维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ｃａ~（２＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）上海医科大学 中山医院郭棋，彭天庆，顾全保，赵剑星，杨英珍我们在证实了病毒感染早期细胞Ｃａ（２＋）内 流增加的基础上，进一步观察维拉帕米（Ｖｅｒ）对柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染培养心肌细 胞Ｇａ（２＋）内流及其对感染细胞ＣＶＢ３—核糖核酸（ＲＮＡ）复制的作用。１材料与方法新 生ＳＤ大鼠取心室肌用胰蛋白酶分次消化，细胞分装后３７℃培养，１８小时后病毒组加１００半 数组织培养感染量（ＴＣＩＤ５０）ＣＶＢ３（Ｎａｎｃｙ株）感染。①感染４８小时后，用Ｖｅ ｒ（１μｍｏｌ／Ｌ）作预处理５分钟加４５Ｃａ（２＋）的标记液，３７℃ １、５、１０分钟 ，７％山梨醇（冰浴）洗３次，加十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）后取样品做液闪计数（ｃｐｍ），从 而计算出Ｃａ（２＋）内流量，观察Ｖｅｒ对Ｃａ（２＋）内流的影响；②感染１小时后，加Ｖｅ ｒ（１μｍｏｌ／Ｌ及１０ｎｍｏｌ／Ｌ）处理４８小时，提取细胞总ＲＮＡ，用地高辛标记的Ｃ ＶＢ３Ｃ脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）探针（２．６ｋｂ长，位于ＣＶＢ３病毒基因５′端）作斑点 杂交，在岛津ＣＳ－９１０扫描仪上对杂交阳性信号逐个进行反射扫描，并计算反射峰面积与其相 应的总ＲＮＡ量的比值，观察Ｖｅｒ对ＣＶＢ３－ＲＮＡ复制的作用。２结果与讨论Ｖｅｒ对ＣＶ Ｂ３感染的心肌细胞Ｃａ（２＋）内流的影响：感染４８小时后，Ｃａ（２＋）流入心肌细胞的各 时间点（１、５、１０分钟），Ｖｅｒ处理的心肌细胞Ｃａ（２＋）内流显著减少（Ｐ＜０．０１ ）。显示Ｖｅｒ作为钙拮抗剂，可显著减少病毒感染引起的心肌细胞Ｃａ（２＋）内流增加。Ｖｅ ｒ对培养心肌细胞ＣＶＢ３－ＲＮＡ复制的作用：阳性杂交信号经反射扫描后得到的反射峰面积反 映被检测ＣＶＢ３－ＲＮＡ的相对含量。结果表明，在心肌细胞总ＲＮＡ含量相同（５μｇ）的情 况下，Ｖｅｒ＋ＣＶＢ３组反射峰面积（６８４０±２０５９μｍ２）显著大于病毒对照组（３８ ２３±２０５９μｍ２，Ｐ＜０．０５），而且在降低９９％使用浓度（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）时这 种作用依然显著（Ｐ＜０．０５），这无疑会进一步加重心肌感染。可见，Ｖｅｒ在心肌细胞中能 显著地促进ＣＶＢ３－ＲＮＡ的复制。本文结果提示在临床治疗急性病毒性心肌炎或病毒感染引起 的一过性心律失常时，使用Ｖｅｒ可能弊多利少，至少应持慎重态度。（编辑：梅平）维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ｃａ~（２＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）@郭棋，彭天庆，顾全保，赵剑星，杨英珍$上海医科大学中山医院
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