补阳还五汤和益气活血方抗脑缺血再灌注损伤机理的比较研究刘志龙邓常青，葛金文，彭延古珠海市 人民医院（珠海５１９０００）；湖南中医学院活血化瘀研究室提要比较了补阳还五汤和益气活血 方对四血管夹闭模型免缺脑血再灌注损伤的影响，结果发现：１．两方均可明显抑制再灌注后脑组 织ＭＤＡ的升高（Ｐ＜０．０５），均可提高脑组织抗氧化酶ＧＳＨ－Ｐｘ活性（Ｐ＜０．０１） ，提示两方均可对抗再灌注后自由基对脑组织的损伤，保护抗氧化酶，此为两者的共同作用机理之 一．２．两方均可抑制再灌注组织ＴＸＢ２的升高（Ｐ＜０．０５），均可提高脑组织６－ｋｅｔ ｏ－ＰＧＦ１ａ含量（Ｐ＜０．０５），提示调节脑内ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡为两方另一相同的 作用机理。３．补阳还五汤可显著抑制再灌注后脑组织Ｃａ含量的升高（Ｐ＜０．０５），而益气 活血方对再灌注后脑组织Ｃａ的升高无明显的影响，提示补阳还五汤可对抗脑缺血再灌后脑细胞的 钙超载，此为补阳还五汤与益气活血方作用机理的不同处之一。４．补阳还五汤不能明显抑制再灌 注后脑组织ｃＡＭＰ的升高（Ｐ＜０．０５），而注射益气活血方后脑组织ｃＡＭＰ含量升高不甚 明显；提示益气活血方对脑组织ＣＡＭＰ的升高具有一定的抑制作用。此为两者作用机理的另一不 同之处。关键词补阳还五汤；益气活血方；脑缺血再灌注损伤我们曾报导了补阳还五汤的抗脑缺血 再灌注损伤作用，并对其机理进行了多方面研究［１，２］。益气活血方系由补阳还五汤筛选而来 ，其组方特点是活血药量占的比例加大。实验研究表明益气活血方也具有明显的抗脑缺血再灌注损 伤作用［３，４］，但两者的作用机理有无不同？本文对此进行了综合比较研究。１材料与方法１ ．１药物补阳还五汤黄芪１２０克，当归６克，赤芍４．５克，地龙３克，桃仁３克，红花３克； ②益气活血方：黄芪６０克，赤芍２０克，红花１０克，地龙１０克，川芎２０克，桃仁２０克， 丹参２０克。两方均由湖南中医学院制剂教研室按水煎醇沉法制成注射剂，生药含量为１ｇ／ｍｌ （含０．８％ＮａＣｌ），灭菌冷藏备用，澄明度检查、溶血试验均合格。１．２家兔脑缺血再灌 注实验体重１．４５～２．５ｋｇ健康家兔，雌雄不拘，随机分为假手术对照组、脑缺血再灌注模 型组、补阳还五汤组和益气活血方组，按四血管夹闭法制作动物模型。补阳还五汤组静注补阳还五 汤３．９ｇ／ｋｇ，益气活血方组静注益气活血方４．４ｇ／ｋｇ，其余各组注射等量生理盐水。 除假手术组外，于注药后５分钟夹闭四动脉造成脑缺血，缺血３０分钟后松开双侧颈总动脉行再灌 注４５分钟。分别于缺血前、缺血后再灌前（缺血后）和再灌后由股动脉取血，以２％ＥＤＴＡ— Ｎａ２抗凝后３０００ｒｍｐ４℃离心１５分钟，分离血浆待测。再灌后立即断头取脑，左侧皮质 烤干备用，右侧皮质以冰盐水（含２０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－ａ２）洗净后，再以冰盐水在冰浴 下制成１０％脑匀浆液供测试用。１．３观察指标以ＴＢＡ荧光法测血浆和脑匀浆中丙二醛（ＭＤ Ａ）含量；邻苯三酚自氧化法测红细胞和脑匀浆液超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以ＤＴＮＢ法 国家自然科学基金项目Ｎｏ．３９１７０９３０测全血和脑勺浆中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ Ｐｘ）活性；以放射免疫法测血浆和脑匀浆中ＴＸＢ２、６—ｋｅｔｏ－ＰＧＦ、ｃＡＭＰ、ｃＧ ＭＰ含量。脑勺浆液蛋白定量按考马斯这蓝法。烤于脑组织以优级硝酸消化后，以岛津ＡＡ－６８ ０Ｇ原子吸收分光光度计测定Ｎａ、Ｋ、Ｃａ含量。１．４统计分析各组数据方差齐者以方差分析 统计，方差不齐者以秩和检验统计。２结果２．１对脑组织Ｎａ、Ｋ、Ｃａ含量的影响见表１。各 组脑组织Ｎａ、Ｋ含量均无显著性意义（Ｐ＞０、０５）。模型组脑组织Ｃａ含量明显高于假手术 组（Ｐ＜０．０５）；补阳还五汤组脑组织Ｃａ含明显低于模型组（Ｐ＜０．０５）；益气活血方 组脑组织Ｃａ含量虽低于模型组，但差异并无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。