3,15一二乙酰苯甲酰乌头原碱(3,15一di—acetyl})enzoylacinin e,DABA)是乌头属二萜类生物碱的新衍生物,与3一乙酰乌头碱(3一acety—laconitine,AA)为同分异构体.经本实验室用多种测痛方法证明DABA有较好的镇痛作用,安全范围较AA大(待发表资料),在乌头属二萜类生物碱中可能是一个有发展前途的镇痛药. 本文对DABA镇痛作用部位进行了研究.MA I。ERIALS AND MElJ’Ht)DN 动物 昆明种小鼠,体重21±s 2 g,Wistar大鼠,体重188±s 24 g,早?不拘。均由本院动物饲养室提供. 药品 DABA上海药物研究所植化室精制的纯品,白色结晶,mp 203—20 4(、,临用前加HcIltool·L“溶解,将pH调至7后用生理盐水稀释.盐酸吗啡注射液(国营天津制药厂,批号5905105). 大鼠测痛法 采用热板法、电刺激鼠尾嘶叫法和甩尾法测痛“。’三种测痛法分别选用痛阁小于15 s.O.3 mA及3—5 s者用于实验。随机分为生理盐水组及DABA不同剂量组,每组5～8鼠. 每次实验在给r)A—BA或生理盐水后30,60.90及120 rain测痛.为了避免损伤测试组织,上述三种测痛法痛阍分别达30 s。lmA及12 s时终止刺激. 需要统计质反应数据时,热板法及甩尾法均以反应时间延长l倍以上为镇痛阳性。电刺激法以痛反应阊值增加l倍以上,且大于O.3 mA者为镇痛阳性. 小鼠醋酸扭体法“。 小鼠ip l%醋酸10 m卜kg“后,选5—10 rain内出现扭体反应者巾DABA,记录注后35—45 rain的扭体数. 大鼠侧脑室给药法 在水合氯醛,100 mg·kg“麻醉下,将大鼠固定在江湾I型c立体定位仪上。使前囟高于后囟1 mm,按前囟后1.5 mm。侧开2.O mm的坐标将外径为O.6 mm的不锈钢引导管埋入颅骨表面下O.5 mm。术后4—6 d开始实验,将外径为O.3 mm的不锈钢注射管插入引导管,其下端伸出引导管3.5mill,注射容量为100弘卜kg一,2。rain注完,留针O.5rain. 大鼠脊髓蛛网膜下腔给药法 n尢文献(2). 大鼠水管周灰质(periaqueductal gray,PAG)及蓝斑(10cus coeruleus,Lc)微量给药法 在水合氯醛400mg·kg“麻醉下,将大鼠固定在江湾I型c立体定位仪上,分别参照文献(5)或(6)大鼠脑图谱,按坐标AO.5 mm,I.O.5 mm,H 6.5 mm或P 2.O mm,L 1.5iTlm,H 7.5 mm向PAG一侧或I,C一侧埋管. 先将外径为O.r6 mm的不锈钢引导管埋置靶部位上2.Omm. 术后d 6开始实验,将外径为O.3 mm的不锈钢注射管插入引导管内,前者管端比后者长2.O mill,恰至靶部位.注射容量l pl,2 rain注完,留针1 rain,实·1 78· BlBl。ID:lssN 0253—9756 Acta Pharmacologica sinica 中国药理学报 1994 Mar;15(2)验结束后,注入l ftl蓝墨水,作冰冻切片,参照图谱确定注射部位. 大鼠双侧蓝斑电解损毁法 见文献(2). 实验结束后经组织学鉴定,对双侧I。c损毁部位准确者的数据进行统计. 数据处理 采用配对或组间f检验.ED。。测定采用简化机率单位法.RESULTS l DABA对大鼠疼痛反应的影响 大鼠ip DABA后30—120 min在热板法、电刺激法及甩尾法上均表现出剂量依赖性镇痛作用,90min时热板法测得DABA 2.2,2.86,3.72及4.83 mg·kg叫的镇痛阳性率分别为25%,50%,62.5 9/5及87.5%,求出镇痛ED。。为2.95(95%可信限2.65—3,27)mg·kg_。;电刺激法测得DABA 2.4,3.0及3.75 mg·kg叫的镇痛阳性率分别为33.3 9/6,66.7%及83.3%,求出ED。。为2.53(95%可信限2.02—3.18)mgjkg～’;甩尾法测得DABA 4.83,5.76及6.86mg·kg“的镇痛阳性率分别为25%,37.5%及75 9/6,求出ED。。为5.93(95%可信限4.74—7.42)mg·kg一。. 2 DABA对小鼠醋酸扭体疼痛反应的影响 DABA ip 2和4 mg·kg叫后35—45 min时对扭体反应的抑制率分别为2 7.2%和71.8%,求得EDs。为2.85(95%可信限2.02—4.02)mg·kg一’. ’ 3 DAB天it沓对大鼠疼痛反应的影响DABA ith 527和1186 pg·kg一。