ：＊荡糖：岩藻糖：甘露糖：半乳糖：鼠李糖＝１：０．０７６：０．０７５：０．０３６ ：０．００７５，说明两者皆为葡聚糖。２．２ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ的分子量根据标准曲 线计算，ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ的分子量分别为１１００００和１００００。２．３ＣＶＰ Ｓ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ糖主链基本结构根据气相色谱分析，ＣＶＰＳ－Ⅰ和ＣＶＰＳ－Ⅱ的糖组成 主要是葡萄糖，在１Ｈ－ＮＭＲ和１３Ｃ－ＮＭＲ图谱上亦主要显示葡萄糖的特征吸收信号。ＣＶ ＲＳ－Ⅰ：１Ｈ－ＮＭＲ（Ｄ２０，δ）：４．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）为葡萄糖端碳 上质子，根据偶和常数，应为β－Ｄ－葡萄糖，即主糖链甙键为β甙键，δ３．３～４．２多重峰 为糖上其他质子信号；１３Ｃ－ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，δ）：１０５．０６（Ｃ１），７４．６４（Ｃ ２），８０．９７（Ｃ３），６９．９３（Ｃ４），７７．５３（Ｃ５），６２．６０（Ｃ６）。 根据Ｃ１的化学位移１０５．０６，葡萄糖也为β甙键，若为α甙键，Ｃ１的化学位移应为１００ ．３。又根据Ｃ３的化学位移８０．９７，向低场位移７ｐｐｍ，（葡萄糖Ｃ３的化学位移７３． ７），说明Ｃ３－０Ｈ被甙化。综上分析，ＣＶＰＳ－Ⅰ的主糖链应为β（１－３）连接的葡聚糖 （附图）。ＣＶＰＳ－Ⅱ：１Ｈ－ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，δ）：４．５２（１Ｈ，４，Ｊ＝７．３Ｈｚ ），为葡萄糖端基碳上质子，根据偶和常数Ｊ＝７．３Ｈｚ，应为β－Ｄ－葡萄糖，即主糖链甙为 β甙键，δ４．３～４．２多重峰属糖上其他质子信号；１３Ｃ－ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，δ）：１０５ ．０６（Ｃ１），７５．６６（Ｃ２），８１．２０（Ｃ３），７２．３０（Ｃ４），７７．５４ （Ｃ５），６２．７２（Ｃ６），根据碳谱和氢谱数据，ＣＶＰＳ－Ⅱ的主糖链结构也属β（１－ ３）连接的葡聚糖（附图）。附图ＣＶＰＳ－ⅠａｎｄⅡ结构３讨论近年来，多糖类的研究是化学 家和药理学家比较关注的一个领域。研究表明：云芝多糖具有增强免疫、抗肿瘤、抗溃疡、保肝等 多种生物活性，倍受重视、国内外均有商品在临床应用。但研究较多的是人工培养的云芝菌丝体多 糖。我们对野生云芝子实体多糖的化学和生物活性进行了较系统研究，并发现一些新的活性［２， ８］。野生云芝子实体多糖和人工培养的云芝菌丝体多糠的比较研究有待进行。致谢本院仪器室翟 振兴同志做气相色谱，杨根金同志做核磁共振光诸。关键词云芝；
多糖类；色谱分析；光谱分析中 国图书资料分类法分类号Ｒ２８４．１参考文献｜｜１竺青，楚正绪，谭建权等。云芝多糖对环磷 酰胺所致免疫功能低下的影响。中成药，１９９０；１２（ｌｌ）：２９２李怀义，王新民，谭建 权等。云芝多糖对果蝇的繁殖力和寿命的影响。中国药理学报，１９９３；１４（Ｓｕｐｐｌ．） ：Ｓ３０３王汉涛，鲁进字，田野萍等。云芝多糖对小鼠产生细胞因子的促进作用。中国药学杂志 ，１９９３；２８（１２）：７２２４鲁进字，王汉涛，田野萍等。云芝多糖对小鼠免疫功能的影 响。中国药学杂志，１９９５；３０（１）：１０５陈海生，廖时萱，谭建权。