组织培养与土壤栽培西洋参中皂甙对比研究谢宁昌欧阳平凯冯钰尤礻是收稿日期：１９９５１１ ２８（南京化工大学生物工程与科学系，南京，２１０００９）摘要对比分析指出，４周组培西洋 参中总皂甙含量（愈伤组织４４３％、悬浮细胞４５７％）远高于１年土培的（２７９％） ，接近于２年土培的（４８２％），组培西洋参中单体皂甙的种类与土培的相同，都含有Ｒｏ、 Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｇ１和Ｒｇ２，在组培西洋参的悬浮细胞中，以下六种单体皂 甙的含量分别为：Ｒａ（００６％）、Ｒｂ（０２７％）、Ｒｃ（０３０％）、Ｒｄ（０ ２０％）、Ｒｅ（０７１％）、Ｒｇ（１４２％），其和占总皂甙的６４８％，是主要的皂 甙成份。关键词组织培养西洋参皂甙中图法分类号０６５８１１通过生物技术培养的西洋参，其 药用价值已达到土壤栽培西洋参水平，某些营养价值还更优［２］，本文报导组织培养与土壤栽培 西洋参中皂甙含量对比研究。１实验方法１１实验条件１１１样品１年生西洋参（北京地区 引种，根部）；２年生西洋参（北京地区引种，根部）；４周组织培养西洋参之愈伤组织（南京化 工大学工业生物技术研究所提供）；４周悬浮培养西洋参之悬浮细胞（南京化工大学工业生物技术 研究所提供；人参（东北产，根部，南京医药公司提供）。１１２仪器药品７２１分光光度计 ；离心沉淀器；ＸＷ８０型旋涡混合器；ＺＤＪＡ／Ｂ型紫外透射仪，标准人参总皂甙；所用 试剂均为分析纯。１２样品中总皂甙含量测定１２１样品处理将样品冼净、粉碎、烘干，精 密称取２００ｇ置于烧瓶中，加入４０００ｍＬ甲醇并称重。水浴回流提取３ｈ，冷至室温， 补加甲醇至原重，静置沉淀。吸取上清液２００ｍＬ入试管中，挥干，用２００ｍＬ蒸馏水溶 解，再以等体积乙醚萃取３次，弃去醚层，最后用等体积的水饱和正丁醇萃取２次，第１次萃取液 作为样品总皂甙提取液，第２次萃取液作为空白。１２２标准曲线制作精密称取标准人参总皂 甙０３０ｇ，用甲醇定容至１００００ｍＬ，即得皂甙标准液。取８只试管，分别加入皂甙标 准液０～７０μＬ系列量，补加水饱和正丁醇至１００μＬ，每只试管中依次加入８％的香草醛乙 醇溶液０５０ｍＬ，７７％的硫酸液５００ｍＬ，混匀，６０℃水浴１５ｍｉｎ，于５４４ ０ｎｍ波长处测定吸光度Ａ。以吸光度为纵坐标、对应标准液体积（μＬ）为横坐标作图，得一通 过原点的直线，回归方程为：ｙ＝００１３２ｘ。１２３样品测定抽取１２１中制备的 样品总皂甙提取液５００μＬ入试管中，补加５００μＬ水饱和正丁醇，再依次加入８％的香 草醛乙醇溶液０５０ｍＬ、７７％硫酸液５００ｍＬ，混匀，６０℃水浴１５ｍｉｎ，于５４ ４０ｎｍ波长处测定吸光度。空白测定同上，并与样品测定、标准曲线制作同步进行。样品中总 皂甙含量（Ｚ）由下式计算：Ｚ＝０８０Ｃ·ｘＷ·１００％其中Ｃ为皂甙标准液的浓度（ｇ／ ｍＬ），ｘ为样品与空白吸光度之差在标准曲线上对应的体积（μＬ），Ｗ为样品重量（ｇ）。１ ３样品中单体皂甙的分析１３１各样品中单体皂甙定性分析取２块规格相同的玻板，用硅胶 Ｇ铺板并活化，抽取１２１中制备的各种样品的总皂甙提取液２００μＬ在板（１）上点样 ，密闭层析，展开剂为正丁醇∶乙酸乙酯∶水＝４∶１∶５。层析毕，喷显色剂（硫酸∶甲醇＝１ ∶１），１０５℃显色２０ｍｉｎ，在３６５ｎｍ紫外线下观察，描出各斑点，算出Ｒｆ比移值。 １３２组培西洋参悬浮细胞中单体皂甙定量分析抽取１２１中制备的组培西洋参悬浮细胞 的总皂甙提取液２０００μＬ，在板（２）上点排样（１０个连续样点为一排，每点２００μ Ｌ），以相同的条件与板（１）同步层析。