人参多糖对慢性肾功能衰竭患者细胞免疫功能影响的体外研究马路，侯桂霞，周柱亮，杨琪，颜妍（ 北戴河解放军第２８１医院０６６１０５）慢性肾功能衰竭系各种肾脏病晚期导致的临床综合征， 病程长、预后差、并发症多，多数患者死于并发症，其中继发感染常常是导致病情恶化、引起死亡 的最主要原因。因此，如何提高患者机体抗病能力，防止继发感染是治疗慢性肾功能衰竭必要的辅 助措施之一。近年来研究证明，人参多糖或人参皂甙具有抗肿瘤、抗辐射和调节免疫内分泌等作用 ￣［１～３］，其对慢性肾功能衰竭患者免疫功能影响如何尚无报道。本文采用体外淋巴细胞培养 方法观察了人参多糖对Ｔ淋巴细胞转化和白细胞介素－２诱生作用的影响，并对其作用机制进行初 步探讨。１病例选择慢性肾功能衰竭患者１５例，均为本院住院确诊者。男９例，女６例，年龄２ １～６２岁，平均年龄４２岁；病程３～８年。所有病例均符合１９８５年南京全国肾脏病学术会 议修正的肾小球疾病临床分型诊断标准。在采集标本前１个月内未用肾上腺皮质类固醇及免疫抑制 剂。正常对照组为１５例同龄健康献血员。２实验方法２．１人参多糖对细胞免疫功能影响的剂量 。效应关系将人参多糖纯品（白求恩医科大学基础医学研究所馈赠），配制成浓度为５００ｍｇ／ ｍｌ的溶液，无菌滤膜过滤消毒灭菌后贮于冰箱中。临用前用ＲＰＭＩ１６４０液依次作１：１， １：２，１：４，１：８和１：１６稀释，各取０．１ｍｌ按需要分别加入Ｔ淋巴细胞转化及白细 胞介素－２（ＩＬ－２）诱生的实验体系中，同时设立以ＲＰＭＩ１６４０液代替人参多糖的对照 组，培养后分别测定Ｔ淋巴细胞转化和ＩＬ－２的活性。２．２人参多糖对ＩＬ－２诱生影响肝素 抗凝外周血，常规分离单个核细胞，Ｈａｎｙ＇ｓ液洗３次，台盼蓝测细胞活力９５％。用ＲＰＭ Ｉ１６４０培养液调细胞浓度１ｘ１０￣６／ｍｌ，分成数管，每管加入不同浓度的人参多糖提取 液，各管加植物血凝素（ＰＨＡ，美国ＤＦＣＯ公司产品，华美公司分装）１００μｇ／ｍｌ，充 分混匀，细胞悬液加入２４孔培养板中，每孔加１．０ｍｌ，经３７℃，５％二氧化碳培养４８ｈ ，离心分别收取含ＩＬ－２的上清液，保存于－３０℃待测。２．３ＩＬ－２活性测定用ＩＬ－２ 依赖株ＣＴＬＬ细胞（长春生物制品所馈赠）作为反应细胞，加入９６孔细胞培养板中，每孔细胞 数为５ｘ１０￣４，各孔再分别加入等量上述制备含ＩＬ－２的培养上清液，同时设阴性和阳性对 照，置３７℃，５％二氧化碳培养箱中培养３６ｈ，终止前１２ｈ加入￣３Ｈ－ＴｄＲ１８．５ｋ Ｂｑ／孔（放射活性为３７ｋＢｑ）。多头细胞收集器收集细胞，液闪测量￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入率 ，参考国外有关方法计算ＩＬ－２的活性单位￣［４，５］。２．４人参多糖对Ｔ淋巴细胞转化影 响肝素抗凝血，常规分离单个核细胞，用ＲＰＭＩ１６４０调细胞浓度为２ｘ１０￣６／ｍｌ，加 不同浓度的人参多糖液测其最适剂量后，按常规微量细胞培养法测定Ｔ淋巴细胞的转化率，多头细 胞收集器收集细胞后，置液体闪烁计数仪下测定，结果以液体闪烁计数仪测定的脉冲数（ｃｐｍ） 来表示￣［６］。３实验结果以上研究结果均采用相关分析及ｔ检验统计处理。３．１人参多糖对 细胞免疫功能影响的剂量－效应关系为了探讨不同浓度人参多糖对正常人和慢性肾功能衰竭患者细 胞免疫功能体外影响作用，我们将不同稀释浓度的人参多糖溶液与正常人和慢性肾衰患者外周血单 个核细胞共同培养，分别测量ＩＬ－２的诱生能力和Ｔ淋巴细胞转化。实验结果表明，人参多糖对 ＩＬ－２活性和Ｔ淋巴细胞转化影响呈明显的剂量。效应依赖关系，结果见表１，２。３．２人参 多糖对ＩＬ－２活性影响在正常对照组和慢性肾衰组分离的单个核细胞诱生ＩＬ－２的培养体系中 按２５ｍｇ／ｍｌ浓度加入人参多糖溶液，同时设以ＲＰＭＩ１６４０替代的时照孔。检测结果表 明人参多糖具有促进正常人和慢性肾功能衰竭患者单个核细胞体外诱生ＩＬ－２的作用，结果见表 ３。３．３人参多糖对慢性肾衰患者Ｔ细胞转化的促进作用１５例慢性肾功能衰竭患者和１５例正 常对照者均以２５ｍｇ／ｍｌ浓度的人参多糖液刺激进行体外Ｔ细胞转化的检测．同时设未加药物 的对照孔。结果表明人参多糖具有促进Ｔ细胞转化的作用，详见表４。４讨论人参多糖或皂甙对机 体细胞免疫有促进作用已公认，为了进一步研究人参多糖对病理状态下体外淋巴细胞增生成分泌是 否具有类似促进作用，本试验观察了人参多糖对慢性肾衰患者细胞免疫的影响，结果表明了人参多 糖对正常人或慢性肾衰患者的体外Ｔ细胞转化和ＩＬ－２诱生能力均有促进作用，说明人参多糖可 以作为一种免疫调节剂提高机体的细胞免疫功能和抗病能力。至于人参多糖提高细胞免疫的作用机 理尚待探索。有文献报道，人参皂甙对辐射损伤大鼠脾淋巴细胞ＩＬ－２的产生有促进作用￣［７ ］；人参多糖具有促进骨髓细胞ＲＮＡ，ＤＮＡ和蛋白质的合成，对小鼠骨髓造血干细胞、造血祖 细胞有促进分化、增殖效应￣［８］；国外学者ＹｏｎｅｚａＷａ等认为人参促进细胞ＲＮＡ，Ｄ ＮＡ和蛋白质合成是人参防护作用的生化基础。根据这一理论推测，人参多糖对体外Ｔ淋巳细胞转 化和ＩＬ－２诱生能力的促进作用可能与人参多糖直接促进单个核细胞ＲＮＡ，ＤＮＡ和蛋白质的 合成具有密切的关系。ＩＬ／２是机体生物反应过程中非常重要的细胞因子，它的高低直接影响其 它细胞因子的表达和产生的生物学效应，特别是近年来研究证明ＩＬ／２可增加ＮＫ细胞活性和激 活ＬＡＫ细胞的作用￣［９］，说明如何提高机体ＩＬ－２的表达和生物活性将十分有助于肿瘤及 各种免疫功能低下疾病的治疗。本研究结果初步显示人参多糖对慢性肾功能衰竭患者细胞免疫增强 作用，其能否作为一种有效生物调节剂应用临床值得进一步研究。参考文献｜｜［１］吴瑞琼等． 中同免疫学杂志１９９１；７（４）：２０６［２］ＭａＹａｎ，ＡｇｒｉｃｕｌＢｉｌｏＣｈｅ ｍ１９９１；５５（１１）：２７０１［３］曹瑞敏，中国中药杂志１９９１；１６（７）：４３ ３［４］ＨａｕｓｅｒＧＪｅｔａｌ．ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ１９８４；５６：１４［５ ］ＨｉｎｏｓｈｉｔａＦｅｔａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｎ１９９０；５４：１２２［６］冯修普等．中 华肾脏病杂志１９８７；３（４）：２３４［７］于河有等．白求恩医科大学学报１９９０；１６ （增刊）：１９［８］田生礼等．白求恩医科大学学报１９９２；１８（３）：２３０［９］Ｇａ ｂｒｉｌｏｖａｃＪｅｔａｌ．ＫｌｉｎＷｏｃｈｅｎｓｃｈｒ１９８８；６６（１８）：３５４ 人参多糖对慢性肾功能衰竭患者细胞免疫功能影响的体外研究@马路，侯桂霞，周柱亮，杨琪，颜 妍$北戴河解放军第２８１医院［１］吴瑞琼等．中同免疫学杂志１９９１；７（４）：２０６［ ２］ＭａＹａｎ，ＡｇｒｉｃｕｌＢｉｌｏＣｈｅｍ１９９１；５５（１１）：２７０１［３］曹 瑞敏，中国中药杂志１９９１；１６（７）：４３３［４］ＨａｕｓｅｒＧＪｅｔａｌ．Ｃｌｉｎ ＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ１９８４；５６：１４［５］ＨｉｎｏｓｈｉｔａＦｅｔａｌ．Ｎｅｐｈｒ ｏｎ１９９０；５４：１２２［６］冯修普等．中华肾脏病杂志１９８７；３（４）：２３４［７ ］于河有等．白求恩医科大学学报１９９０；１６（增刊）：１９［８］田生礼等．白求恩医科大 学学报１９９２；１８（３）：２３０［９］ＧａｂｒｉｌｏｖａｃＪｅｔａｌ．ＫｌｉｎＷｏｃ ｈｅｎｓｃｈｒ１９８８；６６（１８）：３５４ＹｏｎｅｚａＷａ等认为人参促进细胞ＲＮＡ， ＤＮＡ和蛋白质合成是人参防护作用的生化基础。根据这一理论推测，人参多糖对体外Ｔ淋巳细胞 转化和ＩＬ－２诱生能力的促进作用可能与人参多糖直接促进单个核细胞ＲＮＡ，ＤＮＡ和蛋白质 的合成具有密切的关系。ＩＬ／２是机体生物反应过程中非常重要的细胞因子，它的高低直接影响 其它细胞因子的表达和产生的生物学效应，特别是近年来研究证明ＩＬ／２可增加ＮＫ细胞活性和 激活ＬＡＫ细胞的作用￣［９］，说明如何提高机体ＩＬ－２的表达和生物活性将十分有助于肿瘤 及各种免疫功能低下疾病的治疗。本研究结果初步显示人参多糖对慢性肾功能衰竭患者细胞免疫增 强作用，其能否作为一种有效生物调节剂应用临床值得进一步研究。参考文献｜｜［１］吴瑞琼等 ．中同免疫学杂志１９９１；７（４）：２０６［２］ＭａＹａｎ，ＡｇｒｉｃｕｌＢｉｌｏＣｈ ｅｍ１９９１；５５（１１）：２７０１［３］曹瑞敏，中国中药杂志１９９１；１６（７）：４ ３３［４］ＨａｕｓｅｒＧＪｅｔａｌ．ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ１９８４；５６：１４［ ５］ＨｉｎｏｓｈｉｔａＦｅｔａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｎ１９９０；５４：１２２［６］冯修普等． 中华肾脏病杂志１９８７；３（４）：２３４［７］于河有等．白求恩医科大学学报１９９０；１ ６（增刊）：１９［８］田生礼等．白求恩医科大学学报１９９２；１８（３）：２３０［９］Ｇ ａｂｒｉｌｏｖａｃＪｅｔａｌ．ＫｌｉｎＷｏｃｈｅｎｓｃｈｒ１９８８；６６（１８）：３５ ４人参多糖对慢性肾功能衰竭患者细胞免疫功能影响的体外研究@马路，侯桂霞，周柱亮，杨琪， 颜妍$北戴河解放军第２８１医院［１］吴瑞琼等．中同免疫学杂志１９９１；７（４）：２０６ ［２］ＭａＹａｎ，ＡｇｒｉｃｕｌＢｉｌｏＣｈｅｍ１９９１；５５（１１）：２７０１［３］ 曹瑞敏，中国中药杂志１９９１；１６（７）：４３３［４］ＨａｕｓｅｒＧＪｅｔａｌ．Ｃｌｉ ｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ１９８４；５６：１４［５］ＨｉｎｏｓｈｉｔａＦｅｔａｌ．Ｎｅｐｈ ｒｏｎ１９９０；５４：１２２［６］冯修普等．中华肾脏病杂志１９８７；３（４）：２３４［７］于河有等．白求恩医科大学学报１９９０；１６（增刊）：１９［８］田生礼等．白求恩医科大学学报１９９２；１８（３）：２３０［９］ＧａｂｒｉｌｏｖａｃＪｅｔａｌ．ＫｌｉｎＷｏｃｈｅｎｓｃｈｒ１９８８；６６（１８）：３５４
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