２．２对ＭＤＡ的影 响见表２。各组缺血后血浆ＭＤＡ含量均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。再灌注后，模型组、补 阳还五汤组和益气活血方组血浆ＭＤＡ含量均较假手术组显著升高（均为Ｐ＜０．０５）。模型组 脑组织ＭＤＡ含量显著高于假手术组（Ｐ＜０．０５），而补阳还五汤组和益气活血方组脑组织Ｍ ＤＡ含量均显著低于模型组（Ｐ＜０．０５），但两组之间差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。 ２．３对ＳＯＤ的影响如表３所示，各组不同时期红细胞ＳＯＤ活性均无显著性意义（Ｐ＞０．０ ５），再灌注后脑组织ＳＯＤ活性各组差异也无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。２．４对ＧＳＨ－ Ｐｘ的影响见表４。各组全血ＧＳＨ－Ｐｘ活性均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。再灌注后模型 组脑组织中ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显低于假手术组（Ｐ＜０．０１），补阳还五汤组和益气活血方组 脑组织ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显高于模型组（Ｐ＜０．０１），两组结果与假手术组接近，但两组之 间差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。２．５对ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的影响结 果见表５、６。各组血浆ＴＸＢ２含量在不同时期均无显著性意义（Ｐ＜０．０５）。模型组脑组 织ＴＸＢ２含量升高（Ｐ＜０．０５），补阳还五汤和益气活血方组脑组织ＴＸＢ２含量均明显低 于模型组（Ｐ＜０．０５），但两组之间差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。各组血浆６－ｋｅ ｔｏ－ＰＧＦ１ａ。含量在不同时期均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。再灌后模型组脑组织６－ ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ含量明显低于假手术组（Ｐ＜０．０５），而补阳还五汤和益气活血方组脑 组织６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ含量均明显高于模型组（Ｐ＜０．０５），但两组之间比较差异无 显著性意义（Ｐ＞０．０５）。２．６对脑组织ｃＡＭＰ的影响见表７．假手术组在缺血后和再灌 注后血浆ｃＡＭＰ有所降低（Ｐ＜０．０５），可能与缺血前的手术应激有关。模型组缺血后血浆 ｃＡＭＰ明显高于假手术组（Ｐ＜０．０５），在再灌注后则有所下降。补阳还五场组和益气活血 方组缺血后血浆ＣＡＭＰ明显高于缺血前（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１）和假手术组（Ｐ＜０． ０５）。两组在再灌注后血浆ｃＡＭＰ也有所下降，但两组之间血浆ｃＡＭＰ含量差异无显著性意 义（Ｐ＞０．０５）。模型组脑组织ｃＡＭＰ明显高于假手术组（Ｐ＜０．０５）；补阳还五汤组 织ｃＡＭＰ明显高于假手术组（Ｐ＜０．０５）而与模型组接近；而益气活血方组脑组织ｃＡＭＰ 含量升高不明显，与假手术组比较差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。２．７对ｃＧＭＰ的影响 各组缺血期、再灌注期血浆ｃＧＭＰ含量比较差异均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）；各组再灌注 后脑组织ｃＧＭＰ含量比较差异也无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。