牛膝皂甙的化学成分研究＊王晓娟朱玲珍（第四军医大学药物研究所西安７１００３３）摘要目的：
牛膝（ＡｃｈｙｒａｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢｌ．）中所含皂甙为抗生育活性成分，分离获 得皂甙单体并阐明其结构，为抗生育药物筛选提供物质基础．方法：采用乙醇提取，硅胶低压柱分 离法获得两个皂甙单体，经化学和红外光谱（ＩＲ）、质谱（ＭＳ）、氢核磁共振（１ＨＭＲ）、 碳核磁共振（１３ＣＮＭＲ）及Ｃ－Ｈｃｏｓｙ新方法鉴定了结构，分别为牛膝皂甙Ⅰ和Ⅱ．结果 ：牛膝皂甙Ⅰ为３－０－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖－（１→３）－β－Ｄ－吡喃葡萄糖醛酸］－齐墩 果酸－２８－Ｏ－（β－Ｄ－吡喃葡萄糖），牛膝皂甙Ⅱ为３－０－（β－Ｄ－吡喃葡萄糖醛酸） －
齐墩果酸－２８－０－（β－Ｄ－吡喃葡萄糖）．结论：ＣＡ联机检索表明二者均为新皂甙．关 键词牛膝皂甙三萜皂甙中图号Ｒ２８４．１Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｓａｐｏｎｉｎｃｏｎｓｔ ｉｔｕｅｎｔｓｏｆＮｉｕＱｉ（ＡｃｈｙｒａｔｈｅｓＢｉｄｅｎｔａｔａ）ＷａｎｇＸｉａｏ ｊｕａｎ，ＺｈｕＬｉｎｇｚｈｅｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，Ｆ ｏｕｒｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＇ａｎ７１００３３Ａ ｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＳａｐｏｎｉｎｏｆＡｃｈｙｒａｔｈｅｓＢｉｄｅｎｔａ ｔａ＇ｓｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｈａｓａｒｏｌｅｏｆａｎｔｉｆｅｒｔｉｌ ｉｔｙ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆａｎｔｉｆｅｒｔｉｌ ｉｔｙｏｆＳａｐｏｎｉｎｆｕｒｔｈｅｒ，ｍｏｎｏｃｒｙｓｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｒｙｒｏｏｔｏｆｗｉｌｄ－ｇｒｏｗｉｎｇＡｃｈｙｒａｔ ｈｅｓＢｉｄｅｎｔａｔａａｎｄｔｈｅｉｒｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｅｒｅｄ ｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｍｏｎｏｃｒｙｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｅｔｈａｎｏｌａｂｓｔｒａｃｔｍｅｔｈｏｄａｎｄｓｉｌｉｃａｇｅｌ ｌｏｗ－ｐｒｅｓｓｕｒｅｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅｉｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒ ｍｉｎｅｄｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｓｐｅｃｔｒａｌａｎａｌｙｓｉ ｓ（ＩＲ，ＭＳ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲａｎｄｔｗｏｎｅｗＮＭＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）． Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｄｒｙｒｏｏｔｏｆｗｉｌｄ－ｇｒｏｗｉｎｇＡｃｈｙｒａｔｈｅｓＢｉ ｄｅｎｔａｔａｃｏｎｔｅｎｔｓｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｎｅｗｓａｐｏｎｉｎ，ｎａｍｅｄａｃ ｈｙｂｉｄｅｎｓａｐｏｎｉｎ（Ⅰ）ａｎｄａｃｈｙｂｉｄｅｎｓａｐｏｎｉｎ（Ⅱ）．