关附甲素与Ⅰ类抗心律失常药对豚鼠乳头肌动作电位的作用比较张陆勇，季惠芳，常晓时，刘静涵（ 中国药科大学生理学教研室，植物化学教研室，南京２１０００９；上海医药工业研究院，２００ ０４０）摘要用细胞内微电极技术，结合微机自动分析，研究了关附甲素（ＧＦＡ）对豚鼠乳头肌 快反应动作电位各项参数的影响，并与Ⅰａ类药物奎尼丁（ｑｕｉｎｉｕｉｎｅ）、Ⅰｂ类药物慢 心律（ｍｅｘｉｌｅｔｉｎｅ）以及Ⅰｃ类药物氯卡胺（ｌｏｒｃａｉｎｉｄｅ）进行比较。结果 表明，关附甲素对心肌细胞零相阻Ｎａ￣＋作用与Ⅰ类药奎尼丁、慢心律、氯卡胺相比起效浓度接 近，作用相似，它对动作电位时程（ＡＰＤ）、有效不应期（ＥＲＰ）的影响与Ⅰａ类药奎尼丁更 为接近。关键词关附甲素；动作电位；乳头肌；奎尼丁；慢心律；氯卡胺关附甲素（ｇｕａｎｆｕ ｂａｓｅＡ，ＧＦＡ）是从黄花乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍｃｏｒｅａｎｕｍ（Ｌｅｖｌ．）Ｒａｐ ａｉｃｓ）的块根关白附子中提得的一种二萜类生物碱。它可显著降低ＣａＣｌ２引起的大鼠室颤 发生率，并能对抗乌头碱诱发大鼠的室性心律失常［１，２］。在对豚鼠乳头肌快反应动作电位（ ＡＰ）的研究中发现，５０μｇ／ｍｌ的关附甲素使动作电位零相上升速度（Ｖ（ｍａｘ））和动 作电位幅度（ＡＰＡ）显著降低，动作电位平台期缩短，ＥＲＰ相对延长［３］。本文利用玻璃微 电极技术在离体豚鼠乳头肌的标本上，观察关附甲素对动作电位各项参数的影响，并与Ⅰａ、Ⅰｂ 、Ⅰｃ类抗心律失常药进行比较，为关附甲素这一新型的抗心律失常药的分类提供初步理论依据。 １材料豚鼠：由中国药科大学动物室提供。关附甲素（ＧＦＡ）、氯卡胺（ｌｏｒｃａｉｎｉｄｅ ）、奎尼丁（ｑｕｉｎｉｄｉｎｅ）由中国药科大学植物化学教研室提供。慢心律（ｍａｘｉｌｅ ｔｉｎｅ）由中国药科大学有机化学教研室提供。２方法豚鼠３００～４５０ｇ，雌雄不拘，击昏 后取出心脏，在通９５％Ｏ２±５％ＣＯ２的Ｔｙｒｏｄｅ＇ｓ液中制备右室乳头肌，将标本固定 于１ｍｌ的水浴槽内，槽温（３７±０．５）℃，用持续通以９５％Ｏ２±５％ＣＯ２的Ｔｙｒｅ ｄｅ＇ｓ液循环灌流标本，流速为４ｍｌ／ｍｉｎ。Ｔｙｒｏｄｅ＇ｓ液的成分为：ＮａＣｌ１３ ６．７，ＫＣｌ５．４，ＣａＣｌ２１．８，ＭｇＣｌ２１．０５，ＮａＨ２ＰＯ４１．１，Ｎａ ＨＣＯ３１１．９，葡萄糖５．５，ｐＨ７．２～７．４０刺激电极为铂金丝双电极，刺激濒率１ Ｈｚ，刺激波宽１ｍｓ，刺激强度为阈值的１５０％，标本稳定１ｈ后开始实验。记录电极是充以 ２．５ｍｏｌ／ＬＫＣｌ的玻璃微电极，电极电阻为１５～２０ＭΩ，尖端直径小于０．５μｍ， 用固定微电极技术，引出心肌细胞的ＡＰ信号，经微电极放大器（ＭＥＺ－７１０１）放大后分三 路：一路输入示波器（ＳＢＲ－１）供示波照相和观察，一路经微分器输入前置放大器（ＦＺＧ－ １Ａ）ｂ，另一路直接送入前置放大器Ａ，前置放大器的输出与Ａ／Ｄ卡相连，通过模数转换再输 至计算机（ＡＰＰＬＥ－Ⅱ），经微国家七五攻关项目机实时采样分析并测算ＡＰ各项参数［４］ ，结果由打印机打印输出。有效不应期的测定：在基础刺激频率为１Ｈｚ的基础上，每８次刺激插 入１次期前刺激。期前刺激波的波宽和强度均为基本节律刺激的两倍，改变期前刺激和基本节律刺 激之间的时间间隔，以期前刺激能引起ＡＰ产生的最短时间间隔为ＥＲＰ［５］。在实验中，用药 前后的变化是在同一细胞内观察和记录的，实验数据以ｘ±ＳＤ表示，结果采用配对ｔ检验进行统 计学处理。３结果用累积给药法，药物浓度以０．５ｌｏｇｍｏｌ／Ｌ递增，给药间隔２０ｍｉｎ 观察关附甲素、奎尼丁、慢心律、氯卡胺对ＡＰ各项参数的影响，结果表明，关附甲素降低Ｖ（ｍ ａｘ）的起效浓度为０．８６μｍｏｌ／Ｌ和奎尼丁０．８４μｍｏｌ／Ｌ、慢心律０．８４μｍ ｏｌ／Ｌ、氯卡胺０．８ｌ μｍｏｌ／Ｌ的作用相近，而它们对Ｖ（ｍａｘ）和ＡＰＡ的抑制作 用均呈现明显浓度依赖性（表１～４）。以Ｖ（ｍａｘ）下降的百分数比较，关附甲素对Ｖ（ｍａ ｘ）的抑制作用与奎尼丁和慢心律相近，而氯卡胺依浓度降低Ｖ（ｍａｘ）的作用要强于上述三种 药（图１）。除氯卡Ｆｉｇ１．Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｌｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔ ｓｏｆＧＦＡ，ｑｕｉｎｉｄｉｎｅ，ｍｅｘｉｌｅｔｉｎｅａｎｄｌｏｒｃａｉｎｉｄｅｏｎＶ （ｍａｘ）（％）ｉｎｇｕｉｎｅａｐｉｇｐａｐｉｌｌａｒｙｍｕｓｃｌｅｓ．ＧＦＡ；ｏ－ｏ ｑｕｉｎｉｄｉｎｅ；ｍｅｘｉｌｅｔｉｎｅ；ｌｏｒｃａｉｎｉｄｅ胺高浓度时使静息电位（Ｒ Ｐ）绝对值减小以外，其它三药对ＲＰ无明显影响。关附甲素（０．２６～８．６μｍｏｌ／Ｌ） 、奎尼丁（０．２８～２８ μｍｏｌ／Ｌ）使动作电位时程（ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０）和ＥＲ Ｐ显著延长，慢心律（８．４～２８μｍｏｌ／Ｌ）使ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０缩短，而ＥＲＰ／ ＡＰＤ９０显著增大。氯卡胺（０．２７～８．６μｍｏｌ／Ｌ）对ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０和Ｅ ＲＰ无显著影响。Ｖ（ｍＴ）为零相快速去极化起点至Ｖｍａｘ所需时间与零相去极化持续时间的 比值。该值可作为衡量Ｎａ＋通道开放时加速过程的指标。结果表明，关附甲素、奎尼丁、慢心律 和氯卡胺均能使Ｖ（ｍＴ）依浓度显著增加，而Ｖ（ｍａｘ）所对应的膜电位Ｖ（ｍＶ）恒定在－ ２５ｍＶ左右电位水平上。４讨论心肌快反应细胞的兴奋除极是由快钠通道的激活开放所引起的。 Ｎａ＋通道由激活门（ｍ粒子）和失活门（ｈ粒子）所调控。当兴奋除极达阈电位，激活门开放， 快钠内流（ｉＮａ）形成动作电位的Ｖ（ｍａｘ）和ＡＰＡ，它们反映了ｉＮａ内流的程度，奎尼 丁、慢心律、氯卡胺均能显著降低Ｖ（ｍａｘ）这与文献［６］报道相似。关附甲素０．８６μｍ ｏｌ／Ｌ以上亦能显著降低Ｖ（ｍａｘ），且主要作用在通道开放的加速过程。说明关附甲素对ｉ Ｎａ的抑制作用和起效浓度与经典Ⅰ类抗心律失常药相近。奎尼丁能够有效地延长ＡＰＤ和ＥＲＰ ，对ＥＲＰ／ＡＤ９０。无明显影响，与文献［６］报道一致。关附甲素也能延长ＡＰＤ和ＥＲＰ ；而慢心律使ＡＰＤ缩短，但ＥＲＰ／ＡＰＤ９０增加；氯卡胺对ＡＰＤ、ＥＲＰ无明显影响，可 见关附甲素对Ｖ（ｍａｘ）和ＡＰＤ的影响与Ⅰａ类奎尼丁作用相近，本实验结果为关附甲素的细 分类提供初步理论依据，较明确的分类尚需结合频率依赖性阻滞实验，对心电图的影响以及临床治 疗情况作综合分析。参考文献｜｜１陈维洲，董月丽，张月芳等。关附甲素的抗心律失常作用．中 国药理学报，１９８３．４（４）：２４７２后德辉，李玲，王秋娟等。关附甲素对实验性心津失 常的作用，南京药学院学报，１９８１．（２）：６８３陈红专，顾培，章鲁等。关附甲素对豚鼠 乳头状肌快反应动作电位的作用。中国药理学报，１９８９，１０（５）：３９９４张陆勇，后德 辉，王秋娟等。生物医学信号的微机实时分析系统。中国药科大学学报，１９８７，１８（３）： １９９５徐有秋，刘远谋，梅岩艾等。心律平对豚鼠心室乳头状肌快反应动作电位的电生理效应。 中国药理学报，１９８５，６（４）：２５１６ＴｅｒｅｎｃｅＪＣａｍｐｂｅｌｌ．Ｋｉｎｅｔ ｉｃｓｏｆｏｎｓｅｔｏｆｒａｔｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｌａｓｓⅠａｎ ｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃｄｒｕｇｓａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔ ｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｒｅｆｒａｃｔｏｒｉｎｅｓｓｉｎｇｕｉｎｅａ－ｐｉｇｖｅｎｔ ｒｉｃｌｅ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｈａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｉｒｓｕ ｂｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＣａｒｄｉｏｖａｓｏｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８３ ，１７：３４４ＥｆｆｅｃｔｏｆＧｕａｎｆｕＢａｓｅＡｏｎＡｃｔｉｏｎＰｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆＧｕｉｎｅａ－ＰｉｇＰａｐｉｌｌａｒｙＭｕｓｃｌｅｓｉｎＣｏｍｐａｒｉｓｉｏｎｗｉ ｔｈＣｌａｓｓⅠＡｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃＤｒｕｇｓ￥ＺｈａｎｇＬｕｙｏｎｇ；ＪｉＨ ｕｉｆａｎｇ；ＣｈａｎｇＸｉａｏｓｈｉ；ＬｉｕＪｉｎｇｈａｎ（ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃ ｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｎａ ｎｊｉｎｇ２１０００９；ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ ａｌｏｆＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０；ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔ ｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ａ ｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＧｕａｎｆｕｂａｓｅＡｏｎａｃｔｉｏｎｐｏｔｅ ｎｔｉａｌｏｆｇｕｉｎｅａ－ｐｉｇｐａｐｉｌｌａｒｙｍｕｓｃｌｅｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅ ｄｂｙｍｉｃｒｏｃｏｍｐｕｔｅｒｓｙｓｔｅｍｆｏｒａｕｔｏｍａｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ． ＧｕａｎｆｕｂａｓｅＡｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｑｕｉｎｉｄｉｎｅ，ｍｅｘｉｌｅｔ ｉｎｅａｎｄｌｏｒｃａｉｎｉｄｅ．０．８６μｍｏｌ／Ｌ ＧｕａｎｆｕｂａｓｅＡ，０．８ ４μｍｏｌ／Ｌ ｍｅｘｉｌｅｔｉｎｅ，０．８１μｍｏｌ／Ｌｌｏｒｃａｉｎｉｄｅａｎｄ０ ．８４μｍｏｌ／Ｌ ｑｕｉｎｉｄｉｎｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｒａｔｅｏ ｆｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ（Ｖ＿（ｍａｘ））．ＴｈｅｙａｌｌｄｅｃｒｅａｓｅｄＡＰ ＡａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄＶ＿（ｍＴ）．Ｔｈｅｓｅｅｆｆｅｃｔｓｗｅｒｅａｌｌｉｎｃｏ ｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ａｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ０．２６～８．６μｍｏｌ／ＬＧｕａｎｆｕｂａｓｅＡａｎｄ０．２８～２８μｍｏｌ／Ｌｑｕｉｎｉｄｉｎｅ，ａｃｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｄｕｒａｔｉｏｎ（ＡＰＤ＿（５０），ＡＰＤ＿（９０））ａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｐｅｒｉｏｄｅ（ＥＲＰ）
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