甲基莲，O碱（Nefrine，Nef）系由莲子心中提得的一种双节基异喷淋类生物碱，已证明 有广泛抗实验性心律失常和降压作用’‘·”，近研究发现亦具有保护缺血再灌注损伤心肌作用” ’。鉴于活性氧自由基及脂质过氧化是缺血再灌注心肌损伤的主要因素之一，故本文探讨了Nef 抗脂质过氧化和活性氧自由基作用。1材料与方法1．1试剂与药品硫代巴比妥酸（TBA），F luka产品；1，1，3，3，一四乙氧基丙烷（TEP）、黄壤吟（Xan－thine）、 鲁米诺（Luminol）、5，5－M甲基毗咯林氮氧化物（DMPO）、乙酸豆寇佛波醇（P MA）均为Sg－ma产品；超氧化物歧化酶（SOD）及黄咏吟氧化酶（XO）为上海东风生化 技术公司产品。1·2＾多形核白细胞（POlpoorpbonud。ar，PMN）按文献［ 4j分离提取并计数，台酚蓝染色观察以95％存活率为宜，再以Hanks液制成WBC悬液供 用。1．3脂质过氧化产物测定小鼠禁食12h后，剪开心脏放血，冲洗肝并以0．lmol／L PH7．4磷酸缓冲液制成20％匀浆（W／V）后，按文献TBA比色法［’1测定MDA（n mol／ml）含量。1·4超氧阴离子（OI）测定按文献〔6j方法配制有关溶液，利用核黄 素光照后产生的OI使NBT变色原理，用光电比色法于560urn处，测光照不同时间的光吸 收，用静态法测算光照20min的清除率，用动态法记录不同时间的光密度并作OD－t曲线， 计算抑制率。1．sg自由基测定①自旋捕集法：将含有6％H。O。、10pmol／LFeS O‘，不同浓度的Nef及DMPO的混合液吸人到ESR仪谐振腔内，按文献［7j所述条件测 定ESR波谱。②荧光分光光度法“‘：利用OH”与本甲酸反应生成发荧光的羟基苯甲酸原理， 用荧光分光光度计测定由Fentons反应产生的OH”，并按文献方法计算药物的抑制率及I C。。；或计算其清除室及SC。。。1．6H。O。测定将H。O。配成0．5、1．0．2． 0、4．0、8．0mmol／L浓度，再分别加入Nef和过氧化氢酶，在紫外分光光度计上测 定230urn处光密度并进行组间比较。2结果2·INef对脂质过氧化反应的影响Nef剂 量依赖性（r—0．987）地抑制MDA生成，见表1。剂量为5．0、］0．0pm。l／L 时，抑制稍强于SOD10’U／L，但差异无显著性意义（P＞0．05）。2·2Nef对人 中性粒细胞产生活性氧自由会的影响中性粒细胞受PMA刺激后引起呼吸爆发产生活性氧自由基， Nefl．0pmol／L使化学发光峰值降低33％。（图1）2．3Nef对OI的清除作用 Nef剂量依赖性地（r—0．904）清除或抑制由核黄素光照所产生的OI，Nef93．3 卜mol／L及SOD10‘U／L对OI的清除率分别达73．6％及72．9％，接近等效， 而按抑制50％OI产生速度的Nef浓度（ICs。）比较，则效力比值Nef：SOD为1： 1680．2．4Ncf对OH”的影响在FeSO．＋H。O。Fentons羟自由基发生系 统中，经ESR自旋捕集技术测定，证实有典型的OH”产生（图2），Nefl．0pmol／ L可使OH”－DMPO加成物的典型ESR波峰高度降低67．4％；此外，用苯甲酸荧光法测 定OH“的结果（表2）提示，Nef有依量性卜一0．993）抑制OH”作用。比较SC。。 或IC。。的结果，Nef对OH’的清除效应为甘露醇的106倍，而抑制OH’产生速度为后 者的40．5倍。2·5Nef对H：Oz的影响如图3所示，Nef10．0pmol／L对H 。O。无影响，而过氧化氢酶（CAT）则使H。O。的浓度时间曲线明显右移，说明后者对H。 O。有显著的清除效应，而Nef则无影响。3讨论本文证实属双节基异喷淋类生物碱的Nef有 抗氧自由基作用，能抑制肝细胞脂质过氧化及中性粒细胞受PMA刺激后释放的氧自由基，说明具 抗氧化作用，与文献一致［‘’。