天鸽口服液质量标准研究成都中医药大学（６１００７５）吴纯洁，李丹，雷佩琳华西医科大学洪诤 提要对天鸽口服液组成药物天麻、
酸枣仁、白芍、人参进行了薄层鉴别；用高效液相色谱法测定了 天麻素和总氨基酸的含量。方法简便，专属性强及重现性好，可用为天鸽口服液的质量控制。关键 词天鸽口服液，
薄层鉴别，高效液相色谱法，
天麻素，总氨基酸ＳｔｕｄｙｏｎＱｕａｌｉｔｙＳ ｔａｎｄａｒｄｓｏｆＴｉａｎｇｅＯｒａｌＬｉｑｕｉｄ￥（ＲｈｉｚｏｍａＧａｓｔｒｏｄｉ ａｅＳｅｍｅｎＺｉｚｉｐｈｉＳｐｉｎｏｓａｅ，ｅｔｃ．）ＷｕＣｈｕｎｊｅ；ＨｏｎｇＺｈ ｅｎｇ；ｅｔａｌ．（ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＭ，Ｃｈｅｎｇｄｕ，６１ ００７５ＷｅｓｔＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈ ｅｎｇｄｕ，６１００４１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲｈｉｚｏｍａＧａｓｔｒｏｄｉａｅ，Ｓｅｍ ｅｎＺｉｚｉｐｈｉＳｐｉｎｏｓａｅ，ＲａｄｉｘＰａｅｏｎｉａｅＡｌｂａａｎｄＲａｄｉｘ ＧｉｎｓｅｎｇｉｎＴｉａｎｇｅＯｒａｌＬｉｑｕｉｄｈａｖｅｂｅｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙＴＬＣ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎａｎｄｔｏｔａｌａｍｉｎｏａｃ ｉｄｓｗｅｒｅａｌｓｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．Ｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓａｒ ｅｓｉｍｐｌｅｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｇｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃ ｉｂｉｌｉｔｙ，ｃａｎｂｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＴｉａｎｇｅＯｒ ａｌＬｉｑｕｉｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＴｉａｎｇｅＯｒａｌＬｉｑｕｉｄ，ＴＬＣ－ｉｄｅｎ ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＨＰＬＣ，ｇａｓｔｒｏｄｉｎ，ｔｏｔａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．天 鸽口服液由天麻、酸枣仁、白芍、人参等组成。用薄层层析法和高效液相色谱法分别对方中天麻、 酸枣仁、白芍和人参进行了定性鉴别；对天麻素和总氨基酸的含量进行了定量测定，结果满意。１ 仪器与试药日本岛津ＬＣ－６Ａ高效液相色谱仪；日立８３５－５０型氨基酸分析仪；ＵＶ－１型 三用紫外分析仪；所用试剂均为分析纯；天麻素、人参二醇、芍药甙对照品（中国药品生物制品检 定所），酸枣仁对照药材（按质量标准用对照品研究的技术要求制订）。２天麻的薄层鉴别供试品 溶液的制备：取样品２０ｍｌ，浓缩至稠膏状，加甲醇１０ｍｌ，搅匀，滤过。滤液浓缩至１ｍｌ ，即得。阴性对照品溶液的制备：原方去天麻后，按比例配方，参照“供试品溶液的制备”方法制 备，即得。对照品溶液的制备：取天麻素对照品，加中醇制成每１ｍｌ含１ｍｇ的溶液，即得。薄 层层析：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，阴性对照品溶液，对照品溶液各５－ １０μｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以醋酸乙酯—甲醇—水（９：１：０．