小儿止咳化痰冲剂抗副流感病毒（Ⅲ型）作用的实验研究李辉，路波，佟奎明，刘瑞璋，刘丽萍，郭 艳萍，房洪太摘要本实验采用细胞组织培养法（５ｍｌ方型培养瓶）是实验观察药物抗病毒作用的 常用方法，该法较塑胶板法稳定，实验方法操作均按病毒组织培养常规进行。实验结果证明，小儿 止咳化痰冲剂和对照药双黄连冲剂的治疗指数均大于３以上，说明两药均有抑制Ⅲ型副流感病毒生 长的作用。１材料方法１．１实验药物：小儿止咳化痰冲剂；批号：中试２；剂型：冲剂；药品委 托加工单位：松花江制药厂；包装：１５ｇ／袋；配制方法：用蒸馏水溶解后，经１００ｔ３０分 钟消毒，连续３天灭菌，３０００转／分，２０分钟离心，实验用上清液。１．２对照药：双黄连 冲剂，批号９３０８０１６剂型：冲剂；生产厂家：哈尔滨中药一厂；包装：５９／袋；配制方法 ：同实验药配制方法。１．３实验用病毒株：副流感病毒Ｉｌｌ型系由中国预防医学科学院病毒研 究所引进。１４实验用细胞：Ｈｅｌａ传代细胞系由中国预防医学科学院生物制品研究所引进。１ ．５实验方法１．ｓｌ药物对细胞毒性实验：实验药对细胞毒性实验：用细胞维持液稀释成：１０ ０ｍｇ／ｍｌ，５０ｍｇ／ｍｌ，２５ｍｇ／ｍｌ．１２．ｓｉｎｇ／ｍｌ，６．２５ｍｇ／ｍｌ ，３．１２５ｍｇ／ｍｌ，６个稀释浓度，每个不同药液浓度分别加入已长成单层细胞的培养瓶中 ，每个药液浓度用８瓶细胞，置３７℃培养，每天分别加入相同浓度药液于细胞培养瓶内，连续观 察７天，同时放８瓶无药对照。选对细胞无毒性的药液供实验用。对因药双黄连冲剂对细胞毒性实 验：用细胞维持液将对照药释成：１００ｇ／ｍｌ，５０ｍｇ／ｍｌ，２５ｍｇ／ｍｌ，１２．ｓ ｍｇ／ｍｌ，６２５ｍｇ／ｍｌ，３１２５ｍｇ／ｍｌ，６个稀释度，其余方法同实验药。１．５ ．２病毒毒力测定：用细胞维持液稀释病毒，将病毒稀释成：１０－ｌ，１０－２，１０－３，１ ０４１０５１０６１０－７７个稀释度，细胞长成单层后分别感染细胞，每个稀释度感染８瓶细胞 ，置３５℃培养，连续观察７天。同时设８瓶无病毒细胞对照。１．５．３．实验药和对照药抗副 流感病毒ｍ型作用实验：实验药组：根据病毒毒力测定结果，用细胞维持液将病毒稀释成１００Ｔ ＣＩＤ５０病毒液，分别感染细胞，置３５℃吸附２小时，然后奔去病毒液，分别加入药液为：１ ０．ｓｍｇ／ｍｌ，５４ｍｇ／ｍｌ．２７ｍｇ／ｍｌ，１４ｍｇ／ｍｌ．０７ｍｇ／ｍｌ，５个 药液浓度，每个浓度用８瓶细胞，置３５ｔ培养，连续观察７天。对照药组：用细胞维持液将双黄 连冲剂稀释成７．１４ｔｕｇ／ｒｎｌ，３．６ｎｇ／ｒｎｌ，１．ｓｒｎｇ／ｍｌ，０．ｇｍｇ ／ｍｌ，０４５ｍｇ／ｎｄ，５个稀释浓度，其它方法同实验药组。病毒对照放８瓶细胞；正常细 胞对照８瓶；药物对照各放８瓶细胞。２实验结果２．回药物对细胞毒性实验结果：实验药小儿止 咳化痰冲剂对细胞毒性实验结果，见表１。