进一步用多种方法证明，wef对超氧阴离子（OI）及羟自由 基（OH“）均有剂量依赖性影响，清除OI的效应虽小于SOD，但清除OH”的效应则比典型 的羟自由基清除剂甘露醇为强，且其清除效应更显，说明其以清除效应为主，而对氧自由基产生过 程影响小。其作用机理可能与Nef分子结构上含有酚羟基，类似VitE作用有关’‘”，其酚 羟基上的氢易与氧自由基结合而具抗氧化效能。如图3所示，Nef10．0pmol／L对H。 O。无影响，而过氧化氢酶（CAT）则使H。O。的浓度时间曲线明显右移，说明后者对H。O 。有显著的清除效应，而Nef则无影响。3讨论本文证实属双节基异喷淋类生物碱的Nef有抗 氧自由基作用，能抑制肝细胞脂质过氧化及中性粒细胞受PMA刺激后释放的氧自由基，说明具抗 氧化作用，与文献一致［‘’。进一步用多种方法证明，wef对超氧阴离子（OI）及羟自由基 （OH“）均有剂量依赖性影响，清除OI的效应虽小于SOD，但清除OH”的效应则比典型的 羟自由基清除剂甘露醇为强，且其清除效应更显，说明其以清除效应为主，而对氧自由基产生过程 影响小。其作用机理可能与Nef分子结构上含有酚羟基，类似VitE作用有关’‘”，其酚羟 基上的氢易与氧自由基结合而具抗氧化效能。甲基莲心碱对脂质过氧化和活性氧自由基的作用@贾 菊芳$同济医科大学基础医学院药理学教研室!武汉430030@敖明章$同济医科大学基础医 学院药理学教研室!武汉430030@胡本容$同济医科大学基础医学院药理学教研室!武汉4 30030@李勇军$同济医科大学基础医学院药理学教研室!武汉430030@郭毛娣$中国 科学院抗菌素研究所!北京100050@莫长耕$中国预防医学科学院职业病研究所!北京10 0050甲基莲心碱;;氧自由基;;脂质过氧化;;抗氧剂用硫代巴比妥酸（TBA）比色法、 电子自旋捕集技术、化学发光法及检测苯甲酸──OH．加成物等方法，研究了甲基莲心碱（Ne f）清除氧自由基及抗脂质过氧化作用。Nef0.1～5.0μmol／L剂量依赖性地抑制小 鼠肝匀浆温孵引起的丙二醛（MDA）升高；Nefl.0μmol／L也有效抑制由乙酸豆寇佛 波醇刺激多形核粒细胞产生的化学发光。用核黄素光照法测O_2~-，Nef93.3μmol／L及超氧化物歧化酶10~6U／L对O_2~-的清除率分别为73.6％及72.9％，而对OH的清除效能则为羟自由基清除剂甘露醇的106倍。结果表明，Nef是一有效的植物来源的抗氧化剂。1 夏国瑾,刘玉芬,吕富华.甲基莲心碱对实验性心律失常的影响.同济医科大学学报,1986;15(3):200
2 胡文淑,郭莲军,冯秀玲.甲基莲心碱对正常及高血压大鼠血流动力学的影响.中国药理学与毒理学杂志,1990;4 (2):107
3 贾菊芳,陈锋,胡本容等.甲基莲心碱对离体大鼠缺血再灌注损伤心脏的保护作用.中国心血管药理通讯,1990;(2):11
4 Markert M,Andrews P C,Babior B M.Measurement of O_2~- production by human neutrophils.The preparation and assay of NADPH oxidase-containing particles from human neutrophiles.Methods Enzymol,1984;105:358
5 Ohkawa H,Ohiski N,Yagi K.Assay for lipld peroxides in animal tissues by thiobarbituric acidreaction. Anal Biochem,1979;95(2):351
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