３讨论３．１对自由加基体系 影响的比较脑缺血再灌注时自由基产生增加，其防御系统功能下降［５］。本文结果表明，补阳还 五汤和益气活血方均不能抑制再灌注后血浆脂质过氧化物的升高，对血液中抗氧化酶活性也无明显 。两者均可明显抑制再灌注后脑组织ＭＤＡ含量的升高，提高抗氧化酶ＧＳＨ一Ｐｘ活性，而两者 的作用相近。提示两者均具有抗氧自由基毒害的作用，其作用主要是在脑组织局部。其抑制自由基 的脂质过氧化损伤反应，增加脑组织局部自由基的清除，为两者抗脑缺血再灌注损伤的共同作用机 理之一。３．２对ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡影响的比较ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡与脑缺血再灌注损 伤的发生发展具有密切的关系。ＴＸＡ２等可引起脑血管痉挛和血小板活化，加重了脑缺血和脑水 肿形成；ＰＧＩ２可对抗ＴＸＡ２的作用而保护组织免受损伤［６］。本结果也表明，脑缺血再灌 注后。血浆ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ明显降低。补阳还五汤和益气活血方均可抑制再 灌注后脑组织ＴＸＢ２的升高，提高６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ水平。提示两者均可调节脑内局部 ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡。此为两者抗脑再灌注损伤的另一共同作用机理之一。３．３对ｃＡＭＰ 、ｃＡＭＰ影响的比较脑缺血后，ｃＡＭＰ释放增加［７］，神经组织内升高的ｃＡＭＰ可激活脑 组织的磷脂酶Ａ２［８］，磷脂酶Ａ２为花生四烯酸代谢过程中的限速酶。补阳还五汤组脑组织ｃ ＡＭＰ明显升高，而益气活血方组在脑缺血再灌注后脑组织ｃＡＭＰ含量升高并不明显，提示益气 活血方的作用机理可能与影响脑组织的ｃＡＭＰ有关，而补阳还汤的作用不是通过ｃＡＭＰ介导的 ，此为两者作用的区别之一。３．４对脑组织Ｃａ的影响细胞内钙超负荷为缺血再灌注损伤的重要 原因。脑缺血后细胞内Ｃａ２＋浓度增加，可致细胞的形态和功能破坏，并与其他损伤机制相互作 用，导致细胞的不可逆损伤。由于缺血时细胞外液Ｃａ２＋浓度下降，故可以认为脑组织钙含量增 加主要是细胞内Ｃａ２＋负荷增加所致，补阳还五汤可显著降低再灌注后脑组织Ｃａ含量，提示该 方可能有钙拮抗样作用，其作用机理可能与调节细胞内外Ｃａ２＋平衡有关。而益气活血方对再灌 注后脑组织Ｃａ含量的增加并无明显影响，说明该方可能对细胞内外Ｃａ２＋平衡无调节作用，此 为两者的另一区别。参考文献｜｜１邓常青．肖苏红，葛金文等．补阳还五汤对沙土鼠脑缺血再灌 注损伤自由基损害的影啊．中国中西医结合杂志，１９９３；（基础理论研究特集）：８２刘志龙 ，邓常青，葛金文等．补阳还五汤对兔脑缺血再灌注损伤ＴＸＡ２／ＰＧＩ２、环核苷酸及钙的影 响．（待发表）３邓常青，葛金文，彭延古等．益气活血方对兔脑再灌注损伤自由基及钙的影响． 中国中医急症，１９９４；３（５）：２９９４邓常青，葛金文，彭延古等．益气活血方对兔脑再 灌注损伤ＴＸＡ２／ＰＧＩ２及环核苷酸的影响．（待发表）５ＢｒａｉｇｈｌｅｒＪＭ，ＨａｌｌＥＤ．Ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｔｒａｕｍａａｎｄｓｔｒｏｋｅ：１．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓｆｏｒｏｘｙｇｅｎｒａｄｉｃａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｌｏｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ．ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌＢｉｏｌｏ
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