Ｔｈｅ ｔｗｏｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅ３－０［α－Ｌ－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→ ３）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］－ｏｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄ－２８－ ０－（β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）（Ⅰ）ａｎｄ３－０－（β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒ ｏｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）－ｏｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄ－２８－０－（β－Ｄ－ｇｌｕｃｏ ｐｙｒａｎｏｓｙｌ）（Ⅱ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｓａｐｏｎｉｎｓ ｗｅｒｅｃｅｒｔｉｆｉｅｄａｓｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｎｅｗｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍ ｐｏｕｎｄｓｂｙＣＡｉｎｓｐｅｃｔ．ＫｅｙｗｏｒｄｓａｃｈｙｂｉｄｅｎｓａｐｏｎｉｎＴ ｒｉｔｅｒｐｅｎｅＳａｐｏｎｉｎ牛膝（ＡｃｈｙｒａｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢｌ．）系 苋科牛膝属植物的干燥根，我们所用药材为陕西野生牛膝，又名土牛膝．有逐瘀通经、引血下行之 功效，用于治疗瘀血症、淋病、经闭、胞衣不下等［１］．陕西民间用其引产，成功率高，副作用 小，优于同类药利凡诺尔．文献报道牛膝总皂甙有兴奋子宫作用［２］，有关牛膝皂甙的结构分析 国内外均未见报道．为开发利用土牛膝资源，进一步评价其疗效，我们对土牛膝皂甙成分进行了分 离和结构鉴定．１材料和方法１．１仪器熔点用ＸＲＣ－１型显微熔点测定仪（四川大学），红外 光谱用ＮｉｃｏｌｅｔＦＴ－ＩＲ２ＯＳ×Ｂ型红外光谱仪（日本），核磁共振谱用ＪＵＭＧ×４ ００型核磁共振仪（日本），质谱用ＶＧ２０－２５３型高分辨ＧＣ／ＭＳ／ＤＣ联用仪（日本） ，低压层析仪ＬＰ－Ⅱ型（成都）．１．２材料牛膝采自陕西勉县，由西北大学胡正海教授鉴定为 ＡｃｈｙｒａｔｈｅｓＢｉｄｅｎｔａｔａＢｌ．；柱层析填充剂硅胶Ｈ为青岛海洋化工厂产品； 高效硅胶薄层板为烟台化工研究所产品．溶剂系统①氯仿－甲醇－水（６５∶３５∶１０，下层） ，②正丁醇－乙酸乙酯－甲醇（４∶１∶１）．１．３方法１．３．１提取和分离牛膝干燥粗粉４ ｋｇ，用乙醇热回流提取２次，每次４ｈ，合并提取液，减压浓缩，得浸膏４２５ｇ，加水搅拌后 ，静置过滤，滤液依次用乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇萃取液减压浓缩得浅黄色固体约４ ６ｇ，为总皂甙．取总皂甙２５ｇ，分５次进行硅胶低压柱层析，干法上样，用溶剂系统①连续洗 脱，收集４０份，每份约５０ｍｌ，薄层检查，斑点相同者合并，共得６部分，将较纯的２部分分 别用甲醇重结晶得晶Ｉ１．５ｇ，晶Ⅱ０．５ｇ．１．３．２结构鉴定晶Ｉ为白色针晶，熔点２１ ０．０℃～２１１．０℃，其水溶液振摇后产生持久性泡沫，有溶血性，Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂ ｕｒｃｈａｒｄ反应紫红色，Ｍｏｌｉｓｈ反应阳性，化学反应证明晶Ｉ是三萜皂甙．质谱（ＦＡ Ｂ－ＭＳ）Ｍ／Ｚ：９６３（Ｍ＋Ｎａ）＋、８１７（Ｍ＋Ｎａ－１４６）＋、６５６（Ｍ＋Ｎａ －１４６－１６２＋Ｈ）＋、４３９（甙元－Ｈ０＋Ｈ）＋；ＩＲ数据见Ｔａｂ１；１ＨＮＭＲ（ Ｃ５Ｄ５Ｎ）数据见Ｔａｂ２；１３ＣＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）数据见Ｔａｂ３，４．依据文献方法 ［３］，将晶Ｉ在高效薄层板上酸水解，与已知糖标准品对照，检出葡萄糖，葡萄糖醛酸和鼠李糖 ，结合薄层扫描，测得糖的比例为１∶１∶１．晶Ⅱ白色针晶，熔点２２８．０℃～２３０．