侧柏叶药材质量标准的实验研究山东省中医药研究所（２５００１４）程立方，田樱山东省药品检验 所（２５００１１）何慧提要对侧柏叶药材质量控制方法进行了研究，增加了异海松酸的薄层鉴别 和总黄酮的含量测定。检测了全国７个主产区的侧柏叶质量，为建立药材质量标准提供科学依据。 关键词侧柏叶，质量标准，异海松酸ＯｎｔｈｅＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄｏｆＢｉｏｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ￥ＣｈｅｎｇＬｉｆａｎｇ；ＴｉａｎＹｉｎｇ（ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓ ｔｉｔｕｔｅｏｆＴＣＭａｎｄＣｈｉｎｅｓｅＤｒｕｇｓ２５００１４）ＨｅＨｕｉ（Ｓｈａｎ ｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ２５００１１）Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＴｏｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＢｉｏｔａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ，ｗｅａｄｏｐ ｔｅｄｔｗｏｄｅｔｅｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ，ｉ．ｅ．ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａ ｔｏｇｒａｐｈｙｏｆｉｓｏｐｉｍａｒｉｃａｃｉｄａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔ ｏｔａｌｔｈｕｙｌ．Ｂｉｏｔａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓｆｒｏｍｓｅｖｅｎｇｒｏｗｉｎｇａｒ ｅａｓｏｆＣｈｉｎａｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａ ｓｉｓｆｏｒｓｅｔｔｉｎｇｕｐａｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｏｆｔｈｉｓｈｅｒｂ．Ｋ ｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂｉｏｔａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ；ｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄ；ｉｓｏ ｐｉｍａｒｉｃａｃｉｄ侧柏叶具有凉血止血、生发乌发、止咳祛痰等功效，近年来研究表明对慢 性支气管炎、肺结核也有较好疗效。其止血、镇咳、祛痰作用与所含黄酮类化合物有关，如其中槲 皮甙为止血有效成分［１］。另据报道异海松酸为抗结核有效成分［２］。１９９０年版《中国药 典》仅有性状和显微鉴别。为控制侧柏叶药材质量，保证侧柏叶止血、镇咳、祛痰和抗结核的疗效 ，本文探讨异海松酸的薄层鉴别方法和总黄酮的含量测定方法。并对全国７个生产区的药材质量进 行检测，初步研究确立其质量控制标准。一、实验材料与仪器侧柏叶药材由哈尔滨、沈阳、北京、 济南、南京、上海、南宁的药材公司或药材站提供，为当地产药材。经山东省中医药研究所生药室 彭广芳研究员鉴定为Ｐｌａｔｙｃｌａｄｕｓｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ（Ｌ．）Ｆｒａｎｃｏ的干燥 枝梢及叶，符合药典规定的性状描述和显微鉴别。异海松酸（Ｉｓｏｐｉｎａｒｉｃａｃｉｄ）由 本所姚乾元研究员提供，芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所，其他试剂均为分析纯。ＵＶ－ ２６５ＦＷ紫外分光光度计（日本岛津），８２－Ⅰ型离心沉淀器（上海）。二、薄层鉴别取本品 粉末１ｇ，加甲醇２０ｍｌ，水浴回流提取１ｈ，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇２ｍｌ溶解，为供 试品溶液。另取异海松酸对照品，加甲醇制成每ｍｌ含１０ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法（《中国药典》１９９０年版一部附录５７页）试验，吸取供试品液１５μｌ和对照品液１ ０μｌ于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿－甲醇（２０：０．１）为展开剂，展开，取出晾干，喷以 １％香兰醛浓硫酸显色剂。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点（淡蓝） 。