白及胶的实验研究湖北中医学院（４３００６１）芦金清，张亚东提要白及经水提醇沉得到白及胶， 收率为９．８％；醋酸纤维薄膜电泳证明为均一多糖；凝胶过滤法测得平均分子量１８３０００； 水解后纸层折和乙酰化衍生物的气相层折表明白及胶含有Ｄ─葡萄糖和Ｄ─甘露糖；蒽酮─硫酸法 测定白及胶的含量为９８．８５％。关键词白及胶，多糖，制备，测定白及胶系从兰科植物白及中 经水提醇沉得到的一种多糖的干粉，是传统中药白及的主要成分。白及胶在制剂中常用作为膜剂的 成膜材料，液体药剂中的助悬剂和乳化剂，糊剂的基质等。因其具有收敛止血，消肿生肌等特效而 应用于临床，外治烫火烧伤，跌打刀伤；内治消化道出血，溃疡等症。为此我们对白及胶的提取纯 化，理化性质等进行了研究。１材料和仪器白及饮片购于湖北中医学院专家门诊部中药房，鉴定为 兰科植物白及Ｂｌｔｔｉｌｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ；Ｄ─葡萄糖和 Ｄ─甘露糖对照品均为上海化学试剂二厂产品；ＤＥＡＥ─纤维素（ＧＦ─８３）为ｗｈａｔｍａ ｎ产品；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ─２００以及葡聚糖Ｔ─１０，Ｔ─２０，Ｔ─４０，Ｔ─７０，Ｔ ─９０均为瑞典Ｐｈａｒｍａｃｉａ产品；７５１Ｇ型分光光度计（上海分析仪器厂）；气相层析 仪（日本ＧＣ─ＲＩＡ）。２白及胶的制备白及粗粉加８０％乙醇回流提取５ｈ，回收乙醇，药渣 干燥后用沸水提取３次，提取液减压浓缩后，加乙醇使其含醇量为８０％，放置过夜，沉淀物离心 过滤，挥干溶煤，再溶于水，按０．１％加活性炭脱色，滤过，溶液再加乙醇至含醇量为８０％， 静置１２ｈ，滤过，沉淀相继用无水乙醇，丙酮依次洗涤８次，置６０℃烘干得白及胶干粉，收率 为９．８％。３白及胶的理化分析本品为白色无味无臭，可溶于水并形成粘性溶液的干粉；用乙醇 沉淀法和α─萘酚浓硫酸法呈正反应；Ｆｉｌｌｉｎ氏试剂呈阴性反应，但经２ｍｏｌ／ＬＨ２Ｓ Ｏ４加热水解后的溶液可与Ｆｉｌｌｉｎ氏试剂作用，产生棕红色氧化亚铜沉淀；以蒸馏水溶解用 精密ｐＨ试纸测定酸碱度为ｐＨ＝６．０；以蒸馏水配成２％胶浆溶液，按药典法分别测定相对密 度为１．０１和粘度为９．１ｍｍ２／ｓ（２５℃）；旋光度按药典法测定为［α］Ｄ２５─３１ ．６°（ｃ，０．９，Ｈ２Ｏ）。４白及胶的纯度分析采用醋酸纤维薄膜电泳法。醋酸纤维薄膜（ ２×８ｃｍ），加样量４μｇ／μｌ，硼砂缓冲液（０．２ｍｏｌ／Ｌ硼酸与０．５ｍｏｌ／Ｌ氢 氧化钾（１：１）混合，ｐＨ１２），电压３８０Ｖ，时间１ｈ，碘─氯仿显色，结果表明白及胶 呈单一棕色色带。５白及胶的分子量测定采用凝胶过滤法［１］。ＳｅｐｈａｄｅｘｇＧ─２００ 层析柱（１６×５３０ｍｍ），上样量１０ｍｌ，浓度为２０ｍｇ／ｍｌ，０．１ｍｏｌ／ＬＮａ Ｃｌ洗脱，流速２０ｍｌ／ｈ，苯酚─硫酸法进行检测，以葡聚糖为标准品，作图，分别求得洗脱 体积Ｖｅ，由Ｖｅ＝ｋ１－ｋ２，ｌｏｇｍｗ求得白及胶分子量。结果表明白及胶的平均分子量为 １８３０００。６白及胶的单糖组成分析取样品加２ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液，于１００℃水解８ｈ。 水解液加碳酸钡至溶液是中性，过滤，滤液浓缩至适量，供作纸层分析。以标准单糖对照，滤纸为 中华中速层析滤纸，展开剂Ⅰ：甲苯─乙酸乙酯─甲酸（５：４：１）；展开剂Ⅱ：正丁醇─乙酸 ─水（４：１：５）；展开方式下行，展开时间１６ｈ，显色剂用草酸苯胺试剂，喷雾于１００℃ 加热５ｍｉｎ。结果表明，白及胶含Ｄ─葡萄糖和Ｄ─甘露糖。另将白及胶水解物用ＮａＢＨ４室 温还原２ｈ，然后通过强酸性阳离子交换树脂。洗脱液浓缩至适当体积，加入醋酐─吡啶（１：１ ）溶液于１００℃乙酰化２０ｍｉｎ。抽干，残余物用少量甲醇溶解，反复处理多次，抽干，转变 成单糖的还原乙酰化产物［２］。进行气相层析检定，氢火焰检测器，填充柱：３％ＯＶ─２２５ ／ＡＷ─ＤＭＣＳ─Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ，Ｗ，８０─１００目，０．３ｃｍ×２．０ｔｎ，载 气Ｎ２，２０ｍｌ／ｍｉｎ。气相层析的结果表明，白及多糖是由Ｄ─葡萄糖和Ｄ─甘露糖组成。 ７白及胶的含量测定采用蒽酮法［３］。测定条件考察：分别考察显色剂蒽酮加入量，浓度和稳定 性对吸收度的影响。结果表明，白及胶在酸性条件下与蒽酮生成绿色，在６２０ｎｍ波长处有最大 吸收。选用６２０ｎｍ为测定波长，显色剂蒽酮浓度为０．４％，用量在３－４ｍｌ时吸收度最高 ，并在１－２ｈ内稳定性较好。标准曲线建立：精密称取葡聚糖Ｔ－２０，１０ｍｇ置于１００ｍ ｌ量瓶中，以蒸馏水溶解，定容为标准液。精密吸取标准溶液０．２，０．３，０．４，０．６， ０．８，１．０ｍｌ，分别置于干燥具塞试管内，分别加蒸馏水１．８，１．７，１．６，１．４ ，１．２，１．０ｍｌ，加０．４％蒽酮硫酸溶液４．０ｍｌ摇匀，放冷至室温，于６２０ｎｍ波 长处测定吸收值，绘制标准曲线。样品测定：精密称取白及胶２０ｍｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加蒸 馏水溶解至刻度，摇匀。精密吸取此液１，０ｍｌ，加０．４％蒽酮硫酸液３ｍｌ，在６２０ｎｍ 波长处测定吸收度。根据标准曲线的含量，计算出样品含量。结果表明，３次测定白及胶的平均含 量为９８．８５％。参考文献｜｜１方积年，等。生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（３ ）：２２２２吴梧桐，等，生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（４）：３９３３张惟杰， 等。复合多糖生化研究技术，上海科技出版社，１９８７．７白及胶的实验研究@芦金清，张亚东 $湖北中医学院白及胶，多糖，制备，测定白及经水提醇沉得到白及胶，收率为９．８％；醋酸纤 维薄膜电泳证明为均一多糖；凝胶过滤法测得平均分子量１８３０００；水解后纸层折和乙酰化衍 生物的气相层折表明白及胶含有Ｄ─葡萄糖和Ｄ─甘露糖；蒽酮─硫酸法测定白及胶的含量为９８ ．８５％。１方积年，等。生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（３）：２２２２吴梧桐， 等，生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（４）：３９３３张惟杰，等。复合多糖生化研究 技术，上海科技出版社，１９８７．７ｌ，加０．４％蒽酮硫酸液３ｍｌ，在６２０ｎｍ波长处测 定吸收度。根据标准曲线的含量，计算出样品含量。结果表明，３次测定白及胶的平均含量为９８ ．８５％。参考文献｜｜１方积年，等。生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（３）：２２ ２２吴梧桐，等，生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（４）：３９３３张惟杰，等。复合 多糖生化研究技术，上海科技出版社，１９８７．７白及胶的实验研究@芦金清，张亚东$湖北中 医学院白及胶，多糖，制备，测定白及经水提醇沉得到白及胶，收率为９．８％；醋酸纤维薄膜电 泳证明为均一多糖；凝胶过滤法测得平均分子量１８３０００；水解后纸层折和乙酰化衍生物的气 相层折表明白及胶含有Ｄ─葡萄糖和Ｄ─甘露糖；蒽酮─硫酸法测定白及胶的含量为９８．８５％。１方积年，等。生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（３）：２２２２吴梧桐，等，生物化学与生物物理学报，１９８４，１６（４）：３９３３张惟杰，等。复合多糖生化研究技术，上海科技出版社，１９８７．７
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