神经生长因子防止神经损伤后近端逆行变性及促进再生的实验研究马金忠，罗永湘目前治疗周围神经 损伤的效果已达到一个平台期，而功能恢复仍不理想。许多学者开始研究神经再生微环境中的一些 因子对促进轴突的作用。近来的研究认为神经生长因子（ＮＧＦ）对运动神经元亦有明显的生物学 作用［１］。本文通过在损伤处应用外源性ＮＧＦ来探讨其能否防止损伤近端神经纤维及运动神经 元的逆行性变性和促进轴突再生。材料与方法（一）、实验模型Ｗｉｓｔａｒ大鼠４５只，重２０ ０～２５０ｇ，雌雄不拘。在两侧股骨中部切断坐骨神经，硅胶管（长１０ｍｍ，内径１．５ｍｍ ）桥接两神经断端，两断端相距６ｍｍ，右侧管内注入ＮＧＦ（２．５Ｓ，牛精液提纯，６００ｕ ｇ／ｍｌ），左侧室内注入生理盐水（ＮＳ）为对照。（二）、检测指标（１）大体观察：术后７ 、１４、３０天剪开硅胶管观察神经再生情况；（２）超微结构观察；术后３、１４、３０天神经 近侧残瑞和再生神经干取材，透射电镜观察神经纤维逆行变性及神经再生情况；（３）ＣＢ－ＨＲ Ｐ逆行神经追踪脊髓运动细胞计数：术后３个月，在鼠两侧腓骨肌处注入５ｕｌ类霍乱毒－辣根过 氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ），协和医科大学提供），４８小时后心脏灌注固定，脊髓超薄４０ｕｍ 恒冷箱冰冻切片，ＴＢＭ－ＡＨＭ法显色脊髓运动细胞。结果术后７天剪开硅胶管，左右侧神经断 端的距离不同，ＮＧＦ侧神经再生快（２．９８±０．１８４／５．０６±０．２３２），两者有 显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＮＧＦ侧近侧残端膨大增粗，ＮＳ侧变化不明显。术后１４天ＮＧ Ｆ侧两神经断端被半透明的再生组织桥接，而ＮＳ侧两神经断端仍有距离。术后３０天ＮＧＦ侧再 生神经直径已接近两端的神经干，再生神经表面光滑无瘢痕。ＮＳ侧再生神经直径细呈半透明状， 其变化类似ＮＧＦ侧１４天的变化。
透射电镜观察：术后３天ＮＳ侧断端近侧轴突发生明显的逆行 Ｗａｌｌｅｒａｎ变性，线粒体、内质网、囊泡等细胞器崩解，髓鞘变薄、崩解。许多吞噬细胞吞 噬破裂的轴突和随鞘。而ＮＧＦ侧髓鞘厚度无明显变化，神经微丝、微管、线粒体及囊泡结构完整 。术后１４天ＮＧＦ侧神经轴突发出许多新生的被雪旺氏细胞鞘包裹的轴突芽，术后３０天ＮＧＦ 侧再生轴突均已髓鞘化，厚度接近正常，再生轴突粗大，形态规则。ＮＳ对照侧再生轴突也髓鞘化 ，但厚度薄，形态不规则，再生轴突细小。ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓运动细胞呈小蓝黑点状染色， ＮＧＦ侧被标记的运动细胞数明显比ＮＳ侧多（４．２±０．９７４／２．３±０．４８３），两 者有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。讨论以往研究认为ＮＧＦ主要对交感和感觉神经元有生物学作 用，最近研究证明ＮＧＦ对运动神经元有明显作用。当神经损伤后，其相应胞体和轴突可迅速提高 ＮＧＦ受体的ｍＲＮＡ和低亲和力ＮＧＦ受体的免疫反应表达水平［２］，这些表达的受体可起到 局部聚集ＮＧＦ和促进再生轴突利用ＮＧＦ［３］。ＮＧＦ可使再生轴突延长和促进轴突髓鞘化［ ４，５］。通过大体观察可见实验侧比对照侧生长速度明显加快（Ｐ＜０．０１）。透射电镜观察 ，在神经损伤后早期，ＮＧＦ侧神经髓鞘厚度无明显变化，轴突内线粒体、微丝、微管等细胞器结 构完整，而ＮＳ对照侧则发生明显的逆行性变性，线粒体、囊泡等细胞器聚集碎裂，髓鞘厚度变薄 ，轴突直径变细。巨噬细胞活跃，吞噬破裂的轴突和髓鞘。术后１４天ＮＧＦ侧神经纤维长出许多 新轴突芽，且其被雪旺氏细胞鞘包裹，而对照侧未见再生的轴突芽。通过ＣＢ－ＨＲＰ逆行神经追 踪计数被ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓运动细胞数，ＮＧＦ侧较ＮＳ侧明显多（Ｐ＜０．０１）。表明 ＮＧＦ通过轴突逆行运输，对相应的运动细胞有保护作用。实验结果证实，外远性ＮＧＦ可防止神 经损伤后近端神经纤维及胞体逆行变性，促进了神经再生，缩短了神经再生到靶器官的时间，使肌 肉尽快恢复功能。作者单位：２０００８５，上海市第一人民医院骨科（马金忠）；同济医科大学 附属同济医院骨科（罗永湘）参考文献｜｜１ＩｕｎｄｂｏｒｇＧ．Ｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａ ｔｉｏｎｐｒｏｂｌｅｍｓｉｎａｃｌｉｎｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．ＲｅｓｔｏｒＮｅ ｕｒｏｌＮｅｕｒｏｓｃｌ，１９９０，１：２９７．