酸枣肉中多糖的含量测定李兰芳①吴树勋①付琳杰①提要本文应用硫酸—苯酚法对四个不同产地的酸 枣果肉中的多糖进行含量测定。酸枣肉多糖的含量在６．３９％～８．９４％之间。关键词酸枣多 糖含量测定酸枣ＺｉｚｉｐｈｕｓｓｐｉｎｏｓａＨｕ是我国重要的中药材树种，其果实含有多种 化学成分，有很高的营养和食疗价值［１］。酸枣果肉是加工清凉保健饮料的优质原料，并曾有报 道酸枣肉中多糖能增强小鼠的体液免疫和细胞免疫功能，对放射性损伤有一定的保护作用［２］， 但对其多糖的结构和含量未见报道。本文仅采用硫酸—苯酚显色后分光光度法［３］对四个不同产 地的酸枣肉样品进行了多糖的含量测定。１仪器与材料７２２型分光光度计（上海分析仪器厂）； 离心机（ＬＸＪ－６４－０１，北京医疗仪器修理厂）；葡萄糖（分析纯，石家庄市试剂厂）；硫 酸（优级纯，北京化工厂）。苯酚试液：取苯酚２００ｇ，加铝粉０．２ｇ，碳酸氢钠０．１ｇ， 共蒸馏收集１８２℃馏份，称取此馏份１０ｇ，加水１５０ｇ，置棕色瓶中，可贮存１年。酸枣肉 ：酸枣成熟期采集，晒干后冰箱冷冻取下果肉，干燥，粉碎，过６０目筛，６０℃干燥２４小时。 ２实验方法２．１酸枣肉多糖的提取和精制：干燥酸枣果肉加８０％乙醇回流提取３次（２ｈ，１ ｈ，１ｈ），过滤，将药渣加蒸馏水煮提２次，每次１ｈ，过滤，滤液减压浓缩至适量加３倍量乙 醇沉淀过夜，抽滤沉淀，干燥，称重。加蒸馏水溶解，过滤，滤液流水透析４８小时，置冰箱冷却 ，另加等量冷藏的１５％三氯醋酸沉淀蛋白，３０００转／分离心，上清液加４０％氢氧化钠溶液 调ｐＨ至７，将此溶液再用流水透析４８小时，过滤透析液，加乙醇使含醇量达８０％，沉出多糖 。抽滤，反复用无水乙醇、乙醚洗涤，减压真空干燥，即得酸枣肉多糖。２．２标准曲线的制备： 精密称取经１０５℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖１００ｍｇ，置１００ｍｌ量瓶中，加水溶解至刻 度，摇匀，放置过夜。精密吸取上述标准葡萄糖液２０、３０、６０、９０、１２０、１５０μｌ ，分置具塞试管中，各加蒸馏水使体积为２．０ｍｌ，并各加苯酚试液１．０ｍｌ，摇匀，迅速加 入５．０ｍｌ浓硫酸，加入时先在表面加，再沿管壁加入，以便使其快速充分混合，摇匀，放置５ ｍｉｎ，置沸水浴加热１５ｍｉｎ，取出冷却至室温；另以２．０ｍｌ蒸馏水随行试剂空白做对照 ，于４９０ｎｍ处测定吸收度，所得数据经回归统计，回归方程为Ａ＝０．０２８３５＋７．０２ ９６，γ＝０．９９９６，在本实验条件下葡萄糖在２０～１５０μｌ范围内同吸收度呈良好的线 性关系。２．３换算因素的测定：精密称取酸枣肉多糖１１．３ｍｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加水溶 解并稀释至刻度，摇匀做贮备液。精吸贮备液１．０ｍｌ，照标准曲线项下的方法测定吸收度，由 回归方程中求出供试液中含量，按下式计算换算因素Ｆ＝Ｗ÷（Ｃ×Ｄ），式中Ｗ为多糖的重量（ μｇ），Ｃ为多糖中葡萄糖的浓度，Ｄ为多糖的稀释因素。测得Ｆ＝２．９３。２．４酸枣肉样品 溶液的制备：精密称取酸枣肉样品粉末０．２～０．３ｇ，用滤纸包好置索氏提取器中用８０％乙 醇浸泡２４小时，再加热提取３小时，样品取出晾干后连同滤纸置圆底烧瓶中加水煮沸３次（１ｈ ，３０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ），过滤，合并滤液置２００ｍｌ量瓶中，稀释至刻度，备用。２．５ 回收率试验：精密称取酸枣肉样品０．１～０．２ｇ，加入适量酸枣肉多糖，按样品液制备和含量 测定方法操作，计算回收率，结果为１００．６０％。２．６含量测定：精密吸取酸枣肉样品供试 液适量，加蒸馏水至２ｍｌ，按标准曲线项下方法测定吸收度，由回归方程求出供试液中葡萄糖含 量，按下式计算样品中多糖含量。多糖含量（％）＝Ｃ．Ｄ．ＦＷ×１００％式中Ｃ为供试液中葡 萄糖浓度（ｍｇ／ｍｌ），Ｄ为供试品溶液的稀释因素，Ｆ为换算因素，Ｗ为供试品的重量（ｍｇ ），测定结果见附表。附表酸枣肉中多糖含量样品来源多糖含量（％）Ｃ．Ｖ％（ｎ＝３）河北邢 台８．９４３．３１河北获鹿６．３９２．４５河北张家口７．６５３．５６山西阳泉８．６４２ ．６８３小结３．１酸枣肉以酸甜适口著称，含糖量较高，同时含有大量黄酮甙等干扰测定的物质 ，因此先将样品用８０％乙醇充分浸泡，加热提取尽量除净干扰物质，再用水煮提多糖成分。本实 验中提取液测定多糖前曾做过还原糖和黄酮甙的定性实验，结果都为阴性。３．２实验结果表明酸 枣肉中多糖的含量可用产地不同而有差异，本文所测四个产地酸枣肉中多糖含量分别为６．３９％ 、７．６５％、８．６４％、８．９４％，以河北邢台产区酸枣肉多糖含量最高。参考文献１曲译 洲．河北农业大学学报，１９８９，１０（２）∶６０２郎杏彩．中国中药杂志，１９９１，１６ （６）∶３６６３ＭｉｃｈｅｌＤｕｂｏｉｓ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ１９５６，２８（３ ）∶３５０酸枣肉中多糖的含量测定@李兰芳@吴树勋@付琳杰酸枣多糖,含量测定本文应用硫酸 —苯酚法对四个不同产地的酸枣果肉中的多糖进行含量测定。酸枣肉多糖的含量在６．３９％～８ ．９４％之间１曲译洲．河北农业大学学报，１９８９，１０（２）∶６０２郎杏彩．中国中药杂 志，１９９１，１６（６）∶３６６３ＭｉｃｈｅｌＤｕｂｏｉｓ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ １９５６，２８（３）∶３５０量测定。酸枣肉多糖的含量在６．３９％～８．９４％之间１曲译洲．河北农业大学学报，１９８９，１０（２）∶６０２郎杏彩．中国中药杂志，１９９１，１６（６）∶３６６３ＭｉｃｈｅｌＤｕｂｏｉｓ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌＣｈｅｍ１９５６，２８（３）∶３５０
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