根据板（１）中相应样品的层析结果，在板（２）上勾 画出单体皂甙的范围，分别刮入不同试管中，各试管中用２００ｍＬ甲醇洗脱，抽取洗脱液１ ００ｍＬ入另一空试管中，挥干，用１０００μＬ水饱和正丁醇溶解，余同１２３进行比色 测定。另刮取板（２）上无样区中等量硅胶作空白。组培西洋参悬浮细胞中单体皂甙的含量（Ｚ） 由下式计算：Ｚ＝０４Ｃ·ｘＷ·１００％２结果与讨论２１各样品中总皂甙含量如表１。表 １总皂甙含量Ｔａｂｌｅ１Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓｏ ｆｓａｍｐｌｅｓ样品一年生西洋参二年生西洋参愈伤组织悬浮细胞总皂甙含量２７９％４８ ２％４４３％４５７％２２各样品单体皂甙层析图谱如附图２３组培西洋参悬浮细胞中 单体皂甙的含量如表２。表２组培西洋参悬浮细胞中单体皂甙的含量Ｔａｂｌｅ２Ｐａｎａｑｕｉ ｌｉｎｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｓ单体皂甙ＲｏＲｂＲｃ ＲｄＲｅＲｇ含量００６％０２７％０３０％０２０％０７１％１４２％附图单体皂 甙层析图谱ＦｉｇｕｒｅＴｈｉｎｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｏｆＡｍｅｒｉｃａ ｎｇｉｎｓｅｎｇｐｌａｎｔｓａｎｄｔｉｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓ１人参（用于对照）２１年 生西洋参３２年生西洋参４愈伤组培西洋参５悬浮组培西洋参（展开剂为正丁醇∶乙酸乙酯∶水＝ ４∶１∶５）２４从以上数据可以看出：（１）西洋参土培时间越长，其总皂甙含量越高，如２ 年生的比１年生的高出７３％；对于组培而言，悬浮细胞培养比愈伤组培好，前者总皂甙比后者高 出３％；短期组培可与长期土培相媲美，４周悬浮培养西洋参中总皂甙含量比１年土培的高出６４ ％，达到２年土培的９５％，组培生产周期比土培的缩短了近２０倍。（２）组培西洋参中单体皂 甙的种类与２年土培的完全一致，比１年土培的多出Ｒｇ１成份。根据层析图谱中各斑点的大小和 深浅，可以推断出，组培西洋参中Ｒａ的量没有土培的高，Ｒｇ的量则明显高于土培的。（３）组 培西洋参悬浮细胞中６种单体皂甙之和为２９６％，占其总皂甙的６４８％，是主要的单体皂 甙成份。（４）４周组培西洋参无论从总皂甙含量还是单体皂甙组成上都十分接近２年土培西洋参 ，由于组织培养，尤其是悬浮细胞培养能节约空间（土地）、缩短周期，更利于人体吸收等优点， 我们认为它作为一种新的西洋参培养方法，具有一定的应用前景。参考文献１谢宁昌，欧阳平凯， 王习侠细胞培养西洋参等所含氨基酸与原植株中含量的比较南京化工学院学报，１９９３，１ ５（４）∶７２２沙世炎，徐礼焱木，严敏如等编中草药有效成份分析法（下）北京：人民卫 生出版社，１９８２，１３Ｊｕｎｇｊａｊｈａｎｇ，Ｅｊｏｈｎｓｔａｂａ，Ｊｕｎｇｙｕｎｋ ｉｍＡｍｅｒｉｃａｎａｎｄｋｏｒｅａｎｇｉｎｓｅｎｇｔｉｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓ：ｇｒ ｏｗｔｈ，ｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄｐｌａｎｔｌｅｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏ ｎｉｎＶｉｔｒｏ，１９７４，９（４）∶２５３４何心亮引种西洋参的总皂甙含量比较中 草药，１９８８，１９（２）∶４５５何心亮绞股蓝总皂甙的含量测定中草药，１９８７，１ ８（１０）∶１５ＧＩＮＳＥＮＯＳＩＤＥＩＮＡＭＥＲＩＣＡＮＧＩＮＳＥＮＧＧＲＯＷＮＡＳ ＣＡＬＬＵＳＯＲＳＵＳＰＥＮＳＩＯＮＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥＳＯＲＮＡＴＵＲＡＬＰＬ ＡＮＴＳＸｉｅＮｉｎｇｃｈａｎｇＯｕｙａｎｇＰｉｎｇｋａｉＦｅｎｇＹｕＹｏｕＴｉＤｅｐ ａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎ ａ，２１０００９ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｉｎＡｍｅｒｉｃａｎｇｉｎ ｓｅｎｇｇｒｏｗｎａｓｃａｌｕｓｏｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｉｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓｏｒ ｎａｔｕｒａｌｐｌａｎｔｓｗａｓａｎａｌｙｓｅｄＴｈｅｔｏｔａｌａｍｏｕｎｔｏｆｇｉ ｎｓｅｎｏｓｉｄｅｉｎｔｉｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｃａｌｕｓ：４４３％，ｓｕｓｐｅｎ ｓｉｏｎｃｅｌｓ：４５７％）ｉｓｍｕｃｈｌａｒｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｏｎｅｙｅ ａｒｏｌｄｎａｔｕｒａｌｐｌａｎｔｓ（２７９％），ｂｕｔｉｓｎｅａｒｔｈａｔｏｆｔｈ ｅｔｗｏｙｅａｒｏｌｄｏｎｅｓ（４８２％）Ｔｈｅｓｏｒｔｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉ ｄｅｉｎｔｈｅｓａｐｏｎｉｎｓａｂｏｖｅａｒｅｔｈｅｓａｍｅＴｈｅｙａｒｅＲｏ，Ｒａ ，Ｒｂ，Ｒｃ，Ｒｄ，Ｒｅ，Ｒｇ１，Ｒｇ２ｅｔｃＡｎｄｉｎｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｓ ，ｔｈｅｒｅａｒｅＲａ（００６％），Ｒｂ（０２７％），Ｒｃ（０３０％），Ｒｄ（０ ２０％），Ｒｅ（０７１％，Ｒｇ（１４２％）。Ｋｅｙｗｏｒｄｔｉｓｕｅｃｕｌｔｕｒ ｅＡｍｅｒｉｃａｎｇｉｎｓｅｎｇｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ组织培养与土壤栽培西洋参中皂甙对 比研究@谢宁昌@欧阳平凯@冯钰$南京化工大学生物工程与科学系组织培养,西洋参,皂甙对比 分析指出，４周组培西洋参中总皂甙含量（愈伤组织４４３％、悬浮细胞４５７％）远高于１ 年土培的（２７９％），接近于２年土培的（４８２％），组培西洋参中单体皂甙的种类与土 培的相同，都含有Ｒｏ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｇ１和Ｒｇ２，在组培西洋参的悬浮 细胞中，以下六种单体皂甙的含量分别为：Ｒａ（００６％）、Ｒｂ（０２７％）、Ｒｃ（０ ３０％）、Ｒｄ（０２０％）、Ｒｅ（０７１％）、Ｒｇ（１４２％），其和占总皂甙的 ６４８％，是主要的皂甙成份。１谢宁昌，欧阳平凯，王习侠细胞培养西洋参等所含氨基酸与原植株中含量的比较南京化工学院学报，１９９３，１５（４）∶７２２沙世炎，徐礼焱木，严敏如等编中草药有效成份分析法（下）北京：人民卫生出版社，１９８２，１３Ｊｕｎｇｊａｊｈａｎｇ，Ｅｊｏｈｎｓｔａｂａ，ＪｕｎｇｙｕｎｋｉｍＡｍｅｒｉｃａｎａｎｄｋｏｒｅ
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