血管内皮细胞能分泌多种活性物质，通过旁分泌的方式调节血管壁张力及血管平滑肌细胞（ｖａｓｃ ｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）增殖〔１〕。内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌ ｉｎ，ＥＴ）是已知的最强缩血管多肽和强烈促细胞分裂剂，而前列环素（ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌ ｉｎ，ＰＧＩ２）具有扩张血管及抑制ＶＳＭＣ增殖的作用〔２，３〕。但ＥＴ和ＰＧＩ２生物学 效应间的相互作用关系及其生理意义迄今尚未阐明。本工作在整体动物、离体血管条及培养的ＶＳ ＭＣ上观察ＰＧＩ２对ＥＴ所引起的细胞增殖、血压升高、动物死亡等效应的影响，以探讨ＰＧＩ ２和ＥＴ１生物学效应和释放调节的相互关系。１材料与方法１．１ＰＧＩ２对ＥＴ１致小鼠死亡 的影响选用４周龄雄性昆明小白鼠，随机分为七组（每组８只），行尾静脉注射（０．１ｍｌ／１ ０ｇｂｗ）下述不同药物：等渗盐水（对照组）；ＥＴ１（１２ｎｍｏｌ／ｋｇ）；ＥＴ１＋ＰＧ Ｉ２（ＥＴ１１２ｎｍｏｌ／ｋｇ）分别与８×１０－８，１．６×１０－７，４×１０－６ｍｏ ｌ／ｋｇ的ＰＧＩ２混合）；皮下预注射（实验前２４ｈ）１０ｍｇ／ｋｇ消炎痛（Ｉｎｄｏｍｅ ｔｈａｃｉｎ，Ｉｎｄｏ）后再注射ＥＴ１（１２ｎｍｏｌ／ｋｇ）。上述各组以小白鼠停止呼吸 为死亡标志，记录存活时间，计算６０ｍｉｎ的死亡率。１．２ＰＧＩ２对ＥＴ１升压作用的影响 选用２４０～２６０ｇ雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，戊巴比妥钠麻醉（３０ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ），股动 脉插管测平均动脉压（ＭＡＰ），动物随机分五组（每组６只），分别从股静脉注射下列不同药物 （２ｍｌ／ｋｇ）：等渗盐水（对照组）；ＥＴ１（６μｇ／ｋｇ）；ＰＧＩ２（１０－６ｍｏｌ ／ｋｇ）；ＥＴ１＋ＰＧＩ２（混合注射，剂量同前）或皮下预注射（实验前２４ｈ）１０ｍｇ／ ｋｇ的Ｉｎｄｏ再静注ＥＴ１（６μｇ／ｋｇ）。观察动物ＭＡＰ变化。１．３ＰＧＩ２对ＥＴ１ 释放的影响选用大鼠及麻醉方法同前。参照Ｒａｋｕｇｉ方法〔４〕行离体肠系膜上动脉灌流，将 肠系膜上动脉置Ｋｒｅｂｓ－Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）液（３７℃恒温，９５％Ｏ２＋５％Ｃ Ｏ２平衡）的浴槽中，蠕动泵以４．５ｍｌ／ｍｉｎ恒速循环灌流。实验分八组，每组６只：①单 纯ＫＨ液（对照组）；②凝血酶组，灌流液内含凝血酶４Ｕ／ｍｌ（终浓度，下同）；③ＰＧＩ２ 组，含ＰＧＩ２１０－６ｍｏｌ／Ｌ；④～⑥凝血酶＋ＰＧＩ２组，４Ｕ／ｍｌ凝血酶分别混合１ ０－７，１０－６，１０－５ｍｏｌ／ＬＰＧＩ２；⑦Ｉｎｄｏ组，含Ｉｎｄｏ５×１０－５ｍｏ ｌ／Ｌ；⑧Ｉｎｄｏ＋凝血酶组，剂量同前。结束灌流时收集灌流液，水浴煮沸１０ｍｉｎ，离心 ，过Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱，洗脱，冷冻干燥，复溶后放免法测定ＥＴ１含量。１．４ＰＧＩ２ 对ＥＴ１所致的大鼠ＶＳＭＣ增殖的影响按Ｈｉｒａｔａ方法〔５〕取Ｗｉｓｔａｒ大鼠胸主动脉 ，贴块法培养ＶＳＭＣ，实验用第五代细胞，将细胞消化制成４×１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ悬液，接 种于２４孔培养板，每孔１ｍｌ３７℃ＣＯ２培养箱孵育７２ｈ后进行细胞计数。另配制２×１０ ５ｃｅｌｓ／ｍｌ悬液，接种于２４孔板，每孔１ｍｌ悬液，加入１μＣｉ／孔的３Ｈ－胸腺嘧啶 核苷（３Ｈ－ＴｄＲ），孵育１０ｈ后，用微孔滤膜（φ０．４５μｍ）抽滤，洗３次，滤膜烘干 后，在液闪计数器上测定３Ｈ放射强度。