清温冲剂对呼吸道病毒感染小儿机体免疫调节作用的研究张国成，李佐华，沈青，徐瑾，许东亮，王 瑞华内容提要采用碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶技术及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，测定Ｔ细胞亚群、淋巴 细胞转化率及γ－干扰素表达细胞等指标，以评价清温冲剂对呼吸道病毒感染小儿免疫功能的作用 。结果显示，清温冲剂组在治疗第４天外周血Ｔ３、Ｔ４亚群的数值及Ｔ４／Ｔ８比例与对照组比 较无明显差异（Ｐ＞０．０５），但γ－干扰素表达细胞、淋巴细胞刺激指数及分泌性ＩｇＡ均明 显增高，与对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０５）。表明清温冲剂能促进和调节机体的免疫功能。 关键词清温冲剂，Ｔ细胞亚群，γ－干扰素表达细胞ＡＳｔｕｄｙｏｎＥｆｆｅｃｔｏｆＱｉｎｇ ｗｅｎＧｒａｎｕｌｅｉｎＲｅｇｕｌａｔｉｎｇｌｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＦｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎＩｎｆａｎｔｉｌｅＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＶｉｒａｌＩｎｆｅｃｔｉｏｎ￥ＺｈａｎｇＧ ｕｏ－ｃｈｅｎｇ；ＬｉＺｕｏ－ｈｕａ；ＳｈｅｎＱｉｎｇ；ｅｔａｌ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＰｅｄ ｉａｔｒｉｃｓ，ＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｋｅＦｏｕｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉ ｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＇ａｎ７１００３２）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｅｖａｌｕａ ｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＱｉｎｇ－ｗｅｎＧｒａｎｕｌｅ（ＱＷＧ）ｏｎｉｍｍｕｎｏｌｏ ｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒ ｏｎγ（ＩＮＦ－γ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｅｌｌｓｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍ ｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔ ｅａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｓａｌｉｖａｒｙｓｅｃｒｅｔｏｒｙＩｇＡ（ｓＩｇＡ）ｗｅｒ ｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｎｔｉａｌｋａｌｉｎ ｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＰＡＡＰ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｒＨＴｄＲｉｎｃｏｒｐｏｒａ ｔｉｏｎｗｉｔｈｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ（ＳＩ）ｏｒａｇａ ｒｓｉｎｇｌｅｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎｉｎｉｎｆａｎｔｉｌｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ ｙｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｅｒｃ ｅｎｔａｇｅｏｆＣＤ３，ＣＤ４，ａｎｄＣＤ４／ＣＤ８ｒａｔｉｏｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｔｒ ｅａｔｅｄｗｉｔｈＱＷＧｆｏｒ３ｄａｙｓｗｅｒｅｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆ ｆｅｒｅｎｔｉｎｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｕｎｔｒｅａｔ ｅｄｗｉｔｈＱＷＧ（Ｐ＞０．０５），ｂｕｔｔｈｅｖａｌｕｅｓｏｆＩＦＮ－γｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎｃｅｌｌ，ＳｌａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｓＩｇＡｗｅｒｅｍｏｒｅｍａｒｋｅｄｌ ｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈａｎｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌ（ｐ＜０．０５）．Ｉｔｓｕｇｇｅ ｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＱＷＧｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｉｎｆａｎｔｉｌｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏ ｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＱｉｎｇｗｅｎＧｒａｎｕｌｅ；Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔ ｓ；ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎγｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｅｌｌｓ为了探讨清温冲剂治疗小儿呼吸道 感染的作用机理，作者观察了服用清温冲剂的合胞病毒或腺病毒感染患儿的免疫功能变化。现报道 如下。临床资料随机选择１９９０年１２月～１９９３年３月诊断为病毒性上呼吸道感染或支气管 肺炎的住院和门诊患儿共６４例，临床诊断按《实用儿科学》（１）和《新药（中药）治疗小儿外 感发热（急性上呼吸道感染）临床研究指导原则》（２）的标准，并经间接免疫荧光法检测鼻咽分 泌物中病毒抗原，或酶联免疫吸附试验捕捉法检测急性期血清特异性ＩｇＭ，确诊为合胞病毒或腺 病毒感染（３）。６４例患儿随机分为两组：（１）清温冲剂组３３例，其中男性１８例，女性１ ５例，年龄２个月～３岁，平均为６．４±６个月。上呼吸道感染１９例，支气管肺炎１４例。（ ２）对照组３１例，其中男性１８例，女性１３例，年龄２个月～３．２岁，平均６．８±７个月 。上呼吸道感染和支气管肺炎分别为２０例和１１例。经统计学处理，两组间一般状况及病情无显 著性差异（Ｐ＞０．０５）．第四军医大学西京医院儿科（西安７１００３２）治疗方法１药物治 疗清温冲剂治疗组除用常规治疗外，服用清温冲剂（由大青叶、芦根、连翘、柴胡等组成），＜６ 个月７．５ｇ／次，０．５～３岁１５ｇ／次，均为每日２次。对照组用常规方法治疗，即上呼吸 道感染的患儿服用复方新诺明和病毒灵片（均为常规治疗剂量），高热不退者给予阿斯匹林口服或 安痛定肌肉注射；支气管肺炎患儿肌肉注射或静脉滴注青霉素。各组患儿均在治疗第４天采集静脉 血标本及唾液，并立即处理标本，进行有关检测。２主要试剂鼠抗人Ｔ３、Ｔ４、Ｔ８、γ干扰素 的单克隆抗体：用从美国ＡＴＣＣ引进的细胞株制备鼠腹水提取抗体。碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶 （ＡＰＡＡＰ）试剂盒：购自军事医学科学院。淋巴细胞分离液：由上海试剂二厂出品。３Ｈ－Ｔ ｄＲ：由中国科学院上海原子核研究所提供，放射比强度２５Ｃｉ／ｍｍｏｌ。冻干马抗人分泌性 ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）诊断血清：购自北京生物制品研究所。３检测方法Ｔ细胞亚群及γ－干扰素表 达细胞的检测，采用ＡＰＡＡＰ免疫酶染色技术，按文献（４）方法。淋巴细胞转化试验，采用３ Ｈ－ＴｄＲ掺入法（５）。唾液ｓＩｇＡ含量测定，采用琼脂扩散法（６）。结果１Ｔ细胞亚群检 测结果服用清温冲剂组和对照组在治疗第４天时，外周血Ｔ细胞的Ｔ３、Ｔ４、Ｔ８亚群的水平（ ％）及Ｔ４／Ｔ８比例无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。但在治疗１周后，清温冲剂组采集到的８ 例标本检测结果发现，Ｔ３、Ｔ４、Ｔ８细胞减少得到明显的恢复，与对照组比较有显著的差异（ Ｐ＜０．０５），见表１、２。２清温冲剂对外周血γ－干扰素表达细胞、淋巴细胞转化及ｓＩｇ Ａ分泌的影响见表１。清温冲剂组γ－干扰素表达细胞水平明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），并 能促进淋巴细胞转化，使淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）明显增高，唾液ｓＩｇＡ分泌增加，同对照组 比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。表１服用清温冲剂第４天时Ｔ细胞亚群、γ－干扰素表达细 胞水平比较（ｘ±Ｓ）注：（）内为例数；与对照组比较，△Ｐ＜０．０５表２清温冲剂治疗１周 时Ｔ细胞亚群水平比较（％，ｘ±Ｓ）注：与对照组比较，＊Ｐ＜０．０５．Ｐ＜０．０１讨论本 研究发现清温冲剂能够促进外周血Ｔ淋巴细胞转化和γ－干扰素表达细胞的增加，从而证明了其对 人机体细胞免疫功能及局部体液免疫功能的调整作用。这可能是清温冲剂具有较好临床疗效的主要 机理之一。作者在清温冲剂体外抑制病毒增殖的实验中，曾发现清温冲剂能够显著抑制合胞病毒等 病毒在细胞内的增殖。本研究证实清温冲剂能促进外周血单核细胞表达干扰素，这为临床使用清温 冲剂抗呼吸道病毒感染的治疗提供了实验资料和理论基础。本研究由于小儿采血困难，未能对服用 清温冲剂患儿的Ｔ细胞亚群变化作较长时间的动态观察，但却发现服用１周后，能显著地促进Ｔ３ 、Ｔ４和Ｔ８数值的回升，对患儿机体抵抗力的恢复，防止反复感染，具有重要的临床意义。参考 文献｜｜１．诸福棠，吴瑞萍，胡亚美，实用儿科学（下册）．第４版．北京：人民卫生出版社， １９８５：３１．２．中华人民共和国卫生部．中药新药临床研究指导原则（第一辑）．北京：中 华人民共和国卫生部制定发布，１９９３：２２４－２２６．３．张国成，王瑞华，李新发，等． ＭＡＣ－ＥＬＩＳＡ快速诊断合胞病毒感染的研究．中华医学检验杂志１９９１；１４（３）：１ ６４．４．黄传书，金伯泉，汪美先，等．ＨＦＲＳ患者ＰＢＭＣ中ＨＦＲＳＶ抗原检测及其在淋 巴细胞群和亚群中分布的研究．中华微生物学与免疫学杂志１９９０；１０（２）：１１３．５． 李佐华，王瑞华，刘严庄，等．中西医结合治疗小儿肺炎对３Ｈ－ＴｄＲ掺入法淋转刺激指数的影 响．陕西医学杂志１９８７；１６（２）：１０．６．王瑞华，刘严庄，李佐华，等，中西医结合 治疗小儿肺炎前后唾液中分泌型免疫球蛋白Ａ含量的观察、陕西新医学１９８６；１５（１２）： ２０．清温冲剂对呼吸道病毒感染小儿机体免疫调节作用的研究@张国成，李佐华，沈青，徐瑾， 许东亮，王瑞华$第四军医大学西京医院儿科清温冲剂，Ｔ细胞亚群，γ－干扰素表达细胞采用碱 性磷酸酶－抗碱性磷酸酶技术及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，测定Ｔ细胞亚群、淋巴细胞转化率及γ－干 扰素表达细胞等指标，以评价清温冲剂对呼吸道病毒感染小儿免疫功能的作用。结果显示，清温冲 剂组在治疗第４天外周血Ｔ３、Ｔ４亚群的数值及Ｔ４／Ｔ８比例与对照组比较无明显差异（Ｐ＞ ０．０５），但γ－干扰素表达细胞、淋巴细胞刺激指数及分泌性ＩｇＡ均明显增高，与对照组比 较差异显著（Ｐ＜０．０５）。表明清温冲剂能促进和调节机体的免疫功能。１．诸福棠，吴瑞萍 ，胡亚美，实用儿科学（下册）．第４版．北京：人民卫生出版社，１９８５：３１．２．中华人 民共和国卫生部．中药新药临床研究指导原则（第一辑）．北京：中华人民共和国卫生部制定发布 ，１９９３：２２４－２２６．３．张国成，王瑞华，李新发，等．ＭＡＣ－ＥＬＩＳＡ快速诊断 合胞病毒感染的研究．中华医学检验杂志１９９１；１４（３）：１６４．４．黄传书，金伯泉， 汪美先，等．ＨＦＲＳ患者ＰＢＭＣ中ＨＦＲＳＶ抗原检测及其在淋巴细胞群和亚群中分布的研究．中华微生物学与免疫学杂志１９９０；１０（２）：１１３．５．李佐华，王瑞华，刘严庄，等．中西医结合治疗小儿肺炎对３Ｈ－ＴｄＲ掺入法淋转刺激指数的影响．陕西医学杂志１９８７；１６（２）：１０．６．王瑞华，刘严庄，李佐华，等，中西医结合治疗小儿肺炎前后唾液中分泌
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