２）为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，在１０５℃烘约１０ｍｉｎ。供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照品色谱在与对照品色谱相应的位置上无相应斑 点。５酸枣仁与白芍的薄层鉴别供试品溶液的制备：取样品２５ｍｌ，用水饱和的正丁醇提取２次 ，每次２５ｍｌ。合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤２次，每次２５ｍｌ。分取正丁醇，蒸干， 残渣加甲醇２ｍｌ使溶解，即得。阴性对照品溶液的制备：原方分别去酸枣仁、白芍后，按比例配 方，参照“供试品溶液的制备”方法制备，分别得缺酸枣仁阴性对照品溶液和缺白芍阴性对照品溶 液。对照品溶液的制备：取酸枣仁对照药材粉末１ｇ，加乙醚２０ｍｌ，加热回流１ｈ，滤过，滤 渣用乙醚１０ｍｌ洗涤。弃去乙醚液，挥干，加正丁醇２０ｍｌ，加热回流１ｈ，滤过，滤液蒸干 。残渣加甲醇０．５ｍｌ使溶解，得酸枣仁对照药材溶液；取芍药甙对照品，加甲醇制成每１ｍｌ 含１ｍｇ的溶液，即得。薄层层析：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、阴性对照 品溶液、对照品溶液各１０μｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水（ １５：４０：２２：１０）１０℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸 乙醇溶液（１→１０），在１０５℃烘数分钟，分别置紫外光灯（３６５ｎｍ）下及日光下检视。 供试品色谱中，在与酸枣仁对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与芍药甙对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对本校１９８２级毕业生。照品色谱在与对照药 材、对照品色谱的相应位置上无相应斑点。４人参的薄层鉴别供试品溶液的制备：取样品２５ｍｌ ，用水饱和的正丁醇提取２次，每次２５ｍｌ，合并提取液，用正丁醇饱和的水洗涤２次，每次２ ５ｍｌ。分取正丁醇，蒸干，加７％硫酸的４５％乙醇溶液２５ｍｌ，置水浴上回流１ｈ，冷却， 用石油醚（６０～９０℃）提取３次，每次１５ｍｌ。合并提取液，挥干，残渣加甲醇溶解使成０ ．５ｄ，即得。阴性对照品溶液的制备：原方去人参后，按比例配方，参照“供试品溶液的制备” 方法制备，即得。对照品溶液的制备：取人参二醇对照品，加甲醇制成每１ｍｌ含１ｍｇ的溶液， 即得。薄层层析：照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，阴性对照品溶液，对照品溶 液各１０μｌ分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以苯—丙酮（５：２）为展开剂，展开，取出，晾干 ，喷以硫酸乙醇溶液（３→１０），在１０５℃烘数分钟，至斑点显色清晰后，置紫外光灯（３６ ５ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对 照品色谱在与对照品色谱相应的位置上无相应荧光斑点。５天麻素含量测定５．１色谱条件色谱柱 ：ＳｈｉｍｐａｃｋＣＬＣ－ＯＤＳ（１５０×６ｍｍｉ．ｄ，５μｍ）；保护柱：自填国产—Ｙ ＷＧＣ１８（１０×４．６ｍｍｉ．ｄ，１０－４０μｍ）；流动相：甲酵－０．２ｍｏｌ／Ｌ硫 酸铵（５：９５）；流速：１ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：２７０ｎｍ。５．２标准曲线精密称取天 麻素对照品适量，用水分别配制成天麻素标准溶液，１２７．８，２５５．６，３８３．４，５１ １．２，６３９．０μｇ／ｍｌ。