后30,60及90 min对甩尾反应均无明显影响(Tab 1). 4 DABA icv对大鼠疼痛反应的影响DABA icv在热板法及电刺激法上均呈现显著镇痛作用,30 min时用热板法测得35和52.5 pg·kg_。,二剂量组的镇痛阳性率分别为28.6%和71.4%,求得ED5。为42.9 (95%可信限33.3—55.1)弘g·kg叫(相当于ip时ED5。之l/69);用电刺激法测得55和75pg·kg叫二剂Tab 1. Latency time(s)0f rat tail fIick afterintrathecaI injection of 3,15一diacetylbenzoyIaconine(DABA). 一=5,i±s. 。P>0.05锚?O min量组的镇痛阳性率分别为16.7%和66.7%,求得ED。。为68.1(95%可信限56.5—82.】)f』g·kg一‘(相当于ip时ED5。之1/37);icV I)ABA593 pg·kg叫(相当于ip时ED㈤之l/lO)对大鼠甩尾反应无明显影响(Tab 2). 5 PAG注射DABA对大鼠疼痛反应的影响 取预先向PAG埋入导管的大鼠21只,每鼠做l一3次实验,间隔2—4 d.注射部位准确的大鼠(18只)的结果表明,PAG注射20弘gDABA后30一60 min,在热板法及电刺激法上均产生显著镇痛作用,但对甩尾反应无明显影响. PAG注射5 pg吗啡在热板法及甩尾法上均产生镇痛作用(Tab 2). 6 电损毁大鼠双侧I。C对DABA镇痛作用的影响 实验分为损毁组、模拟手术组(行手术、置电极但不通电损毁)及对照组(不行手术).大鼠损毁双侧I。c后,出现的症状与文献(2)相符. 模‘拟手术组术后无明显行为变化. 术后d 6给药前测定痛阈结果表明,三组大鼠痛阈较术前均无明显变化,ip I)ABA 60 min后模拟手术组及对照组均出现明显镇痛作用,但损毁组完全不出现镇痛作用(Tab 3). 7 LC注射DABA对大鼠疼痛反应的影响取预先向LC埋管的大鼠24只. 每鼠做2—3次实验,间隔4—6 d. 注射部位准确的大鼠(19只)的结果表明,I。c注射20 pg DABA,对大鼠嘶叫反应及甩尾反应均无明显影响,但I。(:注射5肛g吗啡后可明显抑制甩尾反应(Tab 2).一;■_ C 4BTBI。lD:IssN 0253—9756 Acta Pharmacologica sinica 中国药理学报 】994 Mar;15(2) ·1 79·Tab 2. Effects 0f 3,lS—diacetylbenzoylaconine(DABA)0n rat pain thresholds i±s.。P>0.05,“J’
0.05, “J,<0.05, 。P<0.0l吣d 6 after oper—ation. 。f’>0.05哪before Operation. Pain thresholds/mAn Before d 6 after 60 min afteroperation operation ip DABADISCUSSl0N 本文证明,icv DABA对用热板法及电刺激法测定的疼痛反应均呈明显镇痛作用,但icv及ith DABA对甩尾反应均无显著抑制作用. 已知甩尾反应系通过脊髓引起的较简单反射,而舔足反应及嘶叫反应则是通过脊髓以上神经结构引起的较高级反应,故本实验结果表明DABA的镇痛作用部位主要在中枢,且在脊髓以上神经结构.向大鼠PAG注射20弘g DABA,在热板法及电刺激法上均表现显著镇痛作用,提示PAG是DABA的原发作用部位之一 ,这与Hikino等¨’及唐希灿等¨’研究中乌头碱及N一脱乙酰剌乌头碱的镇痛作用部位时所得结果一敛.电损毁双侧I。C后,使用电刺激法测得的I)ABA镇痛作用消失,说明LC与r)ABA镇痛作用有密切关系,与郑平等‘。j用乌头碱进行的同类型实验所得结果一致. 为了进一步分析I,(:是DABA的原发作用部位?或是中间环节?向大鼠I。C注入20弘g DABA,结果在电刺激法及甩尾法上均未产生镇痛作用,而注入5pg吗啡则产生显著镇痛作用,提示I。C不是T)ABA镇痛的原发作用部位,而是其中间环节之一. 但它是吗啡的原发作用部位之一. 本文还发现PAG注射20肛g DABA只抑制舔足反应和嘶叫反应,而不抑制甩尾反应,怎佯解释这一
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