２ＥｒｎｆｏｒｇＰ，ＥｂｅｎｄａｌＴ， ＯｌｓｏｎＬ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌｌｉｎｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｎｅｒ ｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｖｏｋｅｓｇｒｏｗｔｈｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｉｎｔｒｉｎ ｓｉｃａｎｄｇｒａｆｔｅｄｃｅｎｔｒａｌｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｓ．Ｐｒｏｃ ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９８９，８６：４７５６．３ＲｅｎｄｅＭ，ＨａｇｙＴ，Ｍ ａｎｔｈｏｒｐｅＭ，ｅｔａｌ．Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｉｍｍ ｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｎｅｕｒｏｎｓｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌａｄｕｌｔｒａｔｓｐ ｉｎａｌｃｏｒｄａｎｄｉｔｓｍｏｄｕｌａｔｉｏｎａｆｔｅｒｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖ ｅｌｅｓｉｏｎｓ．ＪｃｏｍｐＮｅｕｒｏｌ，１９９２，３１９：２８５．４ＷａｙｎｅＤＢ， ＨｅａｔｏｎＭＢ．Ｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｔｒｉｇｅｍｉｎａｌａｎｄｓ ｐｉｎａｌｃｏｒｄｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｔｏｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ，１９９０，３８：４７３．５ＦａｎＸ．ＧｅｌｍａｎＢＢ，Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌｎ ｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｉｎｉ ｔｉａｔｉｏｎｏｆｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，１９９２，３１ ：５８．神经生长因子防止神经损伤后近端逆行变性及促进再生的实验研究@马金忠，罗永湘$上 海市第一人民医院骨科，同济医科大学附属同济医院骨科１ＩｕｎｄｂｏｒｇＧ．Ｎｅｒｖｅｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｂｌｅｍｓｉｎａｃｌｉｎｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｒｅ ｓｔｏｒＮｅｕｒｏｌＮｅｕｒｏｓｃｌ，１９９０，１：２９７．２ＥｒｎｆｏｒｇＰ，Ｅｂｅ ｎｄａｌＴ，ＯｌｓｏｎＬ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌｌｉｎｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎ ａｎｔｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｖｏｋｅｓｇｒｏｗｔｈｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｎｄｇｒａｆｔｅｄｃｅｎｔｒａｌｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎ ｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９８９，８６：４７５６．３ＲｅｎｄｅＭ，Ｈ ａｇｙＴ，ＭａｎｔｈｏｒｐｅＭ，ｅｔａｌ．Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐ ｔｏｒｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｎｅｕｒｏｎｓｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌａｄｕｌ ｔｒａｔｓｐｉｎａｌｃｏｒｄａｎｄｉｔｓｍｏｄｕｌａｔｉｏｎａｆｔｅｒｐｅｒｉｐｈｅｒ ａｌｎｅｒｖｅｌｅｓｉｏｎｓ．ＪｃｏｍｐＮｅｕｒｏｌ，１９９２，３１９：２８５．４Ｗａ ｙｎｅＤＢ，ＨｅａｔｏｎＭＢ．Ｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｔｒｉｇｅｍｉｎ ａｌａｎｄｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｔｏｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔ ｏｒ．ＤｅｖＢｉｏｌ，１９９０，３８：４７３．５ＦａｎＸ．ＧｅｌｍａｎＢＢ，Ｓｃｈｗａ ｎｎｃｅｌｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒ ｉｎｇｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｏｆｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，１ ９９２，３１：５８．ｉｏｎａｆｔｅｒｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖｅｌｅｓｉｏｎｓ．Ｊｃ ｏｍｐＮｅｕｒｏｌ，１９９２，３１９：２８５．４ＷａｙｎｅＤＢ，ＨｅａｔｏｎＭＢ．Ｔｈ ｅｒｅｓｐｏｎｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｔｒｉｇｅｍｉｎａｌａｎｄｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｍｏ ｔｏｎｅｕｒｏｎｓｔｏｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ＤｅｖＢｉｏｌ，１９９０，３ ８：４７３．５ＦａｎＸ．ＧｅｌｍａｎＢＢ，Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆ ａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｏｆｒｅ ｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，１９９２，３１：５８．神经生长因子防 止神经损伤后近端逆行变性及促进再生的实验研究@马金忠，罗永湘$上海市第一人民医院骨科， 同济医科大学附属同济医院骨科１ＩｕｎｄｂｏｒｇＧ．Ｎｅｒｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐ ｒｏｂｌｅｍｓｉｎａｃｌｉｎｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．ＲｅｓｔｏｒＮｅｕｒｏｌＮ ｅｕｒｏｓｃｌ，１９９０，１：２９７．２ＥｒｎｆｏｒｇＰ，ＥｂｅｎｄａｌＴ，Ｏｌｓｏｎ Ｌ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌｌｉｎｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｎｅｒｖｅｇｒｏ ｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｖｏｋｅｓｇｒｏｗｔｈｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｎ ｄｇｒａｆｔｅｄｃｅｎｔｒａｌｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｓ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡ ｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９８９，８６：４７５６．３ＲｅｎｄｅＭ，ＨａｇｙＴ，Ｍａｎｔｈｏ ｒｐｅＭ，ｅｔａｌ．Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｉｍｍｕｎｏｒｅ ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｎｅｕｒｏｎｓｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌａｄｕｌｔｒａｔｓｐｉｎａｌｃ ｏｒｄａｎｄｉｔｓｍｏｄｕｌａｔｉｏｎａｆｔｅｒｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖｅｌｅｓｉ ｏｎｓ．ＪｃｏｍｐＮｅｕｒｏｌ，１９９２，３１９：２８５．４ＷａｙｎｅＤＢ，Ｈｅａｔｏ ｎＭＢ．Ｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｔｒｉｇｅｍｉｎａｌａｎｄｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｔｏｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ＤｅｖＢｉｏｌ，１９９０，３８：４７３．５ＦａｎＸ．ＧｅｌｍａｎＢＢ，Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｉｎｉｔｉａｔｉ