ＲＰ－ＨＰＬＣ法快速测定赤芍中芍药甙含量李正蓉，万新，周辉（华西医科大学制药厂成都６１０ ０４１）提要用反相高效液相色谱法快速测定赤芍中芍药甙含量的方法。采用ＰＥ３×３Ｃ１８（ ０．４６×３．３ｃｍ）短柱，磷酸二氢钠溶液（０．００５ｍｏｌ／Ｌ）：甲醇（８０：２０） ，稀磷酸调ｐＨ至３．３作流动相，５０％乙醇作赤芍的提取溶剂，水浴迥流法制备供试液。能使 芍药甙峰得到很好的分离，呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９８），加样回收率达９８．０８％。 该法快速省时、简便、精密度高，经济、实用。关键词赤芍，
芍药甙，高效液相色谱赤芍是毛莨科 植物（ＰａｅｏｎｉａＬａｃｔｉｆｌｏｒａ）的根，为一常用中药。它具有镇痛、镇静、抗炎、 抗溃疡、解热、解痉、抗菌等作用［１］。芍药甙（Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ）是赤芍的主要有 效成份。其含量测定的方法（
中国药典１９９０年版）采用薄层－紫外分光光度法［７］，还有薄 层扫描法及高效液相色谱法［２～５］。日本药局方十二版采用高效液相色谱法，流动相为乙腈－ 水，乙腈价值高，毒性大，不利于生产检验。现采用Ｃ１８键合相的高效短柱及磷酸盐缓冲液－甲 醇流动相的反相ＨＰＬＣ法，既简便省时，又准确可靠，有实用价值。１实验部分１．１仪器与试 药１．１．１仪器Ｐｅｒｋｉｎ－ＥｉｍｅｒＩｎｔｅｇｒａｌＬＣＳｙｓ－ｔｅｍ１００型色谱 仪；Ｐｅｎｅｌｓｏｎ１０２０数据处理机；ＵＶ－２１０型紫外分光光度计（日本岛津）；ＣＱ ２５０超声清洗器（上海超声仪器厂）。１．１．２试药芍药甙对照品（日本松浦药业株式会社生 产）；赤芍（甘孜州产，双流县中药材公司购入）；实验中用水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯 。１．２色谱条件的选择１．２．１仪器参数色谱柱：ＰＥ３×３Ｃ１８，０．４６×３．３ｃｍ ；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温：４０℃；检测波长：２３０ｎｍ；灵敏度：０．０２０ＡＵ ＦＳ。１．２．２ 流动相的选择 分别配制不同ｐＨ值和离子强度的磷酸二氢钠溶液，与甲醇按 不同比例混合，经过多次筛选测试，结果表明磷酸二氢钠溶液（０．００５ｍｏｌ／Ｌ）：甲醇（ ８０：２０），磷酸调ｐＨ至３．３０时，样品得到很好分离，柱压低，峰形对称好。见图１。１ ．３标准溶液的配制与直线回归方程的测定１．３．１标准溶液的配制取芍药甙对照品（减压，五 氧化二磷，８０℃干燥３ｈ），精密称取华西医科大学药学院１０．００ｍｇ，置１００ｍｌ容量 瓶中，加入５０％乙醇溶解并稀释至刻度，得浓度为０．１０００ｍｇ／ｍｌ的芍药甙标准液。１ ．３．２直线回归方程的测定取标准液２、４、６、８、１０μｌ依次进样，按上述色谱条件测定 ，以峰面积（Ｙ）对进样量（Ｘ）回归得直线方程，两次测定平均结果为：Ｙ＝５６３０５＋１０ ４５３５４Ｘｒ＝０．９９９８实验中采用随行标准法。１．４ 提取溶剂与提取方法的选择１． ４．１ 提取溶剂的选择 据有关资料报道［２］，无水乙醇和５０％乙醇分别作提取溶剂，用５ ０％乙醇效果更好。取同批药材采用不同溶剂，用高效液相色谱法测定，证实用５０％乙醇作提取 溶剂，峰形较无水乙醇尖锐，且含量较高，提取完全（见表１）。因而在实验中均采用５０％乙醇 作提取溶剂。１．４．２三种提取方法的比较１．４．２．１超声振荡法精密称取样品粉末约０． ５ｇ，加入５０％乙醇５０ｍｌ，置于超声清洗器中振荡２０ｍｉｎ，过滤，残留物再加入５０％ 乙醇５０ｍｌ，再振荡２０ｍｉｎ，过滤，少量稀乙醇洗残留物和滤器，用５０％乙醇定容至１０ ０ｍｌ。１．４．２．２温浸法精密称取样品粉末约０．５ｇ，加入５０％乙醇５０ｍｌ，密塞， 在４０℃水浴中温浸４ｈ，过滤，用少量稀醇洗残留物和滤器，用５０％乙醇定容至１００ｍｌ。 １．４．２．３迥流法［６］精密称取样品粉末０．５ｇ，加入５０％乙醇５０ｍｌ，水浴迥流３ ０ｍｉｎ，过滤，残留物加入５０％乙醇５０ｍｌ再同法迥流一次，合并两次滤液，用５０％乙醇 定容至１００ｍｌ。照以上三种方法分别制备三批药材的供试液，按上述色谱条件用高效液相色谱 法测定，含量结果见表２。以上结果表明，三种提取方法中以迥流法提取效果最佳，含量最高，超 声振荡法和温浸法无明显差异。１．５ 加样回收率实验精密吸取赤芍供试液（迥流法提取）１ｍ ｌ各９份，３份加入芍药甙标准液（０．１ｍｇ／ｍｌ）各１ｍｌ，３份加入芍药甙标准液各２ｍ ｌ，３份作对照。分别加入５０％乙醇使各份体积均为３ｍｌ，取５μｌ进样测定，测得加样回收 率见表３。１．６ＨＰＬＣ法与薄层－紫外分光光度法的比较按照中国药典１９９０年版赤芍含量 测定方法，称取赤芍中粉约０．５ｇ，加入无水乙醇１０ｍｌ，密塞，４０℃水浴温浸４小时，取 滤液点样，展开，刮板，洗脱，于２３０ｎｍ处测吸收值，计算芍药甙含量。ＨＰＬＣ法的供试液 制备参照日本药局方十二版芍药的含量测定方法（迥流法），称样约０．５ｇ，加５０％乙醇５０ ｍｌ分别迥流两次，定容到１００ｍｌ。用上述色谱条件测定，两种方法测得结果见表４。表４表 明，同批药材用中国药典（１９９０年版）薄层－紫外分光光度法测得结果低，精密度差，ＨＰＬ Ｃ法测得结果高，精密度好。２讨论２．１磷酸二氢钠溶液离子强度大小对峰的分离有较大影响， 随着离子强度下降，分离度提高，峰形对称性变好，降至０．００５ｍｏｌ／Ｌ浓度时为最佳。ｐ Ｈ高的流动相柱压高，分离度差，随ｐＨ下降则柱压降低，峰分离度提高，经试验选用ｐＨ值为３ ．３０±０．５。２．２ 适当增加提取溶剂的量、次数，可使提取更完全。２．３ 日本药局方 ＨＰＬＣ法比中国药典１９９０年版薄层－紫外分光法测得含量显著偏高，其原因有以下几点。２ ．３．１提取溶剂不同ＨＰＬＣ法采用日本药局方十二版方法，用５０％乙醇提取，效果比无水乙 醇好。２．３．２ 提取方法不同 中国药典用温浸法，而日本药局方ＨＰＬＣ法用迥流法。迥流 法经试验证明比温浸法效果好，提取完全，２．３．３ 提取溶剂量不同 取赤芍粉末均为０．５ ｇ，中国药典１９９０版仅用１０ｍｌ无水乙醇温浸４ｈ制备供试液，而日本药局方十二版用５０ ％乙醇５０ｍｌ迥流两次，后者提取效果完全。２．４中国药典（１９９０年版）薄层－紫外分光 光度法操作繁琐，耗时长，变异系数大。而本法操作简便，快速、省时。芍药甙的保留时间约为３ ～４分钟，一份检品的色谱分析只需５～６分钟即可完成。参考文献｜｜１江苏新医学院。中药大 辞典。上海：上海科学技术出版社，２２２５２李章万．刘三康．郭平等．高效液相色谱法测定芍 药及１４种含芍药成药中芍药甙的含量．药物分析杂志，１９９０；１０（６）：３３１３李章万 ，郭平，刘三康等。三种赤芍药和脏连丸中芍药的含量测定。华西药学杂志，１９９０；５（３） ：１５２４王杰民．何怀冰．竺叶青等，芍药中芍药甙的高效液相色谱法测定。中成药，１９９１ ；１３（４）：３２５毛丽珍．阎小卫．阙沛红等。薄层扫描法测定八珍制剂中芍药甙的含量。药 物分析杂志，１９９１；１１（５）：２９２６日本药局方解说书编集委员会，日本药局方第十二 改正。东京：广川书店，Ｄ－４２８７卫生部药典委员会．中国药典．一部．北京：人民卫生出版 社，１９９０：１４１ＴＨＥＲＡＰＩＤＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＯＦＰＡＥＯＮＩＦＬＯＲ ＩＮＩＮＰＡＥＯＮＩＡＬＡＣＴＩＦＬＯＲＡＢＹＲＰ－ＨＰＬＣ￥ＬｉＺｈｅｎｇｒｏｎｇ； ＷａｎＸｉｎ；ＺｈｏｕＨｕｉ（ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＦａｃｔｏｒｙ，Ｗｅｓ ｔＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｔｉｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＣｈｅｎｇｄｕ６１０ ０４１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｍｅｔｈｏｄｏｆｒａｐｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐ ａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎｉｎｐａｅｏｎｉａｌａｃｔｉｆｌｏｒａｂｙＲＰ－ＨＰＬＣｗａｓｒ ｅｐｏｒｔｅｄ．ＴｈｅｃｏｌｕｍｎｉｓＰＥ３×３ＩＤ．ｐａｃｋｅｄｗｉｔｈＯＤＳ（０． ４６×３．３ｃｍ）．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｉｓｍｉｘｔｕｒｅｏｆｓｏｄｉｍｎｄｉ ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ（０．００５ｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄｍｅｔｈａｎｏｌ：２０ ）ｔｈｅｐＨｏｆｗｈｉｃｈｉｓ３．３，ａｄｊｕｓｔｅｄｂｙｄｉｌｕｔｅｄｐｈｏｓｐｈｒ ｉｃａｃｉｄ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｉｓ１．０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｔｈｅｔｅｓｔｓｏｉｕｔｉ ｏｎｗａｓｐｒｅｐａｔｅｄｕｓｉｎｇｅｔｈａｎｏｌ（５０％）ｂｙｒｅｆｌｕｘｉｎｇ．Ｔ ｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｅａｋｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎｗａｓ ｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉ ｎｅａｒｉｔｙ（ｒ＝０．５９９８）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｉｓ９８．０８ ％，Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ．Ｋｅｙｗｏ ｒｄｓ：Ｐａｅｏｎｉａ；Ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ；Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｃｉｎ；ＲＰ－ＨＰＬＣ ＲＰ－ＨＰＬＣ法快速测定赤芍中芍药甙含量@李正蓉，万新，周辉$华西医科大学制药厂，华西 医科大学药学院赤芍，芍药甙，高效液相色谱用反相高效液相色谱法快速测定赤芍中芍药甙含量的 方法。采用ＰＥ３×３Ｃ１８（０．４６×３．３ｃｍ）短柱，磷酸二氢钠溶液（０．００５ｍｏ ｌ／Ｌ）：甲醇（８０：２０），稀磷酸调ｐＨ至３．３作流动相，５０％乙醇作赤芍的提取溶剂 ，水浴迥流法制备供试液。能使芍药甙峰得到很好的分离，呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９８） ，加样回收率达９８．０８％。该法快速省时、简便、精密度高，经济、实用。１江苏新医学院。中药大辞典。上海：上海科学技术出版社，２２２５２李章万．刘三康．郭平等．高效液相色谱法测定芍药及１４种含芍药成药中芍药甙的含量．药物分析杂志，１９９０；１０（６）：３３１３李章万，郭平，刘三康等。三种赤芍药和脏连丸中芍药的含量测定。华西药学杂志，１９９０；５
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