０℃ ，其水溶液振摇后产生持久性泡沫，有溶血性Ｌｉｂｅｒ－ｍａｎｍ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ反应紫红 色，Ｍｏｌｉｓｈ反应阳性，化学反应证明晶Ⅱ是三萜皂甙．质谱ＦＡＢ－ＭＳＭ／Ｚ：８１７（ Ｍ＋Ｎａ）＋、６５５（Ｍ＋Ｎａ－１６２）＋；ＩＲ光谱数据见Ｔａｂ１；１ＨＮＭＲ（Ｃ５Ｄ ５Ｎ）数据见Ｔａｂ２；１３ＣＮ－ＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）数据见Ｔａｂ３，４．依据文献方法［３ ］，将晶Ⅱ在高效薄层板上酸水解，与已知糖标准品对照，检出葡萄糖和葡萄糖醛酸，结合薄层扫 描，测得糖的比例为１∶１．表１皂甙的红外光谱Ｔａｂ１ＲＩｏｆｓａｐｏｎｉｎ（ｃｍ－１） ＳａｐｏｇｅｎｉｎⅠＳａｐｏｇｅｎｉｎⅡ３４００１０８５３５００２９５０１０７６２９５ ０１７４０１０４０１７４０１６５０１０３０１６２０１４６５８９０１４８０１３９０８２０ １０９０～１０３０２结果由化学反应可见，晶Ｉ与晶Ⅱ均为三萜皂甙，二者在高效薄层板上酸水 解，用溶剂系统①氯仿－甲醇（９∶１）与②苯－乙酸乙酯（７∶３）展开，Ｒｆ值与齐墩果酸对 照品一致，表明为同一物质．比较晶Ｉ、晶Ⅱ甙元部分与齐墩果酸对照品的１３ＣＮＭＲ值（Ｔａ ｂ３），证明晶Ｉ与晶Ⅱ的甙元均为齐墩果酸（Ｆｉｇ１）．表２皂甙的氢核磁共振化学位移值Ｔ ａｂ２１ＨＮＭＲｃｈｅｍｉｃａｌｓｈｉｆｔｓｏｆｓａｐｏｎｉｎ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）Ｓａｐｏｇ ｅｎｉｎⅠＳａｐｏｇｅｎｉｎⅡ０．８５０．８～２．１０．８５～１．２８０．８８３．１４ ．０～４．６０．９１４．０～５．１５．０１１．０５４．９６．３１１．１４６．３１．２１ ６．３４图１齐墩果酸、皂甙Ⅰ和皂甙Ⅱ的化学结构Ｆｉｇ１Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒ ｅｏｆｏｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄ，ｓａｐｏｎｉｎⅠａｎｄⅡ晶Ｉ由ＦＡＢ－ＭＳ得分子离子 峰９６３（Ｍ＋Ｎａ），减去甙元质量数４５６，余５０７，表明分子中有３个糖基，由晶Ｉ的薄 板水解可知三个糖分别是葡萄糖、葡萄糖醛酸和鼠李糖．由晶Ｉ的１３ＣＮＭＲ－１ＨＮＭＲＣＯ ＳＹ可知三个糖基的端基质子信号分别出现在４．９，６．３和６．３４ｐｐｍ，在３．９５～４ ．７０谱区各糖基质子信号彼此重迭，用一般方法难以确定其归属，逐采用了一维多重接力ＣＯＳ Ｙ新方法作了研究［４］，此法可以从高度重迭的谱峰中分离和识别出每个糖基内质子信号．结果 获得了三个糖基的全部质子信号，各糖基质子的化学位移和偶合常数总结于Ｔａｂ５．晶Ｉ的１３ ＣＮＭＲ中显示的三个糖端基碳信号：９５．７、１０２．９、１０７．０ｐｐｍ信号，确定了各 糖的构型，葡萄糖与葡萄糖醛酸为β－Ｄ－型，鼠李糖为α－Ｌ－型．糖的连接位置由碳谱推出， ９５．７ｐｐｍ信号指示甙元２８位与葡萄糖成酯链连接；８９．１ｐｐｍ信号表明甙元３位与葡 萄糖醛酸连接，８２．２ｐｐｍ信号表明鼠李糖连接在葡萄糖醛酸的３位上（Ｔａｂ４），再结合 ＮＯＥ差谱选择激发鼠李糖的１－Ｈ，ＮＯＥ增值信号在葡萄糖醛酸的３－Ｈ，ＮＯＥ增加了１３ ．１％，由ＮＯＥ效应与核间距关系，也可确定鼠李糖连接于葡萄糖醛酸的３－位上，从而测定晶 Ｉ的结构为３－０－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖（１→３）－β－Ｄ－吡喃葡萄糖醛酸］－齐墩果酸－ ２８－０－（β－Ｄ－吡喃葡萄糖）（Ｆｉｇ１）．表３皂甙元的碳核磁共振化学位移值Ｔａｂ３ １３ＣＮＭＲｃｈｅｍｉｃａｌｓｈｉｆｔｓｏｆａｇｌｙｃｏｎｅｍｏｉｅｔｉｅｓ（Ｃ５Ｄ５ Ｎ）ＣＳａｐｏｇｅｎｉｎⅠⅡＯｌｅａｎｄｉｃａｃｉｄ１３８．９３８．５３８．６２２８．０２８．０２８．１３７７．９８９．１８９．１４３９．２３９．４３９．５５５５．７５５．６５５．７６１８．７１８．６１８．５７３３．２３２．５３２．５８３９．６３９．８３９．８９４８．１４８．０４８．０１０３７．３３６．８３６．９１１２３．７２３．３２３．４１
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