氧自旋探针微量测定阿霉素耐药及维拉帕米逆转后细胞的氧变化刘岳彪我们诱导培养了一株Ｐ３８８ ／ＡＤＲ耐药株，通过ＥＳＲ－顺磁测定抗药株及ＶＰ反转抗药株的耗氧变化，以研究耐药细胞内 的改变。一、材料和方法１．ＤＢＡ小鼠，雌雄兼用，体重２０±２ｇ。Ｐ３８８为小鼠白血病细 胞株，本院药物毒物所惠赠。Ｐ３８８／ＡＤＲ耐药株由作者诱导培养。耐药４４．４倍。２．阿 霉素（ＡＤＲ）为汕头特区沱滨制药厂产品。ＥＳＲ－３００型电子自旋共振仪为德国ＢＲＵＫＥ Ｒ公司产品。３．ＥＳＲ耗氧测定：荷瘤小鼠给药７２小时后，抽取腹水，ＰＢＳ缓冲液洗涤２次 ，每个样品取约１×１０６细胞，加氧探针（ＣＴＰＯ２０μｌ，ＰＭＡ２０μｌ，３７℃，保温 ２分钟，吸入毛细管，两头封闭，ＥＳＲ测定，数据处理按文献［ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃ ｉＵＳＡ，１９８２，７９：１１６６］。二、结果抽取腹水前７２小时腹腔给药，设置Ｓ，ＳＡ （Ｐ３８８＋ＡＤＲ），ＳＶＡ（Ｐ３８８＋ＶＰ＋ＡＤＲ），Ｒ（Ｐ３８８／ＡＤＲ）．ＲＡ（ Ｒ＋ＡＤＲ），ＲＶＡ（Ｒ＋ＶＰ＋ＡＤＲ）共６组，Ｒ抗药倍数为４４．４倍，用前２～３周下 给ＡＤＲ诱导，ＡＤＲ给药体内浓度为１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ，ＶＰ体内浓度为１×１０－５ｍ ｏｌ／Ｌ，通过测定得到ＥＳＲ波谱后，数据处理。敏感株Ｓ、ＳＡ、ＳＶＡ的耗氧值分别为８． ２±１．３，３．５±０．５，１４．７±１．４５×１０６Ｏ２／ｓ·细胞。抗药株Ｒ、ＲＡ、 ＲＶＡ的耗氧值分别为６．４±１．１，６．９±１．１，７．５±１．０９×１０６Ｏ２／ｓ· 细胞。抗药株较敏感株耗氧减少１６％，ＶＰ可使耗氧增多，在敏感株为４．２倍，抗药株为１． １倍（Ｐ＜０．０５），ＡＤＲ作用细胞可使耗氧减少到４２．６％（敏感株），抗药株则提高到 １．１５倍（Ｐ＜０．０５）。三、讨论本实验对抗药株的耗氧测定表明，阿霉素能使细胞的耗氧 减少，可能是：（１）ＡＤＲ对Ｃａ２＋流出和Ｎａ＋／Ｋ＋的转换有影响，主要涉及胞浆内一个 钙离子交换池，ＡＤＲ抑制Ｎａ＋Ｋ＋－ＡＴＰ酶，ＡＤＲ能连接到Ｃａ结合蛋白。（２）ＡＤＲ 抑制ＰＫＣ，主要通过ｐｈｏｓ－ｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ及一系列的ｄｉａｃｙｌｃ ｅｒｏｌ的产物转换增多，使蛋白质磷酸化减少，影响呼吸链及ＡＴＰ的生成，使耗氧减少。（３ ）ＡＤＲ可阻断细胞Ｇ２Ｍ期，使５期细胞减少从而分裂期细胞少，细胞周期延长，细胞内新陈代 谢减慢，使细胞耗氧减少。本实验同时表明，耐药细胞比敏感细胞耗氧减少，可能耐药细胞在诱导 过程中一直处在药物ＡＤＲ之中，ＡＤＲ对细胞的损伤在撤除药物后不可能全部恢复至正常细胞的 状态。（本文编辑：冯淑萍）作者单位：１０００３９北京，军事医学科学院附属三○七医院氧自旋探针微量测定阿霉素耐药及维拉帕米逆转后细胞的氧变化@刘岳彪$军事医学科学院附属三○七医院
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