哈尔滨医科大学公共卫生学院哈尔滨市红十字儿童医院 哈医大附属第一医院表１止咳化痰冲剂细胞月性实验表２双黄连冲剂细胞毒性实验经用统计学直线 回归法计算，其结果分别为：最大无毒浓度（Ｔｏ）一１０．６４７ｍｙｍｌ．半数中毒浓度（Ｔ ＤＳ。）一３０．９２７ｍｇ／ｍｌ，９０％中毒浓度（Ｔｒｙ。）＝７２．５８９ｍｇ／ＩＹｉ ｌ，对照药双黄连冲剂对细胞毒性实验结果见表２。经用统计学直线回归法计算，其结果分别为： 最大无毒浓度（ＴＤＯ）＝７．１３ｍｇ／ｍｌ，半数中毒浓度（ＴＤＳ。）＝２６．７ｌｉｎｇ ／ｍｌ，９０％中毒浓度（ＴＤｇ。）＝７２５８９ｍｇ／ｍｌｏ２．２病毒毒力测定实验结果见 表３。表３副流感病自ｍ国自大测家纷给易经统计学直线回归法计算结果为：（ＴＤＳ。）＝１０ ２７５．１４１７２３实验药，对照药抗副流感病毒Ｉｌｌ型实验结果见表４奢４实验药、对照药 机到流成启查ｍ四上验结果经用统计学处理结果分别为：实验药ＩＱ。（半有效浓度）＝３．０５ ２９ｍｓ／ｍｌ，ＴＩ（治疗指数）＝１０．１３０４；对照药ＩＱＯ＝ｌ．８０９ｍｇ／ｍｌ， ＴＩ＝１４．７６１０。以上实验均重复一次。３讨论本实验采用组织细胞培养法（ｓｍｌ方型培 养瓶）是实验药物抗病毒作用的一种常用方法，该法较塑胶板法稳定，实验及操作方法均按病毒组 织养法进行。药物浓度的选择是根据药物对细胞毒性实验结果确定的。鉴于副流感病毒ｍ型是目前 我国流行的主要和常见型，故选用副流感病毒Ｉｌｌ型作为实验毒株。本实验所用细胞为对副流感 病毒较敏感的Ｈｅｌａ传代细胞，所用对照药物为市售的哈尔滨中药一厂生产的批号为９３０８１ ６的双黄连冲剂，配制及给药方法与实验药相同。根据副流感病毒ｉｌｌ型毒力测定实验结果，将 病毒稀释成１００ＴＣＩＤＳＯ病毒单位，分别感染细胞。然后以不同药物浓度给药，观察药效。 本实验病毒感染量如用５０ＴＣＩＤ５０单位，其药效可ｏｐｋ更明显。此实验重复２次。小儿止 咳化痰冲剂抗副流感病毒（Ⅲ型）作用的实验研究@李辉，路波，佟奎明，刘瑞璋，刘丽萍，郭艳 萍，房洪太$哈尔滨医科大学公共卫生学院,哈尔滨市红十字儿童医院,哈医大附属第一医院本实 验采用细胞组织培养法（５ｍｌ方型培养瓶）是实验观察药物抗病毒作用的常用方法，该法较塑胶 板法稳定，实验方法操作均按病毒组织培养常规进行。实验结果证明，小儿止咳化痰冲剂和对照药 双黄连冲剂的治疗指数均大于３以上，说明两药均有抑制Ⅲ型副流感病毒生长的作用。究@李辉， 路波，佟奎明，刘瑞璋，刘丽萍，郭艳萍，房洪太$哈尔滨医科大学公共卫生学院,哈尔滨市红十 字儿童医院,哈医大附属第一医院本实验采用细胞组织培养法（５ｍｌ方型培养瓶）是实验观察药 物抗病毒作用的常用方法，该法较塑胶板法稳定，实验方法操作均按病毒组织培养常规进行。实验结果证明，小儿止咳化痰冲剂和对照药双黄连冲剂的治疗指数均大于３以上，说明两药均有抑制Ⅲ型副流感病毒生长的作用。
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