分别精密吸取１０μｌ标准溶液注入高效液相色谱仪测定，并以 天麻素峰面积积分值对进样量（μｇ）进行回归处理，得回归方程及相关系数为：Ｙ＝－８６６． ５７８＋４２９９５．６ｘ；ｒ＝０．９９９９１３。而在实际含量测定中，考虑到流动相配制的 误差等因素的影响，采取随行标准法，计算供试品中天麻素的含量。５．３ 精密度试验进样精密 度试验：对照品溶液（０．４２６ｍｇ／ｍｌ）１０μｌ连续５次进样，峰面积积分值分别为１７ ９４６６，１８１９６５，１７８３３２，１８０５１３，１８０１７０，ＲＳＤ＝０．７４％； 测定方法精密度试验：在５个不同日期对同一批供试品（批号：９３０８１４），按样品项下的方 法进行操作，测定结果见表１。５．４样品测定精密吸取样品５．００ｍｌ置１０ｍｌ量瓶中，加 水稀释至刻度，摇匀，滤过。分别吸取对照品溶液，供试品溶液各１０μｌ注入高效液相色谱仪， 按上述色谱条件测定，结果见表２，色谱图见图１。５．５回收率试验采用空白加样回收法，精密 吸取缺天麻空白样品５．００ｍｌ，加入天麻素对照品适量（３个不同水平），按样品测定项下方 法操作（每个水平操作５次），测定结果见表３。６总氨基酸含量测定６．１主要色谱条件色谱柱 采用日立－＃２６１９阴离子交换树脂，内径２．６ｍｍ，长１５０ｍｍ。洗脱方式为４段梯度洗 脱，由计算机控制，柠檬酸缓冲液为洗脱液，流速０．２２５ｍｌ／ｍｉｎ，泵压１１－１２ＭＰ ａ。茚三酮为显色剂，显色剂溶液流速０．３ｍｌ／ｍｉｎ，泵压３－４ＭＰａ，以５７０ｎｍ和 ４４０ｎｍ波长同时检出，色谱柱温度５１℃，反应浴温度９８℃，反应圈内径０．２５ｍｍ，长 ２０ｍｍ，进样体积５０μｌ，数据由计算机处理，直接打印出分析报告。６．２技术指标该方法 最小检出量：１０－１０克分子／５０μｌ；定量测定重现性变异系数值：＜２．５％。６．３样 品测定精密吸取样品１．０ｍｌ置１００ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再从中精密吸取５ ０μｌ注入氨基酸分析仪，按上述色谱条件进行测定，结果见表４。７小结与讨论人参的薄层鉴别 ，以人参皂甙Ｒｂ１，Ｒｅ，Ｒｇ１为对照，但缺人参阴性对照有干扰；以人参二醇、人参三醇为 对照品，在人参三醇对照品相应位置上，荧光斑点受干扰，重现性不好。故人参的薄层鉴别仅以人 参二醇作为对照品，即重现性好，缺人参阴性对照无干扰。天麻素的含量测定，由于处方中成分相 当复杂，天麻素含量按外标法进行计算（《中国药典》１９９０年版一部附录６１页）。流动相中 加入０．２ｍｏｌ／Ｌ硫酸铵有利于降低柱压和提高分离度。高效液相色谱法测定天麻素和总氨基 酸的含量，方法稳定，结果准确。但考虑到原生药材的来源不同，各个批号的含量有一些差异，因 此，确定了含量下限，作为控制其质量的标准。天鸽口服液质量标准研究@吴纯洁，李丹，雷佩琳 ，洪诤$成都中医药大学，华西医科大学天鸽口服液，薄层鉴别，高效液相色谱法，天麻素，总氨 基酸对天鸽口服液组成药物天麻、酸枣仁、白芍、人参进行了薄层鉴别；用高效液相色谱法测定了 天麻素和总氨基酸的含量。方法简便，专属性强及重现性好，可用为天鸽口服液的质量控制。人参 后，按比例配方，参照“供试品溶液的制备”方法制备，即得。对照品溶液的制备：取人参二醇对 照品，加甲醇制成每１ｍｌ含１ｍｇ的溶液，即得。薄层层析：照《中国药典》薄层色谱法试验， 吸取供试品溶液，阴性对照品溶液，对照品溶液各１０μｌ分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以苯—丙酮（５：２）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液（３→１０），在１０５℃烘数分钟，至斑点显色清晰后，置紫外光灯（３６５ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照品色谱在与对照品色谱相应的位置上无相应荧光斑
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