野生云芝多糖的初 步分析。药学情报通讯，１９９０；８（３）：５８６李铁林，吴昌贤，张燕霞。糖和糖醇的气相 色谱分析研究。分析化学，１９８２；１０（５）：２７２７王著禄，陈海生，郑钦岳等。商陆多 糖的分离与纯化。第二军区大学学报，１９９０；１１（１）：５６８竺青，楚正绪，谭建权等。 彩云多糖对改善学习记忆功能实验研究。中成药，１９９０；１２（１１）：２９（本文编辑朱吉 林）野生云芝两种多糖的基本结构测定@陈海生，廖时萱，张学森，谭建权，田野萍$第二军医大 学药学院天然药物化学教研室，第二军医大学基础医学部药理学教研室，第二军医大学基础医学部 免疫学教研室云芝；多糖类；色谱分析；光谱分析１竺青，楚正绪，谭建权等。云芝多糖对环磷酰 胺所致免疫功能低下的影响。中成药，１９９０；１２（ｌｌ）：２９２李怀义，王新民，谭建权 等。云芝多糖对果蝇的繁殖力和寿命的影响。中国药理学报，１９９３；１４（Ｓｕｐｐｌ．）： Ｓ３０３王汉涛，鲁进字，田野萍等。云芝多糖对小鼠产生细胞因子的促进作用。中国药学杂志， １９９３；２８（１２）：７２２４鲁进字，王汉涛，田野萍等。云芝多糖对小鼠免疫功能的影响 。中国药学杂志，１９９５；３０（１）：１０５陈海生，廖时萱，谭建权。野生云芝多糖的初步 分析。药学情报通讯，１９９０；８（３）：５８６李铁林，吴昌贤，张燕霞。糖和糖醇的气相色 谱分析研究。分析化学，１９８２；１０（５）：２７２７王著禄，陈海生，郑钦岳等。商陆多糖 的分离与纯化。第二军区大学学报，１９９０；１１（１）：５６８竺青，楚正绪，谭建权等。彩 云多糖对改善学习记忆功能实验研究。中成药，１９９０；１２（１１）：２９子信号；１３Ｃ－ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，δ）：１０５．０６（Ｃ１），７５．６６（Ｃ２），８１．２０（Ｃ３），７ ２．３０（Ｃ４），７７．５４（Ｃ５），６２．７２（Ｃ６），根据碳谱和氢谱数据，ＣＶＰＳ －Ⅱ的主糖链结构也属β（１－３）连接的葡聚糖（附图）。附图ＣＶＰＳ－ⅠａｎｄⅡ结构３讨 论近年来，多糖类的研究是化学家和药理学家比较关注的一个领域。研究表明：云芝多糖具有增强 免疫、抗肿瘤、抗溃疡、保肝等多种生物活性，倍受重视、国内外均有商品在临床应用。但研究较 多的是人工培养的云芝菌丝体多糖。我们对野生云芝子实体多糖的化学和生物活性进行了较系统研 究，并发现一些新的活性［２，８］。野生云芝子实体多糖和人工培养的云芝菌丝体多糠的比较研 究有待进行。致谢本院仪器室翟振兴同志做气相色谱，杨根金同志做核磁共振光诸。关键词云芝； 多糖类；色谱分析；光谱分析中国图书资料分类法分类号Ｒ２８４．１参考文献｜｜１竺青，楚正 绪，谭建权等。云芝多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下的影响。中成药，１９９０；１２（ｌｌ） ：２９２李怀义，王新民，谭建权等。云芝多糖对果蝇的繁殖力和寿命的影响。中国药理学报，１ ９９３；１４（Ｓｕｐｐｌ．）：Ｓ３０３王汉涛，鲁进字，田野萍等。云芝多糖对小鼠产生细胞 因子的促进作用。中国药学杂志，１９９３；２８（１２）：７２２４鲁进字，王汉涛，田野萍等。云芝多糖对小鼠免疫功能的影响。中国药学杂志，１９９５；３０（１）：１０５陈海生，廖时萱，谭建权。野生云芝多糖的初步分析。药学情报通讯，１９９０；８（３）：５８６李铁林，吴昌贤，张燕霞。糖和糖醇的气相色谱分析研究。分析化学，１９８２；１０（５）：２７２７王著
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