对哈尔滨等７个产地的侧柏叶药材进行了薄层层析，均有此特征斑点，且大小、色泽基本相同。 三、含量测定１．提取条件选择提取溶剂、用量、时间通过三因素四水平正交试验，结果表明：１ ｇ药材粉未加２５ｍ１５０％乙醇回流提取４ｈ效果最佳。２．测定条件选择最大吸收波长：精确 吸取１ｍｌ芦丁对照品溶液（每ｍｌ５０％乙醇中含６０μｇ芦丁），用５０％乙醇稀释至３ｍｌ ，准确加入０．１Ｍ三氯化铝溶液３ｍｌ和１Ｍ醋酸钾溶液４ｍｌ，摇匀，并随行空白对照，放置 ４０ｍｉｎ反应完全，于２００～６００ｎｍ波长范围内扫描测定吸收度，结果在４１５ｎｍ波长 处有最大吸收。显色稳定性：在４１５ｎｍ处隔一定时间测定一次显色的芦丁对照品和供试品溶液 的吸收度值，结果表明：加显色剂后４０ｍｉｎ至１３０ｍｉｎ吸收度值基本稳定。３．标准曲线 绘制精密吸取芦丁对照品液（６０μｇ／ｍｌ）０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３． ０ｍｌ，分别用５０％乙醇稀释至３ｍｌ，准确加入０．１Ｍ三氯化铝溶液３ｍｌ和１Ｍ醋酸钾溶 液４ｍｌ，摇匀，并随行空白对照，放置４０ｍｉｎ反应完全，于４１５ｎｍ波长处测定吸收度， 以吸收度值对纵座标，以浓度值为横座标绘制标准曲线，回归方程为ｙ＝２．８２ｘ－０．００５ ６，γ＝０．９９９６，结果表明：浓度在３～１８μｇ／ｍｌ范围内与吸收度线性关系良好。４ ．样品中总黄酮含量测定取侧柏叶粉碎过４０目筛，６０℃恒温烘４ｈ，每批样品５份，平行操作 。精密称取侧柏叶粉末１．００ｇ于５０ｍｌ烧瓶中，加５０％乙醇２５ｍｌ，称重，水浴回流４ ｈ，补充溶剂至原重量，离心，精密吸取上清液３ｍｌ，蒸干，热水溶解并稀释至２０ｍｌ，离心 ，精密吸取稀释液３ｍｌ，加显色剂同＂标准曲线，项下操作，测定吸收度，计算总黄酮含量，结 果见附表。附表７个主产区侧柏叶药材总黄酮含量注：ｎ＝５５．加样回收率试验精密称取侧柏叶 粉末０．７ｇ，共３份。分别加芦丁对照品３ｍｇ，按＂样品中总黄酮含量测定＂项下测定计算回 收率为９９．１１％，ＲＳＤ为２．０１％，ｎ＝３。四、讨论与小结从７个主产区侧柏叶药材质 量来看，总黄酮含量０．８５～１．２３％，初步建议总黄酮含量不得低于０．８％，且薄层色谱 应检出清晰的异海松酸斑点。另外对采收期、贮存期的研究表明：以９月份采收最好，此时总黄酮 含量高，异海松酸斑点明显；贮存期最多不要超过２年，２年以上总黄酮含量明显下降，且异海松 酸斑点不清晰。这从另一侧面证明薄层鉴别和含量测定作为质控指标的可行性和灵敏度。总黄酮含 量测定方法中，５０％乙醇提取后吸取３ｍｌ上清液蒸干，加２０ｍｌ热水溶解，如此操作效果良 好。不用热水转溶，测定过程中易出现混浊，影响结果。可能是因为５０％乙醇回流提取溶出的脂 溶性杂质造成的。参考文献｜｜［１］徐振文，等．中成药研究１９８２；（４）：３２［２］贾 元印，等．山东医药工业１９８９；８（３）：１７侧柏叶药材质量标准的实验研究@程立方，田 樱，何慧$山东省中医药研究所，山东省药品检验所侧柏叶，质量标准，异海松酸对侧柏叶药材质 量控制方法进行了研究，增加了异海松酸的薄层鉴别和总黄酮的含量测定。检测了全国７个主产区 的侧柏叶质量，为建立药材质量标准提供科学依据。［１］徐振文，等．中成药研究１９８２；（ ４）：３２［２］贾元印，等．山东医药工业１９８９；８（３）：１７线，项下操作，测定吸收 度，计算总黄酮含量，结果见附表。附表７个主产区侧柏叶药材总黄酮含量注：ｎ＝５５．加样回 收率试验精密称取侧柏叶粉末０．７ｇ，共３份。分别加芦丁对照品３ｍｇ，按＂样品中总黄酮含 量测定＂项下测定计算回收率为９９．１１％，ＲＳＤ为２．０１％，ｎ＝３。四、讨论与小结从 ７个主产区侧柏叶药材质量来看，总黄酮含量０．８５～１．２３％，初步建议总黄酮含量不得低 于０．８％，且薄层色谱应检出清晰的异海松酸斑点。另外对采收期、贮存期的研究表明：以９月 份采收最好，此时总黄酮含量高，异海松酸斑点明显；贮存期最多不要超过２年，２年以上总黄酮 含量明显下降，且异海松酸斑点不清晰。这从另一侧面证明薄层鉴别和含量测定作为质控指标的可 行性和灵敏度。总黄酮含量测定方法中，５０％乙醇提取后吸取３ｍｌ上清液蒸干，加２０ｍｌ热 水溶解，如此操作效果良好。不用热水转溶，测定过程中易出现混浊，影响结果。可能是因为５０ ％乙醇回流提取溶出的脂溶性杂质造成的。参考文献｜｜［１］徐振文，等．中成药研究１９８２ ；（４）：３２［２］贾元印，等．山东医药工业１９８９；８（３）：１７侧柏叶药材质量标准 的实验研究@程立方，田樱，何慧$山东省中医药研究所，山东省药品检验所侧柏叶，质量标准， 异海松酸对侧柏叶药材质量控制方法进行了研究，增加了异海松酸的薄层鉴别和总黄酮的含量测定。检测了全国７个主产区的侧柏叶质量，为建立药材质量标准提供科学依据。［１］徐振文，等．中成药研究１９８２；（４）：３２［２］贾元印，等．山东医药工业１９８９；８（３）：１７
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