细胞计数及３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验各分六组：①对照组； ②ＥＴ１组，含ＥＴ１１０－８ｍｏｌ／Ｌ；③ＰＧＩ２组，含ＰＧＩ２１０－６ｍｏｌ／Ｌ；④ ～⑥ＥＴ１＋ＰＧＩ２组，１０－８ｍｏｌ／Ｌ，ＥＴ１分别混合１０－７，１０－６，１０－５ ｍｏｌ／ＬＰＧＩ２。凡加入ＰＧＩ２的各组孵育３６ｈ、５ｈ（分别是细胞计数及３Ｈ－ＴｄＲ 掺入实验）时，分别各追加不同剂量ＰＧＩ２１次。实验重复５次，每次３个平行孔。大鼠ＥＴ１ 及ＥＴ放免药盒购自ＰｅｎｉｎｓｕｌａＬａｂ．，ＰＧＩ２购自ＵｐｊｏｈｎＣｏ．，Ｉｎｄｏ 和凝血酶为ＳｉｇｍａＣｏ．产品，３Ｈ－ＴｄＲ购自上海原子能研究所（比度为１０Ｃｉ／ｍｍ ｏｌ），其它试剂为国产分析纯产品。动物由北京医科大学动物部提供。实验结果以均值±标准差 （ｘ＋ｓ）表示，方差分析组间ｑ检验或组间ｔ检验做统计学处理。２结果２．１ＰＧＩ２拮抗Ｅ Ｔ１致小鼠死亡作用给小鼠静注１２ｎｍｏｌ／ｋｇＥＴ１后２．５～３．８ｍｉｎ全部死亡，Ｐ ＧＩ２呈剂量依赖地拮抗ＥＴ１的致死作用，延长存活时间。预先注射消炎痛阻断机体内源性ＰＧ Ｉ２产生，则加强ＥＴ１致死效应。２．２ＰＧＩ２拮抗ＥＴ１升压效应各组动物基础ＭＡＰ为１ ３．４±０．５ｋＰａ，组间差异不显著。静注６μｇ／ｋｇＥＴ１血压先呈短暂下降（１～３ｍ ｉｎ）后持续升高，１０～１５ｍｉｎ达高峰，比基础值升高３３．４％，３０ｍｉｎ后仍不能恢 复。混合静注ＰＧＩ２和ＥＴ１后升压缓慢，峰值降低，仅升高１４．７％，３０ｍｉｎ恢复近基 础水平。预先给予Ｉｎｄｏ的动物，ＥＴ１升压更迅速，５～１０ｍｉｎ达峰值（升高３９．６％ ）。２．３ＰＧＩ２抑制ＥＴ１的释放凝血酶促进ＥＴ１的释放，较对照组高１．５倍（Ｐ＜０． ０１），ＰＧＩ２呈剂量依赖地抑制凝血酶引起的ＥＴ１释放。单纯１０－６ｍｏｌ／ＬＰＧＩ２ 孵育也减少ＥＴ１释放（较对照组低１５．５％，Ｐ＜０．０５）。Ｉｎｄｏ增加ＥＴ１基础释放 和凝血酶刺激的ＥＴ１释放。结果如图１所示。图１ＰＧＩ２对离体肠系膜上动脉释放ＥＴ１的影 响与对照组比较＊Ｐ＜０．０５＊＊Ｐ＜０．０１与凝血酶组比较＋Ｐ＜０．０５＋＋Ｐ＜０．０ １２．４ＰＧＩ２拮抗ＥＴ１促ＶＳＭＣ增殖效应１０－８ｍｏｌ／ＬＥＴ１使ＶＳＭＣ计数及３ Ｈ－ＴｄＲ掺入较对照分别增加１．７和１．８倍（Ｐ＜０．０１）。ＰＧＩ２同时孵育呈剂量依 赖地逆转ＥＴ１引起的ＶＳＭＣ计数及３Ｈ－ＴｄＲ掺入增加。本实验条件下，１０－６ｍｏｌ／ ＬＰＧＩ２对ＶＳＭＣ增殖无明显抑制作用（Ｐ＞０．０５）。结果如图２所示。３讨论缺血、缺 氧、酸中毒等病理条件下，血管图２ＰＧＩ２对ＥＴ１促ＶＳＭＣ增殖及３Ｈ－ＴｄＲ掺入的影响 与对照组比较＊Ｐ＜０．０５＊＊Ｐ＜０．０１与内皮素组比较＋Ｐ＜０．０５＋＋Ｐ＜０．０１ 内皮细胞释放大量ＥＴ。后者有其强烈的收缩血管及促进ＶＳＭＣ增殖作用，以参与高血压、动脉 硬化、心肌缺血等许多心血管疾病的发病过程〔１〕，而内皮细胞释放的花生四烯酸代谢产物ＰＧ Ｉ２，具有扩血管及抑制细胞增殖的作用，通常认为在心血管疾病中具有保护意义〔６〕。Ｒａｋ ｕｇｉ报道〔７〕，ＥＴ１能以自分泌的方式促进内皮细胞释放ＰＧＩ２。本工作系统地观察了Ｐ ＧＩ２对ＥＴ１生物学效应的拮抗作用，发现ＰＧＩ２有效地拮抗ＥＴ１的升压作用；剂量依赖地 逆转ＥＴ１对小鼠的致死效应；抑制ＥＴ１促ＶＳＭＣ增殖效应；并抑制肠系膜上动脉ＥＴ１的释 放和抑制凝血酶刺激ＥＴ１的释放。预先应用环氧化酶抑制剂－Ｉｎｄｏ，阻断机体内源性ＰＧＩ ２产生，机体对ＥＴ１的反应（升压，致死）明显增强，离体肠系膜上动脉释放ＥＴ１增多。Ａｒ ｎｅｒ曾报道〔８〕，ＰＧＩ２及其类似物剂量依赖地舒张ＥＴ引起收缩的人手动脉和静脉血管。 本工作结果提示，血管内皮细胞释放的ＰＧＩ２和ＥＴ之间存在反馈调节，如图３所示。ＰＧＩ２ 与ＥＴ间的失衡，可能在与内皮细胞功能受损有关的疾病，如高血压、动脉粥样硬化、心肌缺血等 疾病发病过程中有重要意义，应用外源性ＰＧＩ２或类似物（有较长半衰期）可能对于ＥＴ参与的 疾病具有潜在的临床治疗价值。（本工作在北京医科大学心血管病基础研究所完成）前列环素对内 皮素生物学效应的拮抗作用@李辉@张继峰@江时森@李俭春@唐朝枢$北京医科大学心肺内分泌 研究室内皮素；前列环素；血管平滑肌细胞；血压为探讨内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ） 与前列环素（ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ，ＰＧＩ２）间相互作用关系及生理意义，我们在整体动 物、离体血管条及培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上发现，ＰＧＩ２有效地拮抗ＥＴ１引起的 大鼠升压作用，剂量依赖性地逆转ＥＴ１对小鼠的致死作用；抑制ＥＴ１促培养的大鼠ＶＳＭＣ增 殖效应，减少大鼠离体肠系膜上动脉ＥＴ１的基础释放及凝血酶刺激的ＥＴ１释放。结果表明，Ｐ ＧＩ２能有效地拮抗ＥＴ的生物学效应，并提示血管内皮细胞所释放的ＰＧＩ２和ＥＴ间存在着反 馈调节１汤健，唐朝枢．循环系统内分泌功能．北京：北京医科大学协和医科大学联合出版社，１ ９８９：９３～１０４２ＧｏｔｏＫ，ＹａｎａｇｉｓａｗａＭ，ＫｉｍｕｒａＳ，ｅｔａｌ．Ｃ ａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｅｆｆｅｃｔｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ．ＪａｐＣｉｒｃＪ，１９ ９２；５６（２）：１６２３ＮｉｅｓＡＳ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓａｎｄｔｈｅｃｏｎ ｔｒｏｌｏｆｔｈｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，１９８６ ；３９（５）：４８１４ＲａｋｕｇｉＨ，ＴａｂｕｃｈｉＹ，ＮａｋａｍａｒｕＭ，ｅｔａｌ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１ｒｅｌｅａｓｅｆｒｏｍｒｅｓｉｓｔａｎｃ ｅｖｅｓｓｅｌｓｏｆｒａｔｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｈｙｐｏｘｉａ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉ ｏｐｈｙＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，１９９０；１６９（３）：９７３５ＨｉｒａｔａＹ，Ｔａｋａｇ ｉＹ，ＴａｋａｔａＳ，ｅｔａｌ．ＣＧＲＰｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｖａｓｃｕ ｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉ ｏｐｈｙＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，１９８８；１５１（３）：１１１３６ＳｚｅｋｅｒｅｓＬ．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．ＡａｃｕｔｅｄｅｌａｙｅｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙＰＧＩ２．ＪＭｏｌＣｅｌＣａｒｄｉｏｌ，１９９０；２２（Ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ１３１７ＲａｋｕｇｉＨ，ＮａｋａｍａｒｕＭ，ＴａｂｕｃｈｉＹ，ｅ
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